[0015] 为了便于对本发明的进一步理解,下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则,本发明的实施方式不限于以下内容。
[0016] 实施例1
[0017]
[0018] 将化合物1(2mmol)溶于THF(5mL)中,加入羰基二咪唑(2.5mmol),室温下搅拌反应4小时后,将反应液倒入冰水中搅拌5min后过滤,滤饼用水、乙醇洗涤,真空干燥得微红色固
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体(346mg,收率约88.6%),即化合物2,其结构确证数据:H NMR(CDCl3,400MHz),δ:11.40(br s,1H,NH),7.14(s,1H,Ph‑H),6.78(s,1H,Ph‑H),3.78(s,3H,OCH3),3.76(s,3H,OCH3)
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. C NMR(CDCl3,100MHz),δ:155.1,142.9,140.5,124.9,99.2,98.8,56.8,56.1.ESI‑MS(m/+
z)196.06[M+H] .
[0019] 实施例2
[0020]
[0021] 将化合物2(1mmol)、BSA(1.0mmol,N,O‑双(三甲基硅基)乙酰胺)溶于乙腈中,氮气保护下,加入 MS(分子筛)加热回流反应1小时后,冷却至室温,加入TMSOTf(2.0mmol,三氟甲磺酸三甲基硅酯)和化合物3(1.0mmol,全乙酰化葡萄糖α/β),室温下反应12小时后,过滤除去分子筛,滤液用二氯甲烷萃取,依次用饱和碳酸氢钠、氯化钠洗涤,无水硫酸钠干燥,浓缩后,经硅胶柱层析(乙酸乙酯/石油醚=1/15‑1/8)得化合物4(359mg,收率约为68.3%,1
β构型),另外得到少量α构型产物。化合物4的结构确证数据:H NMR(CDCl3,400MHz),δ:7.15(s,1H,Ph‑H),6.80(s,1H,Ph‑H),5.83(t,1H,J=9.4Hz,H‑3′),5.31(t,1H,J=9.4Hz,H‑
2′),5.22(d,1H,J=9.4Hz,H‑1′),5.20(t,1H,J=9.4Hz,H‑4′),4.22‑4.20(m,2H,H‑6′),
3.86‑3.84(m,1H,H‑5′),3.80(s,3H,OCH3),3.77(s,3H,OCH3),2.09,2.06,2.04,2.01(s×4,+
12H,‑OAc×4).ESI‑MS(m/z)526.16[M+H] .
[0022] 实施例3
[0023]
[0024] 取化合物4(200mg)溶于甲醇(6mL)中,加入甲醇钠,调pH至9.0‑10.0,室温下搅拌反应5小时后,加入阳离子交换树脂搅拌至pH7.0,过滤,滤液浓缩即得式I化合物(129mg,收1
率约为94.8%)。式I化合物的结构确证数据:H NMR(DMSO‑d6,400MHz),δ:7.18(s,1H,Ph‑H),6.83(s,1H,Ph‑H),5.45(d,1H,J=5.0Hz,2′‑OH),5.18(d,1H,J=4.1Hz,3′‑OH),5.12(d,1H,J=5.3Hz,4′‑OH),5.09(d,1H,J=9.2Hz,H‑1′),4.61(t,1H,J=5.3Hz,6′‑OH),3.82(s,3H,OCH3),3.79‑3.77(m,1H,H‑2′),3.76(s,3H,OCH3),3.74‑3.72(m,1H,H‑6′),3.49‑
3.47(m,1H,H‑6′),3.40‑3.38(m,1H,H‑5′),3.35‑3.33(m,1H,H‑3′),3.28‑3.26(m,1H,H‑+
4′).ESI‑MS(m/z)358.11[M+H] .
[0025] 实施例4体外生物活性评价
[0026] 采用能稳定表达hSGLT2蛋白的CHO细胞为载体和[14C]‑AMG为底物评价本发明式I化合物的体外抑制SGLT2的活性。
[0027] 将式I化合物用二甲基亚砜(DMSO)溶解,起始浓度为200μmol/L,4倍等比稀释,1014
个浓度梯度,待用。在96孔板上依次加入5μL/孔化合物溶液和45μL/孔含2.5μCi/mL[ C]‑AMG的缓冲液(包含有120mmol/L NaCl、4.7mmol/L KCl、1.2mmol/L MgCl2、2.2mmol/L
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CaCl2、10mmol/L HEPES、1mmol/L Tris,pH7.4),得到不同浓度的式I化合物‑[ C]‑AMG缓冲液,待用。采用体积分数为10%胎牛血清的RPMI1640培养基,待CHO细胞长到80%满的时候,
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加入胰酶‑EDTA溶液,待细胞脱壁后吹成单细胞悬液,调整细胞密度为3×10 个/L,按100μL/孔的量接种到96孔的细胞培养板中,并在37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养12h。用+
150μL/孔的KRH‑Na裂解液洗细胞一次,吸干,加入50μL/孔对应浓度的式I化合物,振荡混合后,培养箱中培养1h,而后立即在每个孔中加入150μL/孔冰冷的洗涤缓冲液[包含有
120mmol/L NaCl,4.7mmol/L KCl,1.2mmol/L MgCl2,2.2mmol/L CaCl2,10mmol/L HEPES,
0.5mmol/L phlorizin(pH=7.4,含1mmol/L Tris)]以终止吸收试验,清洗3次。加入50μL/孔的Lysis缓冲液(100mmol/L NaOH),600r/min振荡5min,加入150μL/孔的闪烁液Microsint40到所有孔中,600r/min振荡5min,置于MicroBeta Trilux仪器上测定放射活性,平行测定3次,求取均值,采用x±s表示,用SPSS19.0软件计算式I化合物抑制SGLT2的IC50。
[0028] 结果显示,式I化合物的IC50值为1.56±0.11μmol/L。