[0033] 下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0034] 实施例1:本发明复配精油及其制剂的制备
[0035] 第一步:各种精油的制备
[0036] (1)葛缕子精油的制备方法是:
[0037] 取葛缕子,粉碎,过筛,置圆底烧瓶中,加入15倍量蒸馏水,用盐酸调节pH至5.0后向容器中加入1.5%的纤维素酶,稍作搅拌,置于水浴锅内50℃恒温酶解40min,然后采用水蒸气蒸馏法,安装好挥发油提取器,加热至水沸腾后开始计时,蒸馏2h后,收集精油,即得。
[0038] (2)柠檬草精油的制备方法是:
[0039] 取柠檬草,粉碎,过筛,置于圆底烧瓶中,加入15倍量石油醚进行超声提取,超声波频率设定在600W,在80℃下提取1h,过滤,滤液回收石油醚并挥干,即得。
[0040] (3)香旱芹精油的制备方法是:
[0041] 取香旱芹,干燥,粉碎,过筛,放入超临界CO2萃取釜中,夹带剂乙醇用量固液比为1.5ml/mg,萃取条件为:萃取压力40MPa、萃取温度50℃、萃取时间3.0h、CO2流速25kg/h。萃取液过滤,用旋转蒸发仪回收乙醇并挥干,即得。
[0042] (4)紫苏叶精油的制备方法是:
[0043] 取紫苏叶,干燥,粉碎,过筛,置圆底烧瓶中,加入16倍量蒸馏水,用盐酸调节pH至4.5后向容器中加入1%的复合酶(纤维素酶与果胶酶按1:1混合),置于水浴锅内45℃恒温酶解40min,转入微波动态萃取设备料桶中,设置微波功率为800W,微波辐射30min。在微波萃取设备上接挥发油分离器,收集蒸馏出的精油,即得。
[0044] 第二步:制剂的制备
[0045] 本发明复配精油微囊的制备:
[0046] 取一定温度下适量的水,加入海藻酸钠,搅拌,配成一定浓度的海藻酸钠溶液,然后在此溶液中加入按比例混合的复配精油,滴入1-2滴浓度为1%的吐温-80,在一定的乳化温度下,搅拌均匀备用。另取壳聚糖和氯化钙适量,加水溶解,制成一定浓度的固化液备用。用一次性注射针筒吸取海藻酸钠复配精油混合液,边搅拌边滴入壳聚糖-氯化钙固化液中,自发形成微囊,放入冰箱固化24h,取出过滤,水洗2次,再用石油醚洗涤1次,收集微胶囊置于表面皿上,于60℃干燥2h,得复配精油微囊。
[0047] 第三步:将复配精油微囊添加到饲料中
[0048] 本发明还提供一种所述复配精油在制备畜类饲料中的应用,优选所述复配精油在制备饲料中质量添加量为0.05-0.1%。
[0049] 以下通过试验例进一步阐述本发明所述具有抑菌作用,能够调理禽类肠胃,促进消化,增加食欲从而促进动物增重的作用。
[0050] 试验例1
[0051] 本发明复配精油对沙门氏菌的体外抑菌活性:
[0052] 1.材料与方法
[0053] 1.1试验材料
[0054] 致病沙门氏菌;BS琼脂培养基:购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司;
[0055] 葛缕子:购自青岛众生大药房,经鉴定为伞形科植物的籽;
[0056] 柠檬草:青岛栽培柠檬草,经鉴定为质量中等的柠檬香茅;
[0057] 香旱芹:原产地印度,网上采购;
[0058] 紫苏叶:新鲜紫苏,青岛栽培紫苏,经鉴定为唇形科植物的叶;
[0059] 按上述实施方案分别制备葛缕子精油,柠檬草精油,香旱芹精油和紫苏叶精油。按组方比例制成葛缕子精油、柠檬草精油和香旱芹精油的复配精油(组合物1);葛缕子精油、柠檬草精油和紫苏叶精油的复配精油(组合物2);葛缕子精油、香旱芹精油和紫苏叶精油(组合物3);柠檬草精油、香旱芹精油和紫苏叶精油(组合物4);本发明复配精油(组合物5)。配成10、5、2.5、1.25和0.625mg/ml的溶液。
[0060] 1.2试验方法
[0061] (1)菌悬液的制备无菌操作用烧红冷却的接种环挑取培养16-24h的沙门氏菌,置于无菌生理盐水中,摇匀制得沙门氏菌混悬液,并按照平板菌落计数法校正得出该混悬液的CFU。
[0062] (2)含菌培养基平板的制备
[0063] 将经高压蒸汽灭菌后的BS培养基冷却到45~50℃时,加入105-106CFU/ml沙门氏菌,充分震荡混匀,倒入灭菌后的培养皿中,稍微放冷后,即得含菌培养基平板。
[0064] (3)抑菌圈测量待含有沙门氏菌的BS培养基凝固后,用直径为7mm的打孔器打孔,每个培养皿可以打四个孔,每一个孔加40μL精油,置于37℃的培养箱中培养24小时后,测量抑菌圈直径。
[0065] 2.结果与分析
[0066] 以沙门氏菌为试验细菌,以本发明复配精油及其他四种组合物对照为供试药剂,测定不同组合物的抑菌活性与效果,结果如表1所示。
[0067] 表1 各复配精油对沙门氏菌的抑菌实验结果( n=10)
[0068]
[0069] 从表1可以,各组合物均对沙门氏菌有抑制作用,随着剂量增加抑菌活性增强,且组合物5抑菌作用最好,说明葛缕子精油,柠檬草精油,香旱芹精油和紫苏叶精油组合物中,缺少任何一味,都会导致抑菌活性下降。
[0070] 3.结论:本发明复配精油在较低的浓度下就能抑制沙门氏菌,显示了较好的抑菌活性。
[0071] 试验例2
[0072] 复配精油对禽类摄食量和体重的影响
[0073] 1.1材料与方法
[0074] 各组合物精油的制备方法同试验例1。制备六组饲料(A、B、C、D、E、F),A组饲料不添加复配精油,B组添加组合物1,C组饲料添加组合物2,D组饲料添加组合物3,E组饲料添加组合物4,F组饲料添加组合物5。
[0075] 1.2实验鸽与分组饲养
[0076] 挑选鸽子生长和健康状况基本相同的120只9天龄乳鸽,随机分成6组(标记为A、B、C、D、E和F组),每组20只,分别投喂各组对应的饲料,三个重复实验,每日投喂3次,投喂3周。
[0077] 2.结果与分析
[0078] 投喂不同饲料3周后结束实验,各组鸽子的摄食量和体重如表2所示。
[0079] 表2 不同饲料投喂鸽子的摄食量和体重( n=20)
[0080]
[0081] 从表2可以看出,与A组(无复配精油添加剂饲料喂养组)比较,其他各复配精油添加剂喂养的鸽子,其日均摄食量和日均增重均显著增加,其中以F组增重最显著,说明本发明复配精油作为饲料添加剂,能显著促进鸽子食欲,调理胃肠功能,增加摄食和体重,缺少其中任何一味精油,都导致其作用下降。
[0082] 3.结论:本发明的复配精油添加到禽类饲料中可显著增加禽类的摄食量和体重。