[0033] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明,以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0034] 实施例1:
[0035] 本发明所述对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲芳基钌配合物为有机金属钌 离子对化合物,其化学名称为三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0036] 三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0037] 其结构式为:
[0038]
[0039] 其理化性质为:暗红色晶体,易溶于水和有机溶剂。
[0040] 本发明所述三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II)的制备方法,其具体步骤如下:
[0041] 步骤一,将65重量份的钌重量含量37%的水合三氯化钌和470重量份的纯度95%的γ-松油烯溶于1450重量份的无水乙醇,加热回流搅拌6小时,静置析出得到具有式(III)的化合物,即二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II);
[0042]
[0043] 步骤二,称取27重量份的苯代氨基硫脲和22重量份的对氟苯甲醛共同溶于870重量份的无水乙醇,加热到70℃,4小时后,静置析出得到具有式(IV)的化合物,即对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲;
[0044]
[0045] 步骤三,将4.5重量份的对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲和10重量份的二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II)溶于1230重量份的二氯甲烷,室温 22-25℃搅拌3小时,析出暗红色块状固体,即得。
[0046] 实施例2:
[0047] 本发明所述对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲芳基钌配合物为有机金属钌离子对化合物,其化学名称为三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0048] 三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0049] 其结构式为:
[0050]
[0051] 其理化性质为:暗红色晶体,易溶于水和有机溶剂。
[0052] 本发明所述三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II)的制备方法,其具体步骤如下:
[0053] 步骤一,将70重量份的钌重量含量37%的水合三氯化钌和480重量份的纯度95%的γ-松油烯溶于1500重量份的无水乙醇,加热回流搅拌6小时,静置析出得到具有式(III)的化合物,即二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II);
[0054]
[0055] 步骤二,称取35重量份的苯代氨基硫脲和26重量份的对氟苯甲醛共同溶于910重量份的无水乙醇,加热到70℃,4小时后,静置析出得到具有式(IV)的化合物,即对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲;
[0056]
[0057] 步骤三,将5.5重量份的对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲和14重量份的二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II)溶于1250重量份的二氯甲烷,室温22-25℃搅拌3小时,析出暗红色块状固体,即得。
[0058] 实施例3:
[0059] 本发明所述对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲芳基钌配合物为有机金属钌离子对化合物,其化学名称为三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0060] 三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II);
[0061] 其结构式为:
[0062]
[0063] 其理化性质为:暗红色晶体,易溶于水和有机溶剂。
[0064] 本发明所述三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II)的制备方法,其具体步骤如下:
[0065] 步骤一,将69重量份的钌重量含量37%的水合三氯化钌和478重量份的纯度95%的γ-松油烯溶于1480重量份的无水乙醇,加热回流搅拌6小时,静置析出得到具有式(III)的化合物,即二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II);
[0066]
[0067] 步骤二,称取31重量份的苯代氨基硫脲和23重量份的对氟苯甲醛共同溶于888重量份的无水乙醇,加热到70℃,4小时后,静置析出得到具有式(IV)的化合物,即对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲;
[0068]
[0069] 步骤三,将5.1重量份的对氟苯甲醛缩苯代氨基硫脲和11.7重量份的二氯化二氯-二-甲基异丙基苯合二钌(II)溶于1244重量份的二氯甲烷,室温22-25℃搅拌3小时,析出暗红色块状固体,即得。
[0070] 如图1所示,其核磁共振氢谱数据为1H NMR in CDCl3:δ:10.358(1H,s,NHPh),9.523(1H,s,CH=N),8.435-8.389(2H,m,phenyl-H),7.606(2H,d,J=7.9Hz,phenyl-H),
7.426-7.375(2H,m,phenyl-H),7.315-7.291(2H,m,phenyl-H),7.249(1H,s,phenyl-H),
5.551,5.343{4H,2×d,3JAB=5.9Hz,[(p-cymene)RuCl3]-AA’BB’spin system},5.492,
4.999,4.863,4.745{4H,4×d, 3JAB=5.7Hz,[(p-cymene)Ru(bzsc)Cl]+AA’BB’spin system},3.163,2.696(2H,2×m,2×CH(CH3)2),2.325,2.078(6H,2×s,2×CH3),1.388,
1.295(6H,2×d,J=6.9Hz,anion-CH(CH3)2),1.155(6H,dd,J=6.9Hz and 14.0Hz,cation-CH(CH3)2)ppm。
[0071] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性及其应用。
[0072] 实验一:抗菌能力实验:
[0073] 在灭菌试管中加入1mL浓度为106/ml的菌液,加入1mg实施例3得到的有机金属钌离子对化合物,37℃培养24h。培养到时间点后,培养基收集起来用倍比稀释,稀释倍数为10倍和涂布培养法检测活菌数。试验结果表明:由本发明制得的产品对金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、白假丝酵母(ATCC 10231)、枯草芽孢杆菌黑色变种(ATCC 9372)都具有很强的杀菌性,其杀菌率达99.999%以上。
[0074] 实验二:成骨细胞增殖活性实验:
[0075] 将实施例3得到的有机金属钌离子对化合物1mg置于24孔板中,1ml密度为2×104/ml的小鼠成骨细胞悬液接种于24孔板,然后培养1、4和7天。到预定时间点后,每孔加入200μl的MTT(5mg/ml)和800μl无血清无酚红DMEM。37℃孵育4小时后吸弃上清,加入1ml二甲基亚砜(DMSO)溶解生成的结晶物,每孔取三份200μl溶解液转到96孔培养板,用分光光度计于490nm处测其OD值。结果表明,如图2所示,本发明的三氯一甲基异丙基苯合钌(II)化一氯一对氟苯基-2-缩N4-苯基氨基硫脲一甲基异丙基苯合钌(II)表现出明显的细胞增殖活性。
[0076] 实验三:初始细胞分化能力分析:
[0077] 通过比较作为成骨细胞初始分化标记物的本发明产物的碱性磷酸酶(ALP)活性,检查本发明产物对小鼠成骨细胞分化的影响。为了比较成骨细胞的分化能力,将1ml密度为2×104/ml的小鼠成骨细胞接种到24孔板中,并培育1天。随后,分别用不含本发明产物的培养基和含有1mg本发明产物的分化培养基处理细胞,并在含CO2的37℃恒温箱中培育,在培养后第7天和第14天测量ALP活性。实验发现,如图3所示,本发明产物在第14天显示的ALP活性比培养基高46%,这表明成骨细胞分化能力明显改善。
[0078] 实验四:细胞毒性分析:
[0079] 以乳酸脱氢酶(LDH)的活性作为细胞毒性指标来评估本发明产物的细胞毒性大小。将1ml密度为1×104/ml的小鼠成骨细胞接种到24孔板中,并培育1天。随后,分别用不含本发明产物的培养基和含有1mg本发明产物的分化培养基处理细胞,并在含5%CO2的37℃恒温箱中培育24小时,离心后取上清液用于LDH活性检测。实验结果如表1所示。
[0080] 培养基 本发明产物
LDH活性 308 306
[0081] 由上表可示,本发明所述有机金属钌离子对化合物经细胞毒性试验表明,含有本发明产物培养基的LDH活性为306,还略低于不含本发明产物的培养基308,说明本发明产物无毒。
[0082] 尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,可容易地实现另外的修改,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。