[0018] 通过以下给出的具体实施例，可以进一步清楚地了解本发明。
[0019] 实施例1 波罗蜜中异戊烯基黄酮类成分的制备
[0020] 取波罗蜜根药材(17Kg)，用95％乙醇渗漏提取，提取液减压浓缩得浸膏1.5Kg。浸膏以2L水混悬，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取(体积比1∶1)，并分别浓缩至干。取氯仿萃取部位浸膏532g，HP-20大孔吸附树脂拌样(重量比1∶1)，上HP-20大孔吸附树脂柱(柱规格：15*55cm，5.3Kg)，以乙醇-水梯度洗脱(0～95％)，最后用丙酮冲洗。取60％乙醇洗脱流份，以乙醇-水(2∶5，9∶10)进行ODS反相硅胶柱色谱得6个流份：A～F。流份C以乙醇-水(3∶5，9∶10)进行MCI柱色谱得流份C1～C7。C4和C7流份经过进一步的处理获得本发明所述的7个异戊烯基黄酮，具体步骤如下：
[0021] (1)流份C4上Sephadex LH-20凝胶柱(甲醇洗脱)，所得流份经反相C18制备色谱得化合物2(8mg)、3(10mg)、4(6mg)。
[0022] (2)流份C7经反相C18制备色谱得化合物1(2mg)、5(33mg)、6(10mg)及7(11mg)。
[0023] 实施例2 波罗蜜中异戊烯基黄酮类成分的结构鉴定
[0024] 所分离的单体，经高分辨质谱(HR-ESI-MS)和核磁共振谱(1D NMR和2D NMR)鉴定为7个异戊烯基化黄酮类化合物。其中，化合物1-5为已知化合物，而化合物6和7为两个未见文献报道的新化合物。
[0025] 其中，化合物1被鉴定为5′-hydroxycudraflavone A。C25H22O7，黄色无定型粉末。1H NMR(CD3OD，600MHz)δppm 7.15(1H，s，H-6′)、6.65(1H，d，J＝10.0Hz，H-16)、6.39(1H，s，H-H-3′)、6.35(1H，s，H-8)、6.10(1H，d，J＝9.0Hz，H-11)、5.69(1H，d，J＝10.0Hz，H-17)、5.4413
(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)、1.97(3H，s，H-15)、1.70(3H，s，H-14)、1.47(6H，s，H-19，20)；C NMR(CD3OD，150MHz)δppm：157.7(C-2)、110.5(C-3)、179.6(C-4)、157.8(C-5)、106.5(C-6)、
160.3(C-7)、96.0(C-8)、157.3(C-9)、106.3(C-10)、70.2(C-11)、122.3(C-12)、139.7(C-
13)、26.0(C-14)、18.7(C-15)、116.1(C-16)、129.5(C-17)、79.1(C-18)、28.5(C-19，20)、
107.6(C-1′)、153.5(C-2′)、105.4(C-3′)、152.6(C-4′)、142.0(C-5′)、109.9(C-6′)。
[0026] 其中，化合物2被鉴定为atochamin B。C25H24O7，黄色无定型粉末。1H NMR(CD3OD，600MHz)δppm 7.15(1H，s，H-6′)、6.43(1H，s，H-6)、6.36(1H，s，H-3′)、6.11(1H，d，J＝
9.0Hz，H-11)、5.44(1H，d，J＝9.0Hz，H-12)、5.24(1H，t，J＝7.2Hz，H-2”)、3.30(2H，d，J＝
7.2Hz，H-1″)、1.95(3H，s，H-15)、1.79(3H，s，H-5″)、1.71(3H，s，H-14)、1.68(3H，s，H-4″)；
13C NMR(CD3OD，150MHz)δppm 157.2(C-2)、109.9(C-3)、179.6(C-4)、160.1(C-5)、99.9(C-
6)、163.0(C-7)、107.4(C-8)、156.4(C-9)、105.5(C-10)、70.2(C-11)、122.5(C-12)、139.5(C-13)、26.0(C-14)、18.7(C-15)、22.2(C-1″)、123.5(C-2″)、132.0(C-3″)、26.0(C-4″)、
17.9(C-5″)、108.0(C-1′)、152.4(C-2′)、105.4(C-3′)、153.0(C-4′)、141.9(C-5′)、110.5(C-6′)。
[0027] 其中，化合物3被鉴定为artelastoxanthone。C25H22O7，黄色无定型粉末。1H NMR(CD3OD，600MHz)δppm 6.77(1H，d，J＝10.0Hz，H-16)、6.45(1H，d，J＝2.0Hz，H-8)、6.21(1H，d，J＝2.0Hz，H-6)、5.70(1H，d，J＝10.0Hz，H-17)、4.68(1H，s，H-14α)、4.27(1H，s，H-14β)、3.96(1H，d，J＝6.3Hz，H-12)、3.36(1H，dd，J＝6.7，15.8Hz，H-11α)、2.44(1H，dd，J＝6.7，
15.8Hz，H-11β)、1.80(3H，s，H-15)、1.50(3H，s，H-20)、1.49(3H，s，H-19)；13C NMR(CD3OD，
150MHz)δppm 162.1(C-2)、112.2(C-3)、181.6(C-4)、163.0(C-5)、100.0(C-6)、165.4(C-
7)、95.0(C-8)、158.1(C-9)、105.0(C-10)、22.6(C-11)、38.4(C-12)、145.6(C-13)、112.0(C-14)、21.9(C-15)、117.7(C-16)、129.9(C-17)、78.5(C-18)、28.1(C-19)、28.1(C-20)、
108.2(C-1′)、146.3(C-2′)、111.5(C-3′)、145.8(C-4′)、137.6(C-5′)、129.7(C-6′)。
[0028] 其中，化合物4被鉴定为artoindonesianin Q。C22H22O7，黄色无定型粉末。1H NMR(CD3OD，600MHz)δppm 6.75(1H，s，H-6′)、6.62(1H，s，H-3′)、6.46(1H，d，J＝2.2Hz，H-8)、6.32(1H，d，J＝2.2Hz，H-6)、5.08(1H，t，J＝7.0Hz，H-12)、3.89(3H，s，MeO-7)、3.74(3H，s，MeO-4′)、3.04(2H，d，J＝6.7Hz，H-11)、1.61(3H，s，H-15)、1.40(3H，s，H-14)；13C NMR(CD3OD，150MHz)δppm 163.0(C-2)、122.2(C-3)、183.6(C-4)、163.3(C-5)、98.8(C-6)、
167.0(C-7)、92.8(C-8)、159.6(C-9)、106.1(C-10)、24.9(C-11)、122.6(C-12)、132.8(C-
13)、25.9(C-14)、17.6(C-15)、113.5(C-1′)、149.8(C-2′)、101.3(C-3′)、152.5(C-4′)、
139.9(C-5′)、117.8(C-6′)、56.6(7-OCH3)、56.3(4′-OCH3)。
[0029] 其中，化合物5被鉴定为kuwanon T。C25H26O6，黄色无定型粉末。1H NMR(CD3OD，600MHz)δppm 6.91(1H，d，J＝8.3Hz，H-6′)、6.46(1H，d，J＝2.1Hz，H-8)、6.45(1H，d，J＝
8.3Hz，H-5′)、6.19(1H，d，J＝2.1Hz，H-6)、5.26(1H，m，H-2")、5.10(1H，m，H-12)、3.40(2H，d，J＝7.0Hz，H-1″)、3.09(2H，d，J＝7.0Hz，H-11)、1.80(3H，s，H-5″)、1.69(3H，s，H-4")、
13
1.59(3H，s，H-15)、1.35(3H，s，H-14)；C-NMR(CD3OD，150MHz)δppm 163.2(C-2)、122.1(C-
3)、183.7(C-4)、163.6(C-5)、99.5(C-6)、165.5(C-7)、94.6(C-8)、159.3(C-9)、105.5(C-
10)、113.8(C-1′)、154.7(C-2′)、117.7(C-3′)、159.0(C-4′)、108.1(C-5′)、128.8(C-6′)、
23.3(C-1″)、124.0(C2″)、131.9(C-3″)、18.0(C-4″)、26.0(C-5″)、24.8(C-11)、122.6(C-
12)、132.8(C-13)、17.6(C-14)、25.9(C-15)。
[0030] 其中，化合物6为一种红色无定形粉末，HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z379.0821([M-H]-，计算值：379.0823)，确定其分子式为C21H16O7。红外光谱(vmax 3355，1654，1633，1614，1512，1450cm-1)和紫外光谱(λmax 256，308nm)显示化合物6具有异戊烯基黄酮类化合物的典型的吸收特性。化合物6的氢谱显示了以下质子信号：苯环上间位耦合的两个氢质子δH 6.53(1H，d，J＝1.8Hz，H-8)和6.32(1H，d，J＝1.8Hz，H-6)；一个醌型质子δH 6.02(1H，s)；
一个甲氧基δH 3.89(MeO-4′)；以-CH2-CH-C(CH3)＝CH2片段形式出现的一个部分环化的异戊烯基δH 4.79，4.59(each 1H，brs，H2-14)，3.84(1H，d，J＝8.4Hz，H-12)，3.42(1H，d，J＝
16.8Hz，Ha-11)，2.63(1H，dd，J＝16.8，8.4Hz，Hb-11)和1.82(3H，s，H-15)。化合物6的1H-NMR谱与已知化合物artomunoxanthone非常相似，不同的是6的氢谱中没有出现
artomunoxanthone在C-7/C-8位拼接的2，2-二甲基吡喃环的质子信号，而是多了一个芳香质子信号δH 6.53(1H，s，H-8)。这表明6的C-8位并不存在如artomunoxanthone那样的异戊烯基取代。这个结论在6的13C-NMR谱可以得到进一步解释：6的13C NMR和DEPT谱显示有21个碳信号，即3个羰基碳，10个sp2杂化的季碳(5个被氧化)，3个sp2杂化的次甲基碳，1个sp2杂化的亚甲基碳，1个sp3杂化的次甲基碳，1个sp3杂化的亚甲基碳，1个sp3杂化的甲基碳及1个甲氧基。除了个别碳(如C-3，5，8，1′和6′)外，6的13C-NMR谱的化学位移值与
artomunoxanthone非常相似。通过HSQC和HMBC，我们归属了6的所有质子和碳原子的信号，并确定了各个取代基的连接位置，最终获得6的化学结构。化合物6为一个新的异戊烯基取代黄酮，我们命名为artoheteroid A。
[0031] 其中，化合物7为一种橙色无定形粉末。HR-ESI-MS给出准分子离子峰m/z 395.0771([M-H]-，计算值：395.0772)，确定其分子式为C21H16O8。化合物7与6的UV，IR，和1H
13
NMR谱非常相似，表明7也属于异戊烯基黄酮类化合物。7的 C NMR谱显示3个羰基碳信号δc
179.4，184.9和183.7，进一步证实7和6具有一样的醌型结构单元。比较6和7的13C NMR数据可见，7的碳谱化学位移值与6基本一致。仅有的差异在于C-1′和C-6′。7的C-1′和C-6′信号分别出现在δc 56.2和67.9，与6相比均有超过75ppm的高场位移。这种位移来自于醌环的进一步氧化形成的C-1′/C-6′位三元氧环的屏蔽效应。通过HSQC和HMBC谱，我们归属了7的所有质子和碳原子的信号，并确定了各个取代基的连接位置，最终获得7的化学结构。化合物7也是一个新的异戊烯基取代黄酮，我们将之命名为artoheteroid B。
[0032] 表1 新异戊烯基黄酮artoheteroids A-B的氢谱和碳谱数据
[0033]
[0034] 实施例3 波罗蜜中异戊烯基黄酮对CatK的抑制活性实验
[0035] 将40μL CatK(用0.1％Brii35稀释)加入96孔板。随后加入35μL含有待测化合物的缓冲溶液(含400mM NaH2PO4-Na2HPO4缓冲液，88mM DTT和4mM EDTA，pH 6.8)，在25°条件下保温10分钟，使化合物与酶充分结合。然后将25μL底物Z-GPR-AMC(1％DMSO稀释)加入到混合物中开始反应。底物和CatK的最终浓度分别为5μM和5.6μM，每个孔的总体积为100μL。该反应体系在37℃条件下培养2h后，加入50μL反应终止液(含100mM CH3COOH-CH3COONa，100mM Cl3CCOONa，pH 4.3)到每个孔中。用Omega微孔分光光度计(BMG LABTECH，德国)在355nm激发光和460nm发射光下，检测反应体系中的AMC荧光信号强度。根据荧光值计算各个化合物的抑制率IP。测定多浓度的抑制率，采用新药数据统计处理软件(NDST-21世纪版)计算IC50值。
[0036] IP的计算公式为：
[0037]
[0038] 式中，F1为加入酶和样品后的本底值；F2为样品孔的荧光值，含样品、酶、底物和缓冲液；F3为只有缓冲液和底物的空白值；F4为酶的正常活性值，含酶、底物和缓冲液。
[0039] 表2是本发明所述7个异戊烯基黄酮类化合物对CatK抑制活性实验结果(IC50 inμM)。
[0040] 表2 波罗蜜中异戊烯基黄酮对CatK的抑制活性
[0041]
