[0039] 验证酪氨酸酶可以猝灭Cu NPs：
[0040] a、取2μL的PolyT30‑DNA序列溶液加入到93μL的10mM MOPS(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，加入50μL抗坏血酸钠溶液(8.0mM)，37℃条件下培养10min之后，再加入50μL的CuSO4溶液(800μM)，37℃培养15min，得到发荧光的Cu NPs，检测荧光强度；
[0041] 所述PolyT30‑DNA序列溶液的制备方法为：将PolyT30溶解到10mM MOPS(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，使PolyT30序列浓度为1μM。
[0042] b、取2μL的PolyT30‑DNA序列溶液(1.0μM)加入到93μL的MOPS(10mMMOPS(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，加入50μL抗坏血酸钠溶液(8.0mM)，37℃培养10min之后，再加入50μL的硫酸铜溶液(800μM)，37℃培养15min之后，测荧光，然后加入5μL的酪氨酸酶溶液(4U/mL)，1min之后测荧光，发现荧光淬灭，基于此验证酪氨酸酶可以猝灭Cu NPs。
[0043] 制备PolyT30‑DNA/Cu NPs‑酪氨酸酶‑有机磷农药体系：
[0044] 取2μL的PolyT30‑DNA序列加入到88μL的MOPS(10mM(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，加入抗坏血酸钠溶液(8.0mM)37℃培养10min之后，再加入50μL的CuSO4溶液(800μM)，37℃培养15min之后，加入酪氨酸酶(4U/mL)与有机磷农药(100ng/L)混合培养液，得到PolyT30‑DNA/CuNPs‑酪氨酸酶‑有机磷农药体系，制备得到的体系荧光恢复。
[0045] 实施例1
[0046] 一种荧光生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0047] 1)、取2μL的PolyT30‑DNA序列加入到88μL的MOPS(10mM(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，加入抗坏血酸钠溶液(8.0mM)37℃培养10min之后，再加入50μL的CuSO4溶液(800μM)37℃培养15min；
[0048] 2)将4U/mL酪氨酸酶溶液与100ng/L有机磷农药混合，4℃混合培养30min得，酪氨酸酶和有机磷农药混合溶液，向步骤1)体系中加入酪氨酸酶和有机磷农药混合溶液10μL，20℃‑50℃培养10‑30min,得到PolyT30‑DNA/Cu NPs‑酪氨酸酶‑有机磷农药体系，制备信号“打开”的荧光生物传感器。
[0049] 实施例2
[0050] 一种荧光生物传感器，采用上述方法制备得到。
[0051] 确定酪氨酸酶浓度最佳浓度：
[0052] 1)、将2μL的PolyT30‑DNA溶液(1μM)，加入到93μL的MOPS(10mM(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，再加入50μL抗坏血酸钠溶液(8.0mM)，37℃培养10min之后，再加入50μL的CuSO4溶液(800μM)，37℃培养15min,制备得到发光的PolyT30‑DNA铜纳米粒子；
[0053] 2)酪氨酸酶溶液稀释，配置成0.01,0.1,0.5,1,1.5,2，2.5,3和4U/mL的酪氨酸酶溶液，向步骤1)制备的体系住中再分别加入制备的不同浓度的酪氨酸酶溶液5μL，酪氨酸酶浓度为4U/mL时，达到淬灭最大值。见图4A。
[0054] 实施例3
[0055] 一种荧光生物传感器检测机磷农药的应用。
[0056] 具体检测方法为：
[0057] 1)、将2μL的PolyT30‑DNA溶液(1μM)，加入到88μL的MOPS(10mM(3‑(N‑吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，加入50μL抗坏血酸钠溶液(8.0mM)，37℃培养10min之后，再加入50μL的CuSO4溶液(800μM)，37℃培养15min,制备得到发光的PolyT30‑DNA铜纳米粒子；
[0058] 2)、将5μL 4U/mL酪氨酸酶与5μL不同浓度的有机磷农药混合4℃培养30min后，分别加入步骤1)中制备的发光的铜纳米粒子中，37℃培养30min后，检测不同浓度荧光强度，随着有机磷农药浓度的增加，铜纳米粒子的荧光强度会逐渐变强，构建不同浓度有机磷农药与荧光强度的线性关系，实现对不同浓度的有机磷农药进行定量检测。见图5A和图5B。
[0059] 加入有机磷农药在体系中终浓度分别为0.1,1，5,10,50,100,500,1000,5000,10000,50000,100000ng/L。
[0060] 相同条件下，对比其他检测有机磷农药的方法，结果如表1：
[0061] 表1
[0062]
[0063] 本发明试验检测的回收率如下表2
[0064] 表2
[0065]样本 加入量(ng/L) 重现(ng/L) 回收(％) 相对误差(％,n＝3)
1 100 96.70 96.70 3.3
2 1000 1009 100.9 0.1
3 10000 9899 989.9 1.01
[0066] 上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
