[0024] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0025] 需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0026] 本发明提供一种吖啶衍生物，其特征在于，
[0027] 1)该化合物的化学名称为2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑；
[0028] 2)结构式为：
[0029]
[0030] 相对分子量：366.42；
[0031] 3)理化性质：褐色针状晶体，产率45％；m.p.205-207℃；FAB-MS m/z:394([M+H]+)；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.37(d,J＝8.2Hz,1H,ArH),8.28(d,J＝8.3Hz,1H,ArH),8.20(s,1H,三唑环上CH),7.99(d,J＝8.7Hz,2H,ArH),7.85(t,J＝7.2Hz,1H,ArH),7.72(d,J＝8.5Hz,1H,ArH),7.64–7.51(m,2H,ArH),7.31(s,1H,ArH),7.08(d,J＝8.6Hz,2H,ArH),3.92(s,3H,-OCH3),2.53(s,3H,-CH3)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)，δ160.14,152.49,148.13,
147.93,138.98,134.45,130.93,128.80,128.27,127.37,122.76,122.47,122.39,120.45,
114.55,55.42,22.20；IR(KBr)ν:2835–3074(吡啶类C—H,N—H),1303-1614(-C＝N,三唑环的伸缩振动)cm-1
[0032] 该吖啶衍生物2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑的制备方法，包括：
[0033] 步骤一、以邻溴苯甲酸和对甲基苯胺为原料，碳酸钾和铜粉为催化剂，加入正戊醇作为溶剂，经乌尔曼反应得到化合物N-苯基-2-甲基邻氨基苯甲酸；
[0034] 步骤二、将N-苯基-2-甲基邻氨基苯甲酸以三氯氧磷关环，制得2-甲基-9-氯吖啶；
[0035] 步骤三、取2-甲基-9-氯吖啶溶于DMF中，与叠氮化钠进行亲核取代反应后制得化合物2-甲基-9-叠氮吖啶；
[0036] 步骤四、取对甲氧基苯乙炔溶于叔丁醇水溶液中，然后加入维生素C钠、无水硫酸铜以及2-甲基-9-叠氮吖啶进行反应，所得反应物抽滤，滤饼重结晶，即得到所述2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑。
[0037] 实施例1
[0038] 所述的吖啶衍生物7-苯并[b]-[1,10]邻菲咯啉吡啶甲酰胺基硫脲具体制备方法包括以下步骤：
[0039] 步骤A、将5.2重量份的邻溴苯甲酸、3.6重量份的邻甲基苯胺、7.5重量份的碳酸钾和0.3重量份的铜粉混合，再加入24.3重量份的异戊醇作为溶剂，在140℃下回流搅拌2h，反应结束后，减压蒸除溶剂，所得残留物加600重量份水，在80℃下反应20min，趁热过滤，洗涤滤饼，合并水层，水层用浓盐酸酸化至pH等于2，此时析出大量淡绿色沉淀，抽滤，所得固体用氯仿重结晶，得到化合物N-苯基-2-甲基邻氨基苯甲酸；
[0040] 步骤B、将4.09重量份的N-苯基-2-甲基邻氨基苯甲酸与11.84重量份的三氯氧磷混合，于15min内油浴上加热至85～90℃，当发生剧烈反应时，立即撤去热浴，若反应过于猛烈，用冷水冷却烧瓶，待沸腾趋缓，油浴温度升高至135～140℃，反应2h，反应结束后，剩余物在冷却后缓慢倾入充分搅拌的浓氨水、碎冰和氯仿的混合物中，用氯仿和氨水混合物洗涤烧瓶，30min后不再有未溶解的固体物，分离出氯仿层，水层继续用氯仿萃取，合并氯仿层，无水氯化钙干燥过夜，过滤，蒸除溶剂，得到淡绿色固体2-甲基-9-氯吖啶；
[0041] 步骤C、将0.49重量份的2-甲基-9-氯吖啶溶于19重量份的DMF中，再加入0.13重量份的叠氮化钠和10重量份的水，在60℃条件下反应2h，静置，有晶体析出，分离，得到得淡绿色晶体即2-甲基-9-叠氮吖啶；
[0042] 步骤D、将0.12重量份的对甲氧基苯乙炔加入12.3重量份的叔丁醇和1重量份的水混合，再加入0.04重量份的维生素C钠、0.02重量份的无水硫酸铜以及0.25重量份的2-甲基-9-叠氮吖啶，60℃条件下反应1h，抽滤，水洗涤，用乙腈重结晶，得褐色块状晶体即为2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑。
[0043] 实施例2
[0044] 体外抗肿瘤活性实验
[0045] 实验试剂
[0046] 缓冲溶液(pH＝7.43)为0.05moL·L-1的磷酸缓冲溶液(PBS)；二甲基亚砜(DMSO)为国产分析纯，PPMI1640培养液，高糖DEME培养液，DMEM培养液是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基，是在MEM培养基的基础上研制的，胎牛乳清(FBS)，0.05％胰蛋白酶(trypsin)-0.02％，EDTA等均购自美国GIBCO公司。细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT)购于Sigma公司。
[0047] 实验仪器
[0048] BCN-1360超净工作台(哈尔滨东联)，Forma 3110 CO2培养箱(USA)，TECAN Infinite M200酶标仪(Mannedorf,Switzerland)，倒置显微镜(Nikon)，7度恒温箱(北京福意联)，全自动洗板机(上海精睿生物)，96孔细胞培养板(Costar,USA)。
[0049] 实验方法
[0050] 细胞的培养和传代
[0051] 所选细胞株均置于37℃、5％CO2充分湿化条件下的培养箱中，接种于含10％灭活新生牛血清的PPMI1640培养液中培养。用倒置显微镜观察细胞生长情况，每周更换2～3次培养基，6～7天传代一次，接种时以0.25％胰蛋白酶消化传代，通常取传代3～4次，处于对数生长期细胞用于实验。
[0052] 药液的配制
[0053] 准确称取被测样品，加到灭菌的1.5mL离心管中，加入DMSO配成2mM化合物储备液，-20℃冷冻保存。临用前融化后用适量D-hanks稀释成相应浓度应用。实验测定选用的化合物浓度分别为20μM。
[0054] MTT实验方法
[0055] 取处于对数生长期的细胞，每孔180μL(约4500-5000个细胞)含细胞的培养基接种于96孔培养板，于37℃、5％CO2充分湿化条件下培养24h。待细胞贴壁后，按每孔20μL的量加入样品，每个样品设6个复孔，同时设定相应的空白对照。继续培养48h后，每孔加入10μL MTT试剂(浓度为2mg/mL)，继续孵育4h后，吸弃上清液，每孔再加入150μL DMSO，轻微震荡反应5-8min，使结晶颗粒充分溶解。空白对照组调零，用酶标仪以490nm波长测定去除本底光吸收值后的吸光度值( 值)，用5个浓度梯度做相应细胞株的IC50值，所有实验均重复3次后取平均值。
[0056] 将实施例1得到的2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑与MGC-803、BEL-7404、NCI-H460细胞株作用时间72小时，结果如表1所示：
[0057] 表1 2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑对肿瘤细胞株的半数有效浓度(IC50)
[0058]细胞株 MGC-803 BEL-7404 NCI-H460
IC50(μg/mL) 11.29±2.13 29.69±2.93 40.48±2.55
[0059] 从表1的结果可以看出，本发明的2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑经体外抗肿瘤实验表明，该化合物具有强的抗肿瘤活性。本发明为研究开发新的吖啶型抗肿瘤药物提供了新的思路。
[0060] 实施例3
[0061] 2-甲基-9-吖啶(对甲氧苯基)-1,2,3-三唑抗血管生成活性的测定[0062] 斑马鱼给药方式：显微镜下挑选正常发育斑马鱼24hpf胚胎，浸入1g.L－1链霉蛋白酶脱膜，剔除受损胚胎，移入12孔培养板，每孔20枚胚胎。各药物经DMSO助溶后，用Holt －1buffer稀释成1mg.L 的药物浓度，同时设空白对照组(含等量助溶剂)的实验组，28℃恒温控光孵化48h。
[0063] NBT/BCIP血管染色：将发育72hpf的斑马鱼胚胎浸入4％多聚甲醛固定，梯度乙醇渗透脱水，逐渐浸润后置于NTMT缓冲液中平衡，分别加入NBT和BCIP染色，脱色液脱色，Olym.p.us显微镜拍照观察72hpf时胚胎肠下静脉血管(SIVs)生长情况，评价化合物对斑马鱼胚胎血管生成的影响。
[0064] 如图1和图2所示，其中图1为采用本发明吖啶衍生物处理斑马鱼胚胎的肠下静脉血管(SIVs)生长情况图，图2为空白对照组的斑马鱼胚胎的肠下静脉血管(SIVs)生长情况图，处理组的斑马鱼胚胎SIVs生长均有抑制，主要表现为肠下篮状血管网面积缩小，网中血管分支减少。此外，运用Image J软件测量胚胎SIVs长度，定量评价化合物对72hpf斑马鱼胚胎血管生成的影响，计算结果为本发明吖啶衍生物血管长度为846.78±3.27μm，空白斑马鱼血管长度为1189.42±5.76μm，化合物具有抑制血管生成的作用。
[0065] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
