[0024] 以下结合实施例对本发明的技术方案作进一步描述,但要求保护的范围并不局限于所述。
[0025] 实施例一
[0026] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0027] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在28℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.0%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0028] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH4.3,通过AB‑8大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0029] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为0.8%;真空冷冻干燥的真空度为150Pa。
[0030] 步骤S1中烘干温度为45℃,烘干时间为6h,鸡骨草粉碎粒径为40目。
[0031] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:3。
[0032] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的0.8%。
[0033] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.2:0.4。
[0034] 步骤S1中加酸调节溶液至pH4.2。
[0035] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的0.5%。
[0036] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为10%。
[0037] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为240。
[0038] 步骤S2中乙醇溶液浓度85%。
[0039] 实施例二
[0040] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0041] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在30℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为1.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0042] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次,再用稀盐酸溶液溶解并调节pH4.7,通过HPD‑100C大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0043] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为1.3%;真空冷冻干燥的真空度为180Pa。
[0044] 步骤S1中烘干温度为48℃,烘干时间为6.5h,鸡骨草粉碎粒径为50目。
[0045] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:5。
[0046] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的2.1%。
[0047] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.3:0.5。
[0048] 步骤S1中加酸调节溶液至pH4.8。
[0049] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的1.1%。
[0050] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为21%。
[0051] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为245。
[0052] 步骤S2中乙醇溶液浓度89%。
[0053] 实施例三
[0054] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0055] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在31℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸或乙酸等酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为2.2%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0056] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用稀盐酸或乙酸等酸溶液溶解并调节pH5.4,通过HPD‑200A大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0057] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为2.3%;真空冷冻干燥的真空度为200Pa。
[0058] 步骤S1中烘干温度为52℃,烘干时间为7.2h,鸡骨草粉碎粒径为62目。
[0059] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:7.3。
[0060] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的3.9%。
[0061] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.7。
[0062] 步骤S1中加酸调节溶液至pH5.6。
[0063] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的2.8%。
[0064] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为42%。
[0065] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为266。
[0066] 步骤S2中乙醇溶液浓度95%。
[0067] 实施例四
[0068] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0069] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸等酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0070] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶2次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH6.1,通过HPD‑100C大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱1次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0071] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为2.9%;真空冷冻干燥的真空度为240Pa。
[0072] 步骤S1中烘干温度为58℃,烘干时间为8h,鸡骨草粉碎粒径为75目。
[0073] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:9。
[0074] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的4.6%。
[0075] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.5:0.8。
[0076] 步骤S1中加酸调节溶液至pH5.5。
[0077] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.2%。
[0078] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为45%。
[0079] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为300。
[0080] 步骤S2中乙醇溶液浓度100%。
[0081] 实施例五
[0082] 一种提取鸡骨草相思子碱的方法,该方法包括以下步骤:
[0083] S1:鸡骨草烘干、粉碎,加水,灭菌,在35℃温度下加入纤维素酶、蛋白酶、果胶酶进行酶解,加稀盐酸溶液调节使溶液pH呈酸性,再加入质量浓度为3.5%的壳聚糖溶液,搅拌均匀后静置,过滤取滤液;
[0084] S2:滤液经活性炭脱色除杂,浓缩干燥,使用稀盐酸或乙酸等酸溶液重复结晶3次,再用乙酸等酸溶液溶解并调节pH6.5,通过HPD‑200A大孔树脂吸附,加入盐酸溶液洗脱,洗脱2次得洗脱液,调节洗脱液pH至中性用纳滤膜过滤取滤液,再经活性炭脱色除杂,加入乙醇溶液搅均,过滤取沉淀;
[0085] S3:沉淀经真空冷冻干燥得鸡骨草相思子碱,含水率为3.5%;真空冷冻干燥的真空度为300Pa。
[0086] 步骤S1中烘干温度为60℃,烘干时间为8h,鸡骨草粉碎粒径为80目。
[0087] 步骤S1中鸡骨草粉与水的质量比为1:10。
[0088] 步骤S1中加入的纤维素酶、蛋白酶、果胶酶总量为鸡骨草重量的5.2%。
[0089] 步骤S1中纤维素酶、蛋白酶、果胶酶的重量比为1:0.6:0.4。
[0090] 步骤S1中加酸调节溶液至pH6.5。
[0091] 步骤S1中加入壳聚糖溶液体积为溶液体积的3.6%。
[0092] 步骤S2中盐酸溶液体积分数为50%。
[0093] 步骤S2中纳滤膜截留分子量为240。
[0094] 步骤S2中乙醇溶液浓度85%。
[0095] 实验例一
[0096] 公开号为CN102432521A的一种从鸡骨草中提取相思子碱的方法,其提取相思子碱的步骤为:鸡骨草切段,每次8倍量pH2的盐酸水溶液常温浸泡4小时,提取2次,提取液过滤后加入732阳离子交换树脂柱中吸附,去离子水洗至中性,再取6BV60%乙醇溶液洗脱,收集洗脱液减压浓缩得12g粗提物。取氯仿、甲醇、水按5:4:2混合,充分分层后,取下相注满高速逆流色谱柱,同时开转主机750rpm,泵入上相做流动相,待系统平衡后,流速调节为3mL/min,同时用流动相溶解粗提物,由进样阀进样,紫外检测器监测,收集目标流分,连续分离,合并流分减压干燥得白色粉末相思子碱。
[0097] 实验例二
[0098] 公开号为CN102875443A的一种萃取相思子碱的方法,其萃取步骤如下:鸡骨草粉碎80目,通入液态CO2,调节压力27MPa、温度45℃,达到上述参数,再通入80%甲醇溶液,萃取50min,在压力5MPa、温度60℃条件下解析萃取物。所得萃取物用pH2的硫酸水溶液溶解,用截留分子量500的中空纤维素膜纳滤,滤液再用反渗透膜浓缩,浓缩液调节pH5加乙醇溶液醇沉,滤出得沉淀物用90%甲醇溶液溶解重结晶2次,干燥得相思子碱。
[0099] 取鸡骨草14kg,平均分成7份,每份2kg,分别按实施例一、实施例二、实施例三、实施例四、实施例五、实验例一、实验例二的方法提取相思子碱,并使用HPLC测定提取物中相思子碱的含量,结果如表1所示。
[0100] 表1鸡骨草相思子碱提取结果
[0101] 项目 提取物重量/mg 提取物中相思子碱含量/%实施例一 2140 98.5
实施例二 2351 96.1
实施例三 2085 97.3
实施例四 2245 97.8
实施例五 2336 98.2
实验例一 1100 96.5
实验例二 1850 97.2
[0102] 从上表可知,采用本方法在不同条件下提取2kg鸡骨草,提取物重量为2085‑2351mg,提取物中相思子碱含量为96.1‑98.5%,基本上均高于实验例一的提取物重量
1100mg,提取物中相思子碱含量为96.5%,实验例二的提取物重量1850mg。因此,采用本方法提取鸡骨草中的相思子碱相较现有技术具有显著的效果,有较大的应用价值。