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提取鸡骨草相思子碱的方法   0    0

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专利申请流程有哪些步骤?
专利申请流程图
申请
申请号:指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。
申请日:提出专利申请之日。
2017-12-29
申请公布
申请公布指发明专利申请经初步审查合格后,自申请日(或优先权日)起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。
申请公布号:专利申请过程中,在尚未取得专利授权之前,国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。
申请公布日:申请公开的日期,即在专利公报上予以公开的日期。
2018-10-23
授权
授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由,授予发明专利权;或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由,授予实用新型专利权或外观设计专利权。
2021-09-03
预估到期
发明专利权的期限为二十年,实用新型专利权期限为十年,外观设计专利权期限为十五年,均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。
2037-12-29
基本信息
有效性 有效专利 专利类型 发明专利
申请号 CN201711483358.4 申请日 2017-12-29
公开/公告号 CN108558733B 公开/公告日 2021-09-03
授权日 2021-09-03 预估到期日 2037-12-29
申请年 2017年 公开/公告年 2021年
缴费截止日
分类号 C07D209/24 主分类号 C07D209/24
是否联合申请 独立申请 文献类型号 B
独权数量 1 从权数量 8
权利要求数量 9 非专利引证数量 1
引用专利数量 0 被引证专利数量 0
非专利引证 1、CN 102875443 A,2013.01.16CN 102432521 A,2012.05.02王冬梅 等.大孔吸附树脂在药用植物有效成分分离中的应用《.西北林学院学报》.2002,第17卷(第1期),第60-63页.;
引用专利 被引证专利
专利权维持 4 专利申请国编码 CN
专利事件 事务标签 公开、实质审查、授权
申请人信息
申请人 第一申请人
专利权人 广西汇智生产力促进中心有限公司 当前专利权人 广西汇智生产力促进中心有限公司
发明人 梁胜仁 第一发明人 梁胜仁
地址 广西壮族自治区贺州市电子科技园区正润大道1号 邮编 542899
申请人数量 1 发明人数量 1
申请人所在省 广西壮族自治区 申请人所在市 广西壮族自治区贺州市
代理人信息
代理机构
专利代理机构是经省专利管理局审核,国家知识产权局批准设立,可以接受委托人的委托,在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。
南宁胜荣专利代理事务所 代理人
专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务,取得一定资格的人。
梁山丹
摘要
本发明公开了一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法先将鸡骨草烘干、粉碎,然后加水用纤维素本酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,调节pH后用呈酸性,然后用壳聚糖澄清,然后用极性树脂吸附,再用盐酸洗脱,经纳滤膜过滤,醇沉后干燥制得。使用本方法2kg鸡骨草提取物含量为2085‑2351mg,纯度为96.1‑98.5%。
  • 摘要附图
    提取鸡骨草相思子碱的方法
法律状态
序号 法律状态公告日 法律状态 法律状态信息
1 2021-09-03 授权
2 2018-10-23 实质审查的生效 IPC(主分类): C07D 209/24 专利申请号: 201711483358.4 申请日: 2017.12.29
3 2018-09-21 公开
权利要求
权利要求书是申请文件最核心的部分,是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。
1.一种提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在28‑35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加酸调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.0‑3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用酸溶液重复结晶2‑3次,再用酸溶液溶解并调节pH4.3‑6.5,通过大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1‑2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为0.8‑3.5%。

2.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中烘干温度为45‑60℃,烘干时间为6‑8h,鸡骨草粉碎粒径为40‑80目。

3.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3‑10。

4.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8‑5.2%。

5.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2‑0.6:0.4‑0.8。

6.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中加酸调节溶液至pH4.2‑6.5。

7.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5‑3.6%。

8.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S2中纳滤膜截留分子量为240‑300。

9.根据权利要求1所述提取鸡骨草相思子碱的方法,其特征在于:所述步骤S2中乙醇溶液浓度85‑100%。
说明书

技术领域

[0001] 本发明涉及中药提取加工技术领域,具体涉及一种提取鸡骨草相思子碱的方法。

背景技术

[0002] 鸡骨草为豆科植物相思子(Abrus cantoniensis)的干燥全株,中药鸡骨草为豆科相思子属植物,以全株入药,具有利湿退黄,清热解毒,疏肝止痛之功效,是临床常用中药,用于黄疸,胁肋不好,胃脘胀痛,急慢性肝炎、乳腺炎,亦是我国出品中草药品种之一。全草含相思子碱(Abrine,即N‐甲基色氨酸)、胆碱(choline)、腺苷类、甾醇类、三萜皂苷类、黄酮类、氨基酸、糖类。
[0003] 相思子碱(abrine)又叫相思豆碱、N‑甲基色氨酸,为棱柱状结晶(水),分解点295℃,旋光度+44°(0.28g溶于10mL0.5mol/L盐酸中)。1g溶于约100mL甲醇,微溶于水,不溶于乙醚,溶于稀酸和碱。分子式C12H14N2O2,分子量218.25。目前已有关于鸡骨草提取相思子碱的方法,但仍存在着一些问题。
[0004] 公开号为CN102432521A的一种从鸡骨草中提取相思子碱的方法,其提取相思子碱的步骤为:a.取毛鸡骨草原料切段,加酸性水浸泡提取2‑3次,提取液过滤加入阳离子交换树脂中吸附,去离子水洗至中性,再用40‑90%乙醇溶液洗脱,洗脱液减压浓缩得浸膏;b.上述浸膏采用高速逆流色谱分离,紫外检测器在线监测,收集目标流分,减压干燥得相思子碱。但该方法相思子碱提取含量相对较低,且在分离过程中使用剧毒的氯仿,以及对人体神经有害的甲醇,不安全且有害于健康。
[0005] 公开号为CN102875443A的一种萃取相思子碱的方法,其萃取步骤如下:鸡骨草原料粉碎20‑80目,投入萃取釜,通入液态CO2和夹带剂,在压力20‑30MPa、温度40‑55℃条件下,萃取30‑60min,在压力5‑9MPa、温度40‑60℃条件下解析,得萃取物;上述萃取物用酸水溶解,用纳滤膜过滤,滤液再用反渗透膜浓缩,浓缩液调节pH5‑6加乙醇溶液醇沉,滤出得沉淀物用70‑99%甲醇溶液溶解重结晶2‑3次,即得相思子碱。该方法使用CO2在高压条件下萃取,生产工艺要求较高,投入成本高。
[0006] 因此,目前尚未见一种安全环保、投入低、提取高效的鸡骨草相思子碱提取方法。

发明内容

[0007] 为解决上述技术问题,本发明提供了一种提取鸡骨草相思子碱的方法。
[0008] 本发明是通过以下技术方案予以实现的:
[0009] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0010] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在28‑35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸或乙酸等酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.0‑3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0011] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2‑3次,再用稀盐酸或乙酸等酸溶液溶解并调节pH4.3‑6.5,通过大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1‑2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0012] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为0.8‑3.5%;真空冷冻干燥的真空度为150‑300Pa。
[0013] 所述步骤S1中烘干温度为45‑60℃,烘干时间为6‑8h,鸡骨草粉碎粒径为40‑80目。
[0014] 所述步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3‑10。
[0015] 所述步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8‑5.2%。
[0016] 所述步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2‑0.6:0.4‑0.8。
[0017] 所述步骤S1中加酸调节溶液至pH4.2‑6.5。
[0018] 所述步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5‑3.6%。
[0019] 所述步骤S2中盐酸溶液体积分数为10‑50%。
[0020] 所述步骤S2中纳滤膜截留分子量为240‑300。
[0021] 所述步骤S2中乙醇溶液浓度85‑100%。
[0022] 所述步骤S2中大孔树脂为AB‑8、HPD‑200A、HPD‑100C的一种。
[0023] 本发明的有益效果在于:本方法使用酶解法提取鸡骨草相思子碱具有以下优点:1、使用酶对鸡骨草进行酶解,反应条件温和,可以释放鸡骨草中的物质,提高相思子碱的提取率;2、壳聚糖溶液可以澄清溶液,活性炭可以脱色除杂;3、纳滤膜选择性地截留分子量为
240‑300,可以有效地除去非相思子碱的成分,提高提取的相思子碱纯度;4、乙醇极性相对弱,相思子碱在其中溶解度很小,极易形成沉淀,有利于相思子碱与其他成分的分离。使用本方法2kg鸡骨草提取物含量为2085‑2351mg,纯度为96.1‑98.5%。

实施方案

[0024] 以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述,但要求保护的范围并不局限于所述。
[0025] 实施例一
[0026] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0027] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在28℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.0%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0028] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH4.3,通过AB‑8大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0029] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为0.8%;真空冷冻干燥的真空度为150Pa。
[0030] 步骤S1中烘干温度为45℃,烘干时间为6h,鸡骨草粉碎粒径为40目。
[0031] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3。
[0032] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8%。
[0033] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2:0.4。
[0034] 步骤S1中加酸调节溶液至pH4.2。
[0035] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5%。
[0036] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为10%。
[0037] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为240。
[0038] 步骤S2中乙醇溶液浓度85%。
[0039] 实施例二
[0040] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0041] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在30℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0042] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次,再用稀盐酸溶液溶解并调节pH4.7,通过HPD‑100C大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0043] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为1.3%;真空冷冻干燥的真空度为180Pa。
[0044] 步骤S1中烘干温度为48℃,烘干时间为6.5h,鸡骨草粉碎粒径为50目。
[0045] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:5。
[0046] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的2.1%。
[0047] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.3:0.5。
[0048] 步骤S1中加酸调节溶液至pH4.8。
[0049] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的1.1%。
[0050] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为21%。
[0051] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为245。
[0052] 步骤S2中乙醇溶液浓度89%。
[0053] 实施例三
[0054] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0055] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在31℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸或乙酸等酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为2.2%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0056] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用稀盐酸或乙酸等酸溶液溶解并调节pH5.4,通过HPD‑200A大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0057] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为2.3%;真空冷冻干燥的真空度为200Pa。
[0058] 步骤S1中烘干温度为52℃,烘干时间为7.2h,鸡骨草粉碎粒径为62目。
[0059] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:7.3。
[0060] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的3.9%。
[0061] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.7。
[0062] 步骤S1中加酸调节溶液至pH5.6。
[0063] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的2.8%。
[0064] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为42%。
[0065] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为266。
[0066] 步骤S2中乙醇溶液浓度95%。
[0067] 实施例四
[0068] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0069] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸等酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0070] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH6.1,通过HPD‑100C大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0071] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为2.9%;真空冷冻干燥的真空度为240Pa。
[0072] 步骤S1中烘干温度为58℃,烘干时间为8h,鸡骨草粉碎粒径为75目。
[0073] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:9。
[0074] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的4.6%。
[0075] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.8。
[0076] 步骤S1中加酸调节溶液至pH5.5。
[0077] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.2%。
[0078] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为45%。
[0079] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为300。
[0080] 步骤S2中乙醇溶液浓度100%。
[0081] 实施例五
[0082] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0083] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0084] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH6.5,通过HPD‑200A大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0085] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为3.5%;真空冷冻干燥的真空度为300Pa。
[0086] 步骤S1中烘干温度为60℃,烘干时间为8h,鸡骨草粉碎粒径为80目。
[0087] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:10。
[0088] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的5.2%。
[0089] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.6:0.4。
[0090] 步骤S1中加酸调节溶液至pH6.5。
[0091] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.6%。
[0092] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为50%。
[0093] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为240。
[0094] 步骤S2中乙醇溶液浓度85%。
[0095] 实验例一
[0096] 公开号为CN102432521A的一种从鸡骨草中提取相思子碱的方法,其提取相思子碱的步骤为:鸡骨草切段,每次8倍量pH2的盐酸水溶液常温浸泡4小时,提取2次,提取液过滤后加入732阳离子交换树脂柱中吸附,去离子水洗至中性,再取6BV60%乙醇溶液洗脱,收集洗脱液减压浓缩得12g粗提物。取氯仿、甲醇、水按5:4:2混合,充分分层后,取下相注满高速逆流色谱柱,同时开转主机750rpm,泵入上相做流动相,待系统平衡后,流速调节为3mL/min,同时用流动相溶解粗提物,由进样阀进样,紫外检测器监测,收集目标流分,连续分离,合并流分减压干燥得白色粉末相思子碱。
[0097] 实验例二
[0098] 公开号为CN102875443A的一种萃取相思子碱的方法,其萃取步骤如下:鸡骨草粉碎80目,通入液态CO2,调节压力27MPa、温度45℃,达到上述参数,再通入80%甲醇溶液,萃取50min,在压力5MPa、温度60℃条件下解析萃取物。所得萃取物用pH2的硫酸水溶液溶解,用截留分子量500的中空纤维素膜纳滤,滤液再用反渗透膜浓缩,浓缩液调节pH5加乙醇溶液醇沉,滤出得沉淀物用90%甲醇溶液溶解重结晶2次,干燥得相思子碱。
[0099] 取鸡骨草14kg,平均分成7份,每份2kg,分别按实施例一、实施例二、实施例三、实施例四、实施例五、实验例一、实验例二的方法提取相思子碱,并使用HPLC测定提取物中相思子碱的含量,结果如表1所示。
[0100] 表1鸡骨草相思子碱提取结果
[0101] 项目 提取物重量/mg 提取物中相思子碱含量/%实施例一 2140 98.5
实施例二 2351 96.1
实施例三 2085 97.3
实施例四 2245 97.8
实施例五 2336 98.2
实验例一 1100 96.5
实验例二 1850 97.2
[0102] 从上表可知,采用本方法在不同条件下提取2kg鸡骨草,提取物重量为2085‑2351mg,提取物中相思子碱含量为96.1‑98.5%,基本上均高于实验例一的提取物重量
1100mg,提取物中相思子碱含量为96.5%,实验例二的提取物重量1850mg。因此,采用本方法提取鸡骨草中的相思子碱相较现有技术具有显著的效果,有较大的应用价值。
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