盲专网 - (反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2013-01-25

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2013-05-15

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2014-06-04

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2033-01-25

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201310027833.2	申请日	2013-01-25
公开/公告号	CN103044218B	公开/公告日	2014-06-04
授权日	2014-06-04	预估到期日	2033-01-25
申请年	2013年	公开/公告年	2014年
缴费截止日
分类号	C07C47/277 、C07C45/78 、C07C45/79 、C07C45/80	主分类号	C07C47/277
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	7
权利要求数量	8	非专利引证数量	0
引用专利数量	0	被引证专利数量	0
非专利引证
引用专利		被引证专利
专利权维持	9	专利申请国编码	CN
专利事件	转让	事务标签	公开、实质审查、授权、权利转移

申请人信息

申请人	南通大学	第一申请人	南通大学
专利权人	南通大学	当前专利权人	聊城来通国际贸易有限公司
发明人	谭湘陵、钱晓伟、潘丹岷、羌利民	第一发明人	谭湘陵
地址	江苏省南通市啬园路9号	邮编	226019
申请人数量	1	发明人数量	4
申请人所在省	江苏省	申请人所在市	江苏省南通市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

南京知识律师事务所

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

汪旭东

摘要

本发明提供了一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：（1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；（2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；（3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；（4）将步骤（3）得到的萃取物依次使用制备型HPLC和半制备型HPLC进行分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。本发明制备方法条件温和，步骤简单，制得产品纯度高，对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备有着开创性意义。

摘要附图
说明书附图：图1
说明书附图：图2
说明书附图：图3
说明书附图：图4
说明书附图：图5

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2022-11-22	专利权的转移	登记生效日: 2022.11.10 专利权人由蚌埠贵久知识产权服务有限公司变更为聊城来通国际贸易有限公司地址由233000 安徽省蚌埠市禹会区张公山路319号三楼1号变更为252000 山东省聊城市经济技术开发区蒋官屯街道黑龙江路16号智能光电信息产业园综合楼302室
2	2018-05-11	著录事项变更	发明人由谭湘陵钱晓伟潘丹岷羌利民变更为潘丹岷谭湘陵钱晓伟羌利民
3	2014-06-04	授权
4	2013-05-15	实质审查的生效	IPC(主分类): C07C 47/277 专利申请号: 201310027833.2 申请日: 2013.01.25
5	2013-04-17	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：
（1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；
（2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；
（3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；
（4）将步骤（3）得到的萃取物使用C18柱进行HPLC分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛，具体为：使用制备型色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为15ml/min，检测波长315nm，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）醇与水的混合溶液为甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混合物。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述步骤（1）具体为取盐杜仲粉，60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃浸提30分钟，过滤，残渣再用60%乙醇60℃浸提30分钟，合并两次提取液。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中性氧化铝为100-200目。

5.如权利要求4所述的制备方法，其特征在于所述步骤（2）采用95%的乙醇进行洗脱。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）有机溶剂为乙醚、氯仿、正丁醇中的一种或几种混合物。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于所述步骤（3）萃取次数为3次。

8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于步骤（4）之后还包括将收集的组分浓缩后，采用半制备柱HPLC进一步纯化的步骤，具体为：使用色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分。

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法。

背景技术

[0002] (反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛为桂皮醛衍生物，结构如下：

[0003]

[0004] 文献“Cinnamaldehydes inhibit cyclin dependent kinase 4/cyclin D1. （Jeong, H.-W.; Kim, M.-R.; Son, K.-H. et al，Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2000), 10(16), 1819-1822.）”首次公开了(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的结构，并发现桂皮醛具有抑制细胞周期蛋白激酶的活性。文献“Process for producing cinnamyl aldehydederivatives and use thereof as intermediate for aspartame derivative.（Mori, Kenichi; Fujita, Shinji; Funakoshi, etc，PCT Int. Appl. (2001), 29 pp.)中公开了(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的提取方法。目前，尚无对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备及活性的进一步研究，存在技术空白。

发明内容

[0005] 本发明提供了一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，采用天然物提取的方法，从中药材杜仲中提取得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。

[0006] 本发明具体技术方案如下：

[0007] 一种(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备方法，包括如下步骤：

[0008] （1）以杜仲为提取原料，用醇与水的混合溶液进行提取；

[0009] （2）将步骤（1）的提取液经中性氧化铝层析柱除去色素，收集洗脱液，浓缩；

[0010] （3）使用有机溶剂萃取步骤（2）得到的洗脱液；

[0011] （4）将步骤（3）得到的萃取物依次使用制备型HPLC和半制备型HPLC进行分离得到(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛。

[0012] 上述杜仲优选盐杜仲，由如下方法制得：将杜仲干燥树皮浸入饱和NaCl溶液中15分钟，取出晾干，制成小块或小条，150-180℃烘烤4h，形成盐杜仲，此步骤为破坏杜仲胶，以使有效成分更多的溶出。

[0013] 上述杜仲可采用粉碎机粉碎，提高提取效率。

[0014] 上述醇与水的混合溶液为甲醇、乙醇或异丙醇中的一种或几种与水任意比例的混合物。

[0015] 上述制备方法，步骤（1）优选条件为取盐杜仲粉，60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃浸提30分钟，过滤，残渣再用60%乙醇60℃浸提30分钟，合并两次提取液。

[0016] 上述制备方法，步骤（2）选用中性氧化铝层析柱，中性氧化铝可吸附去除提取液中无用的色素，优选100-200目的中性氧化铝，优选采用柱体积为φ60mm×80mm，填料预先用乙醇饱和。收集过柱后的流出液，滤液全部过柱后，在用100ml乙醇洗柱，并收集流出液。

[0017] 上述制备方法，所述醚类有机溶剂为乙醚、氯仿、正丁醇中的一种或几种混合物。

[0018] 上述制备方法，步骤（3）优选萃取次数为3次。

[0019] 上述制备方法，步骤（4）优选采用C18柱进行HPLC分离，优选分离条件为使用制备型色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1（体积比），流速为15ml/min，检测波长315nm，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分，纯度>95%。

[0020] 上述制备方法，步骤（4）之后还可以进一步将收集的组分浓缩后，再次进行HPLC的纯化，使用色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分，可获得高达99.5%以上的纯度。

[0021] 经测定，杜仲中(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的含量约为0.8克/kg，应用上述提取方法获得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛得率为55%左右。

[0022] 本发明制备方法条件温和，步骤简单，制得产品纯度高，对(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的制备有着开创性意义。

实施方案

[0028] 实施例1 杜仲提取物的制备

[0029] 取杜仲干燥树皮，浸入饱和NaCl溶液中15分钟，取出晾干，制成小块或小条，150-180℃烘烤4h，粉碎机粉碎，制得盐杜仲粉。取100克盐杜仲粉，加入300ml 60%乙醇室温浸泡10分钟，充分溶胀，60℃水浴30分钟，滤液加入到填料为中性氧化铝（100-200目）层析柱中，柱体积为φ60mm×80mm，填料预先用乙醇饱和。收集过柱后的流出液，滤液全部过柱后，在用100ml乙醇洗柱，并收集流出液。抽滤漏斗滤纸减压过滤，残渣再一次60℃水浴30分钟，减压过滤，合并滤液。使用旋转蒸发仪60℃减压蒸发浓缩，直至剩余100ml左右时结束。分别使用100ml乙醚萃取浓缩液3次，收集合并乙醚萃取液，室温蒸发乙醚。使用
30ml 80%甲醇溶解乙醚蒸发后的产物，搅拌，8000rpm离心5分钟，取上清得到杜仲粗提物。

[0030] 实施例2 制备型HPLC分离杜仲提取液

[0031] 采用色谱条件为：色谱柱SHIMADZU PRC-ODS 20×250mm 15μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为15ml/min，315nm检测，室温操作，收集保留时间为7-8.5分钟的组分。（见图1，DZ_2标记的峰为(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛）。

[0032] 实施例3 半制备型HPLC制备(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛[0033] 使用旋转蒸发仪浓缩实施例2得到的组分，温度60℃，蒸发至剩余<10ml时结束。采用色谱条件为：色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:
水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，收集保留时间为5.5-6.0分钟的组分，见图
2。

[0034] 实施例4 (反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的纯度鉴定

[0035] 分析型HPLC检测，检测条件：Agilent Eclipse XDB-C18 9.4×250mm 5μm，流动相为甲醇:水=1:1，流速为4ml/min，315nm检测，30℃操作，保留时间为5.8分钟组分纯度>99.9%。(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛质谱鉴定图谱见图3，核磁共振氢谱图见图4，核磁共振碳谱图见图5。

附图说明

[0023] 图1为制备型HPLC分离杜仲提取液高效液相图谱。

[0024] 图2为半制备型HPLC制备(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛的高效液相图谱。

[0025] 图3为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定质谱图。

[0026] 图4为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定核磁共振氢谱图。

[0027] 图5为本发明方法制得的(反式)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯醛化学结构鉴定核磁共振碳谱图。

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