[0044] 实施例1
[0045] 验证G-四连体可以猝灭Cu NPs：
[0046] a、取1μL的polyT30溶液加入到80μL的10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，再加入5μL的CuSO4溶液(10mM)和120μL抗坏血酸钠的溶液(100mM)，得到混合溶液1，得到发荧光的Cu NPs，检测荧光强度；
[0047] 所述polyT30溶液的制备方法为：将polyT30溶解到10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，使polyT30序列终浓度为500nM。
[0048] b、取1μL的G4溶液(500nM)和0.5μL的hemin溶液(1.0μM)及5μL的KCl溶液(50mM)到200μL的MOPS(10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，37℃的干燥箱+
里培养2小时后，得到混合溶液2；(G4基因序列和hemin和K一起混合形成G-四连体结构，G-四连体也就是辣根过氧化物酶，它具有催化辣根过氧化物的作用。)
[0049] 所述G4溶液制备方法为：将G4基因序列溶解在10mM MOPS(3-(N- 吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，G4基因序列终浓度为500nM；G4序列：TTGGGTAGGGCGGGTTGGG。
[0050] c、将步骤a制备的混合溶液1与步骤b制备的混合溶液2混合，放10min后，检测荧光强度，明显衰减，证明G-四连体形成的辣根过氧化物酶混合物可以猝灭Cu NPs。
[0051] 制备ssDNA/Cu NPs-HRP-DNAzyme(铜纳米粒子辣根过氧化物酶)体系：
[0052] 取2μL的ssDNA溶液加入到160μL的MOPS(10mM(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中)中，再加入1μL的hemin溶液(1.0μM)和10μL的KCl溶液(50mM)在37℃的干燥箱里培养2小时；继续加入10μL的CuSO4溶液(10mM)和240μL抗坏血酸钠(100mM)的溶液，20℃培养5分钟，得到ssDNA/Cu NPs-HRP-DNAzyme(铜纳米粒子辣根过氧化物酶)体系的混合物。
[0053] 所述ssDNA溶液制备方法为：将ssDNA序列溶解在10mM MOPS PH＝7.6的缓冲溶液中，ssDNA序列的浓度为500nM。
[0054] ssDNA序列中的G4基因和hemin和K离子形成G-四连体结构，同时，ssDNA基因序列中的polyT30与CuSO4溶液和抗坏血酸钠形成发荧光的Cu NPs,G-四连体结构可以猝灭发荧光的Cu NPs。因此，制备得到的体系没有荧光。
[0055] 一种荧光生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0056] (1)、将2μL的ssDNA溶液(500nM)加入到160μL 10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，然后加入2μL HBV基因溶液，5min后，加入1μL的hemin溶液(1.0μM)和10 μL的KCl溶液(50mM)混合，在37℃的干燥箱里培养2小时，得到混合溶液；
[0057] (2)、在步骤(1)制备的混合溶液中，加入10μL的CuSO4溶液和240μL抗坏血酸钠溶液，20℃培养5min，利用ssDNA上的探针部分会和HBV基因碱基互补配对，阻碍铜纳米粒子和一半G-四连体之间的光诱导电子转移作用，制备得到“关闭”的荧光生物传感器。
[0058] 由于步骤(1)中，HBV基因会和ssDNA中探针部分碱基互补配对，刚性结构就阻碍的G-四连体的形成，从而阻碍了荧光猝灭，ssDNA中polyT30与CuSO4溶液和抗坏血酸钠形成发荧光的Cu NPs，可以测得荧光强度。
[0059] 一种荧光生物传感器的应用，检测HBV基因的应用。
[0060] HBV基因序列：ATACCACATCATCCATATAACTGAAAGCCA，
[0061] 具体检测方法为：
[0062] (1)、将2μL的ssDNA溶液(500nM)，分别加入2μL浓度梯度的HBV基因溶液，5min后，加入1μL的hemin溶液(1.0μM)和10μL的KCl溶液(50mM)混合在10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，在37℃的干燥箱里培养此混合溶液2小时，得到混合溶液；
[0063] 所述浓度梯度的HBV基因溶液的制备方法为：
[0064] HBV基因序列溶解在10mM MOPS(3-(N-吗啉基)丙磺酸)PH＝7.6的缓冲溶液中，配置成0,1,10,50,100,200,500,1000,2000,4000,6000nM的HBV基因溶液。
[0065] (2)、在步骤(1)制备的混合溶液中，加入10μL的CuSO4溶液、240μL抗坏血酸钠溶液，20℃培养5min，测荧光强度。
[0066] HBV基因和ssDNA上的探针部分形成一个结构紧凑的体系，拉远G-四连体和铜纳米粒子之间距离，从而使光诱导电子转移的现象不能发生。随着HBV基因浓度的增加，铜纳米粒子的荧光强度会逐渐变强，构建不同HBV基因浓度与荧光强度的线性关系，对不同浓度的HBV基因进行定量检测。
[0067] 相同条件下，对比其他检测HBV基因的方法，结果如表1
[0068] 表1
[0069]探针合成 信号 检测极限 线性范围 参考文献
双标记 碳量子点 4nM 20-500nM 1
单标记 分子信标 10nM Not mentioned 2
无标记 纳米孔 10pM 100pM-50nM 3
无标记 银纳米簇 14nM 25-1000nM 4
双标记 纳米球 84pM 0.5-10nM 5
无标记 银纳米簇 0.97nM 4-625nM 6
无标记 本实验 0.3nM 1-500nM
[0070] 本发明试验检测的回收率如下表2
[0071] 表2
[0072]样本 加入量(n M) 重现(n M) 回收(％) 相对误差(％,n＝3)
1 10 9.670 96.70 4.8
2 50 49.26 98.52 2.8
3 100 101.4 101.4 5.5
[0073] 上面结合附图对本发明进行了示例性描述，显然本发明具体实现并不受上述方式的限制，只要采用了本发明的方法构思和技术方案进行的各种改进，或未经改进直接应用于其它场合的，均在本发明的保护范围之内。
