一种含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物及其制备方法   0    0

[0001] 本发明属于化合物制备领域，具体涉及一种含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物及其制备方法和用途。

[0002] 糖尿病严重威胁人类健康，且患病人数逐年上升。迄今尚无治疗糖尿病的特效药物。研究表明蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)可下调胰岛素的表达，因而抑制PTP1B的活性是促进胰岛素分水平的一种有效治疗糖尿病的手段。

[0003] 研究表明，多种天然产物包括甾体类化合物石胆酸(LCA)具有较好的PTP1B抑制活性(IC50＝12.7μM)，将其结构进行修饰得到的含杂环衍生物对PTP1B的活性显著提高。但该类化合物结构刚性强，类药性差，且存在类激素类药物的风险。

[0004] “骨架迁移”是药物设计中常用的结构设计方法。事实上多年前，该法被成功用于了一种雌二醇替代物——己烯雌酚的设计。这也证明了二苯乙烯(菧类)是甾环的理想替代结构。事实上，菧类是一种常见的天然产物片段，菧类化合物常具有抗菌、抗肿瘤、抗氧化及抗糖尿病等多种生物活性，比如：天然产物resveratrol,pinosylvin和piceatannol均为菧类化合物。另由研究表明向石胆酸(一种甾体酸)的A环并入吡唑、噁唑、异噁唑及噻唑等杂环可以提高石胆酸对PTP1B的抑制活性。由此，结合骨架迁移，将杂环与二苯乙烯(菧类)进行拼接得到的化合物也可能具有较好的PTP1B抑制活性。

[0005] 本发明的目的是提供一类具有降糖活性的含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物，其结构如下：

[0006]

[0007] 其中，R＝H,2-Cl,2-OMe,3-Cl,3-F,3-Br,3-Me,3-NO2,4-Me,4-OMe,4-F,3,4-Cl2或3,4-F2。

[0008] 一种含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物的制备方法，4’-羟基二苯乙烯-3-甲酸甲酯(Ⅱ)和取代5-苯基3-氯甲基异噁唑(Ⅲ)以碳酸铯为缚酸剂进行缩合反应；

[0009] 在氢氧化钾作用下水解，再经盐酸酸化得到含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物，[0010]

[0011] 其中，R为H,2-Cl,2-OMe,3-Cl,3-F,3-Br,3-Me,3-NO2,4-Me,4-OMe,4-F,3,4-Cl2或3,4-F2。

[0012] 含5-苯基异噁唑类菧基团的化合物用于制备降糖药物。本发明还有一个目的是通式Ⅰ化合物在干扰血糖升高通路中酶形成的应用，通过抑制磷酸酪氨酸酯酶1B(PTP1B)实现降糖目的。

[0013] 为了便于对本发明的进一步了解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。这些实施例仅供叙述而并非用来限定本发明的范围或实施原则。

[0014] 实施例1：化合物Ia(R＝H)的合成

[0015]

[0016] 化合物Ⅱ(1mmol)，Ⅲa(R＝H,1mmol)和碳酸铯(2mmol)在DMSO(5mL)溶剂中加热到85℃并保持该温度反应8小时，降低反应温度至60℃后加入20％氢氧化钾溶液(2mL)，在60℃下反应搅拌4小时。冷却反应夜至室温，盐酸酸化并用水稀释得到大量沉淀，过滤后用甲醇重结晶纯化得到化合物Ia(R＝H)；Yellow solid；Yield:42％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.15(brs,1H),8.12(s,1H),7.90(dd,J1＝8.0Hz,J2＝1.8Hz,2H),7.80(t,J＝7.5Hz,
2H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.52～7.58(m,3H),7.47(t,J＝7.7Hz,1H),7.29(d,J＝
16.4Hz,1H),7.22(d,J＝16.4Hz,1H),7.20(s,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,2H),5.29(s,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:170.0,168.2,161.8,158.1,138.0,131.1,130.8,130.3,129.8(2C),129.3,129.2,128.5(2C),128.4,127.4,127.1,126.3,126.1(2C),115.6(2C),100.5,-
61.8；HRMS(ESI)calcd for C25H18NO4[M-H]396.1236,found 396.1219.

[0017] 实施例2：化合物Ib(R＝2-Cl)的合成

[0018] 以Ⅲb(R＝2-Cl)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:51％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:12.98(brs,1H),8.13(s,1H),7.82～7.88(m,2H)，7.79(d,J＝8.1Hz,1H),7.62(d,J＝8.6Hz,2H),7.49～7.54(m,1H),7.35(d,J＝8.1Hz,2H),7.47(t,J＝7.7Hz,1H),7.28(d,J＝16.5Hz,1H),7.23(d,J＝16.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,2H),7.09(s,1H),5.27(s,2H),2.37(s,3H)；170.2,166.7,161.7,158.2,
141.0,138.4,131.0,130.6,130.3(2C),129.7,129.6,128.6(2C)，127.3，126.1(2C)，
125.9，124.4，115.6(2C)，99.9，61.8，21.5；HRMS(ESI)calcd for C25H17ClNO4[M-H]-
430.0846,found 430.0831.

[0019] 实施例3：化合物Ic(R＝2-OMe)的合成

[0020] 以Ⅲc(R＝2-OMe)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:47％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.05(brs,1H),8.13(s,1H),7.79～7.83(m,2H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.46～7.52(m,3H),7.26(d,J＝16.4Hz,1H),7.20(d,J＝16.4Hz,1H),7.10～7.14(m,2H),6.99(s,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),5.29(s,2H)，3.96(s,
3H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ:167.8，166.2,161.5,158.2,138.4,138.2,131.7,130.7,
130.5,130.0,129.4,129.4,128.6(2C),128.2,127.4,127.2,126.1,124.6,121.3,115.6(2C),103.6,61.8,56.3；HRMS(ESI)calcd for C26H20NO5[M-H]-426.1341,found 426.1376.[0021] 实施例4：化合物Id(R＝3-Cl)的合成

[0022] 以Ⅲd(R＝3-Cl)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow 1
solid；Yield:40％；H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.05(brs,1H),8.12(s，1H),7.96(s,1H),
7.80(t,J＝7.0Hz,2H),7.61～7.73(m，4H),7.41～7.49(m，2H),7.33(d,J＝16.5Hz,1H),
7.25(d,J＝16.5Hz,1H),7.41(s,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,2H),5.28(s，2H),2.39(s,3H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:170.2,168.1,161.7,158.1,139.2,138.0,131.7，130.7，130.3，
129.7，129.3，129.2，128.5(2C)，128.4，127.4,127.0,126.5,126.3,123.3,115.6(2C),
100.4,61.8,21.3；HRMS(ESI)calcd for C25H17ClNO4[M-H]-430.0846,found 430.0857.[0023] 实施例5：化合物Ie(R＝3-F)的合成

[0024] 以Ⅲe(R＝3-F)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:48％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.05(brs,1H),8.13(s,1H),7.76～7.84(m,4H)，7.58～7.64(m,3H)，7.49(t,J＝7.7Hz,1H),7.29～7.40(m,3H)，7.22(d,J＝16.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,2H),5.30(s，2H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ:168.7,
167.7,162.9(d,J＝145.6Hz),161.9，158.1，138.2,132.1，132.0,131.7,130.7,129.4,
129.1,129.0,128.5(2C),128.4,127.4,126.2,122.3,118.2(d,J＝21.2Hz),115.6(2C),
113.0(d,J＝23.7Hz)，101.6，61.7；HRMS(ESI)calcd for C25H17FNO4[M-H]-414.1142,found 
414.1133.

[0025] 实施例6：化合物If(R＝3-Br)的合成

[0026] 以Ⅲf(R＝3-Br)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:51％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.13(brs，1H)，8.14(s，1H),8.12(s，1H),7.89～7.93(m,1H),7.79(d,J＝7.6Hz,1H),7.71～7.73(m,1H),7.61(d,J＝8.7Hz,2H),
7.49～7.58(m,2H),7.43(t,J＝7.6Hz,1H),7.27(d,J＝16.5Hz,1H),7.20(d,J＝16.5Hz，
1H),7.19(s,1H),7.09(d,J＝8.7Hz,2H)，5.29(s，2H)；13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ:170.0，
168.4，161.8,158.0,137.8,133.7,131.9,131.0,130.9,129.8,129.1,128.9,128.7,128.5(2C),127.4,126.6,126.1,125.0,123.0,115.6(2C),100.5,61.7；HRMS(ESI)calcd for C25H17BrNO4[M-H]-474.0341,found 474.0371.

[0027] 实施例7：化合物Ig(R＝3-Me)的合成

[0028] 以Ⅲg(R＝3-Me)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:44％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.12(brs,1H),8.13(s,1H),8.01(s,1H),7.78～7.82(m,2H),7.62(d,J＝8.6Hz,2H),7.58～7.59(m,2H),7.46～7.50(m,2H),7.33(s,1H),7.30(d,J＝16.4Hz,1H),7.22(d,J＝16.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.6Hz,2H),5.30(s,
2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:168.5,167.9,161.9,158.1,138.2,134.5,131.7,130.8,
130.6,130.0,129.4,129.0,128.5,127.4,126.2(2C),125.8,124.7,124.6,115.6(2C),
101.7；HRMS(ESI)calcd for C26H20NO4[M-H]-410.1392,found 410.1388.[0029] 实施例8：化合物Ih(R＝3-NO2)的合成

[0030] 以Ⅲh(R＝3-NO2)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:38％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.17(brs,1H),8.35(s,1H),8.13(s,1H),7.78～7.83(m,3H),7.63(d,J＝8.8Hz,2H),7.46～7.49(m,4H),7.28(d,J＝16.5Hz,1H),
7.22(d,J＝16.5Hz,1H),7.11(d,J＝8.8Hz,2H),5.33(s,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:
167.7,162.2,158.0,148.9,138.5,138.2,131.7,130.7,130.5,130.0,129.4,128.6(2C),
128.4,127.4,127.2,126.2,125.4,124.6,120.7,115.6(2C),102.5,61.7；HRMS(ESI)calcd -
for C25H17N2O6[M-H]441.1087,found 441.1072.

[0031] 实施例9：化合物Ii(R＝4-Me)的合成

[0032] 以Ⅲi(R＝4-Me)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:55％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.02(s,1H),8.12(s,1H),7.99(d,J＝8.4Hz,1H),7.97(d,J＝5.5Hz,1H),7.78～7.85(m,3H),7.62(d,J＝8.4Hz,2H),7.46～7.51(m,2H),7.40(t,J＝8.7Hz,2H),7.30(d,J＝16.4Hz,1H),7.22(d,J＝16.4Hz,1H),7.18(s,
1H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),5.28(s,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:168.6,167.3,161.3,
157.6,137.7,131.2,130.2,128.9,128.2,128.1,128.1,128.0(2C),127.9,126.9,124.1,
125.6,116.5,116.3,115.5,115.1(2C),99.9,61.3；HRMS(ESI)calcd for C26H20NO4[M-H]-
410.1392,found 410.1373.

[0033] 实施例10：化合物Ij(R＝4-OMe)的合成

[0034] 以Ⅲj(R＝4-OMe)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:52％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.04(brs,1H),8.12(s,1H),7.77～7.86(m,5H),7.62(d，J＝8.4Hz，2H),7.46～7.54(m，2H),7.30(d,J＝16.5Hz,1H),7.22(d,J＝16.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,2H),7.04(s，1H),5.26(s,2H)，3.83(s，3H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:167.7,166.1,161.5,158.2,138.4,138.2，131.7，130.7，130.7,130.0,
129.4,128.6(2C),127.7,127.5,127.4,127.2,126.1，124.6,120.0，115.2(2C),100.0,
61.8,55.7；HRMS(ESI)calcd for C26H20NO5[M-H]-426.1341,found 426.1365.[0035] 实施例11：化合物Ik(R＝4-F)的合成

[0036] 以Ⅲk(R＝4-F)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:37％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.10(brs,1H),8.13(s，1H)，7.83～7.95(m，5H)，7.64(d,J＝8.5Hz,2H),7.48～7.55(m,2H)，7.31(d，J＝16.5Hz,1H),7.24(d,J＝16.5Hz,1H),7.21(s,1H),7.11(d,J＝8.4Hz,2H),5.33(s,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:
168.1,166.7,161.5,158.8(d，J＝154.0Hz,2C)，158.1，139.4，132.5,132.4(2C),130.9,
129.9,128.7(2C),128.5,128.2,127.9,127.3,126.2(d,J＝26.5Hz,2C),124.6,115.5-
(2C),104.8,61.8；HRMS(ESI)calcd for C25H17FNO4[M-H]414.1142,found 414.1159.[0037] 实施例12：化合物Il(R＝3,4-Cl2)的合成

[0038] 以Ⅲl(R＝3,4-Cl2)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:52％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.03(brs,1H),8.22(s,1H),8.12(s，1H),7.80～7.83(m，3H)，7.62(d,J＝8.7Hz,2H),7.45～7.52(m,2H),7.37(s，1H)，7.30(d，J＝
16.4Hz，1H)，7.23(d，J＝16.4Hz，1H)，7.09(d,J＝8.7Hz,2H),5.30(s,2H)；13C NMR(DMSO-d6,100MHz)δ:167.3,167.1,161.5,157.5,137.7,133.1,132.2,131.6,131.3,130.5,
130.3,130.2,130.1,129.1,128.9,128.1,128.0(2C),127.5,127.0,126.9,125.7,115.5,
115.1(2C),101.6,61.2；HRMS(ESI)calcd for C25H16Cl2NO4[M-H]-464.0456,found 
464.0438.

[0039] 实施例13：化合物Im(R＝3,4-F2)的合成

[0040] 以Ⅲm(R＝3,4-F2)替代Ⅲa(R＝H)，参照实施例1中Ia的合成方法得到。Yellow solid；Yield:45％；1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ:13.13(brs,1H),8.12(s,1H),7.78～7.85(m,3H),7.62(d,J＝8.8Hz,2H),7.46～7.51(m,3H),7.30(d,J＝16.5Hz,1H),7.23(d,J＝13
16.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,2H),6.78(d,J＝7.9Hz,1H),5.30(s,2H)；C NMR(DMSO-d6,
100MHz)δ:170.6,169.1,162.5,158.6,150.7(d,J＝148.5Hz),150.0(d,J＝149.4Hz),
138.0,137.7,131.2,130.3,130.0,129.5,128.9,128.6(2C),128.2,127.4,121.3,119.3(d,J＝8.2Hz),115.5(2C),115.0(d,J＝8.5Hz),103.6,61.8,56.3；HRMS(ESI)calcd for -
C25H16F2NO4[M-H]432.1047,found 432.1083.

[0041] 实施例14：化合物Ⅰ对PTP1B的体外抑制活性测试

[0042] 材料与仪器

[0043] 测试时使用的底物p-nitrophenylphosphate(pNPP)购自Calbiochem(San Diego，CA，USA)；使用的自动加样系统是购自Beckman(Fullerton，CA，U.S.A.)的Biomek 2000和购自Robbins Scientific的Hydra96；使用的96-孔聚丙烯酶标板和96孔板紫外/可见分光光度计SpectraMAX 340及FlexstationⅡ384分别购自Greiner(Epsom，Surrey KT199AP，UK)和Molecular Devices(Sunnyvale，CA，U.S.A.)。

[0044] 样品准备

[0045] 将1mg样品溶解于200mL DMSO中，得到的溶液作为5g/mL的储液。从该储液中取20mL到96孔聚丙烯板的A2-H11样品孔中，再向其中加80mL DMSO，混合均匀，将其作为1g/mL样品母板(Figure 26)。Biomek 2000自动加样系统从该母板中转移2mL样品到96孔聚苯乙烯板中，作为筛选用的样品子板。

[0046] PTP1B抑制剂的高通量筛选

[0047] 以齐墩果酸作为阳性对照，向样品孔中加2mLDMSO，但不加其它任何试剂或样品，将其作为空白对照，按照上述方法进行检测。

[0048] 检测之后，计算8个空白对照酶反应初速度的平均值，将其作为全活性，然后计算各样品孔酶反应的相对活性，最后全活性(100％)减去相对活性即得到抑制百分数。经过Excel软件进行的数据处理后，最后显示的结果为各个样品孔的抑制百分数。之后，从初筛结果中选取抑制率50％的样品，进行后续的复筛。

[0049] 复筛和IC50的测定

[0050] 从浓度为1mg/mL的子板中取2mL到96孔板中(在反应体系的终浓度为20g/mL)，并对每个化合物都设两个复孔，再次检测化合物的抑制活性，复筛的检测方法同初筛。最后以相对活性对化合物浓度作图，经Graphpad软件拟合，计算得出IC50值。

[0051] 活性结果如表1所示：

[0052] 表1化合物Ia～Im对PTP1B抑制的IC50.

[0053]

[0054]

[0055] 由上表可知，本发明所述的化合物Ia～Im均对PTP1B的酶活有不同程度的抑制作用，可作为潜在的抗糖尿病药物。