[0005] 本发明的目的在于提供一种荧光传感器的制备方法，利用TTE DNA(聚T两头被系住的DNA)模板制备出荧光性能更好的铜纳米粒子作为传感器。
[0006] 本发明还提供了一种检测酪氨酸酶的方法，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝灭TTE DNA铜纳米粒子荧光的原理，来达到定量检测酪氨酸酶的目的。
[0007] 本发明提供的一种荧光传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0008] 1)DNA 1和DNA2分别用缓冲溶液稀释，分别得到DNA 1溶液和DNA 2溶液，待用；
[0009] 2)混合稀释后的DNA 1溶液和DNA2溶液，培养，使DNA 1和DNA 2碱基互补配对；
[0010] 3)培养结束后，加入抗坏血酸钠溶液和CuSO4溶液，得到TTE DNA铜纳米粒子，荧光传感器制备完成。
[0011] 步骤1)中所述缓冲液为10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液。
[0012] 步骤1)具体为：分别将DNA 1和DNA 2用10mM PH＝7.6的MOPS的缓冲溶液稀释到100μM，得到DNA 1溶液和DNA2溶液；
[0013] DNA 1序列：GCAGAGTTGAGACCAT30TCAGAAGGCAAAAAA；
[0014] DNA 2序列：TTTTTTGCCTTCTGAT30TGGTCTCAACTCTGC；
[0015] 优选的，制备的得到DNA 1溶液和DNA 2溶液储存在4℃中至少24小时后可用。
[0016] 步骤2)中所述培养是指：在室温条件下培养15-30min。优选的，在均匀摇速下培养。
[0017] 步骤2)具体为：将步骤1)制备的100μM DNA 1溶液和100μM的DNA 2溶液各取1μL，混合，室温下培养15-30min。
[0018] 步骤3)具体为：将培养后的混合溶液置于240μL的MOPS缓冲溶液中，然后加入16μL 100mM的抗坏血酸钠和8μL10mM的CuSO4溶液，室温下反应10-20min，即可。
[0019] 进一步的，在步骤3)加入抗坏血酸钠溶液和CuSO4溶液之前加入琼脂糖溶液，即可制备得到凝胶状荧光传感器。
[0020] 进一步的，步骤3)中所述凝胶状荧光传感器的制备方法为：
[0021] DNA 1溶液和DNA 2溶液培养结束后，加入琼脂糖溶液，混合；然后，加入抗坏血酸钠，混匀后，加热融化琼脂糖粉末，凝固前置于容器中，室温下冷却，得到TTE DNA水凝胶，将CuSO4溶液注射到TTE DNA水凝胶中，反应后，即凝胶状荧光传感器。
[0022] 所述琼脂糖溶液的制备方法为：将0.15g琼脂糖粉末加入到240μL的MOPS缓冲溶液中，即可。
[0023] 具体的，所述凝胶状荧光传感器的制备方法为：
[0024] 将制备的100μM DNA 1溶液和100μM的DNA2溶液各取1μL，混合，室温下培养15-30min，然后，将0.15g琼脂糖粉末加入到240μL的MOPS缓冲溶液中得到的琼脂糖溶液加入其中，混匀后，加入16μL 100mM的抗坏血酸钠溶液，混合均匀后，用微波炉加热融化琼脂糖粉末，没有凝固前倒入容器中，室温下冷却即TTE DNA水凝胶，然后注射80μL 10mM的CuSO4溶液在制备好的TTE DNA水凝胶中，反应10min，即得凝胶状荧光传感器。
[0025] 一种检测酪氨酸酶的方法，检测方法为：
[0026] 向制备的荧光传感器中加入不同浓度的酪氨酸酶溶液，3min后用荧光仪记录体系的荧光强度，根据不同浓度的酪氨酸酶溶液猝灭TTE DNA铜纳米粒子程度不同，构建荧光强度与酪氨酸酶溶液的线性关系，即可定量检测酪氨酸酶。
[0027] 利用凝胶状荧光传感器检测酪氨酸酶的方法，检测方法为：
[0028] 向制备的凝胶状荧光传感器注射不同浓度的酪氨酸酶溶液，20min后通过数码相机记录，据不同浓度的酪氨酸酶溶液猝灭TTE DNA铜纳米粒子程度不同，可视化检测酪氨酸酶。
[0029] 制备的TTE DNA水凝胶可回收再利用的研究：
[0030] 将TTE DNA水凝胶放置不同的时间段后分别加入Cu2+，制备荧光TTE DNA铜纳米粒子，并记录它们的紫外灯下的发光情况。检测发现，放置时间长后失水，无法制备得到荧光TTE DNA铜纳米粒子，无法作为荧光传感器使用。但是，将失水的水凝胶浸泡在MOPS缓冲液中(10mM MOPS，150mM NaCl，3mM抗坏血酸，pH＝7.8)30min后，水凝胶吸水恢复其功能性，可制备出荧光Cu NPs，可再次用于检测酪氨酸酶。
[0031] 水凝胶干燥和再吸水处理：首先，一块TTE DNA水凝胶在烘箱中在50℃下干燥1.5小时，然后将干燥的水凝胶转移到MOPS缓冲液(10mM MOPS，150mM NaCl，3mM抗坏血酸，pH 7.6)中，并浸泡25min，再脱水后，水凝胶用于制备荧光Cu NPs，可检测酪氨酸酶。
[0032] 与现有技术相比，本发明利用DNA 1和DNA2碱基互补配对，DNA1和DNA2的DNA设计中，都包含一段含有30个T的碱基。该聚30T的碱基可以使Cu2+还原为Cu0，使之产生荧光。然后加入抗坏血酸钠和硫酸铜，制备得到TTE DNA铜纳米粒子，具有荧光性能，利用酪氨酸酶可以快速有效的猝灭TTE DNA铜纳米粒子荧光的原理，来达到定量检测酪氨酸酶的目的。使用的试剂是低成本，不需要复杂的有机荧光化合物的合成，传感器设计过程非常简单，无需任何标记和修饰探针。检测准确度高、灵敏、检测限低。
[0033] 由于本发明中TTE DNA铜纳米粒子与琼脂糖不反应，因此，利用琼脂糖制备得到凝胶状荧光传感器，可视化检测酪氨酸酶，而且使用功能化水凝胶信号响应非常快只有几十分钟，所以功能水凝胶可作为携带器件可视化的检测酪氨酸酶。该功能水凝胶的可以实现高的信号输出。而且基于水凝胶的装置可以保护探针免受环境的干扰，具有良好的恒定性和可恢复功能，使得可在复杂的环境中检测样品。即使脱水，也可以通过浸泡在缓冲溶液中的方法恢复其传感器功能。
