[0005] 本发明的目的是提供一种四氧化三铁复合金属螯合物模拟酶的制备方法;
[0006] 本发明具体包括如下步骤:
[0007] 步骤1、将Fe3+盐、醋酸盐和表面活性剂溶于乙二醇中,将混合物连续搅拌至完全溶3+
解,其中Fe ,醋酸根离子的摩尔比为1:5~3:8;
[0008] 所述的含Fe3+盐为FeCl3、Fe(NO3)3;
[0009] 所述的醋酸盐为醋酸钾、醋酸钠、醋酸钙;
[0010] 步骤2、将步骤1得到的溶液转移至装有聚四氟乙烯内胆的高压反应釜中,放入已升温至100~200℃烘箱中,反应6~24小时,然后随炉冷却至室温;
[0011] 步骤3、倾出反应釜中的上层清液,将沉淀物取出,分别用乙醇和去离子水至少洗涤三次,在25~60℃下干燥8小时得到样品Fe3O4‑SL;
[0012] 步骤4、在中性环境下,将步骤3得到的Fe3O4‑SL加入到含有0.2~0.5g/L的变价金属离子的溶液中,然后将其完全混合;
[0013] 所述的变价金属离子为Cu2+、Ce4+、Fe3+。
[0014] 步骤5、将步骤4得到的混合液置于三颈烧瓶中,以300~500r/min的机械搅拌速率搅拌2~5h;
[0015] 步骤6、倾出三颈烧瓶中的上层清液,将沉淀物取出,分别用乙醇和去离子水至少洗涤三次,在25~60℃下干燥8小时得到产物四氧化三铁复合金属螯合物;
[0016] 上述方法制备的四氧化三铁复合金属螯合物模拟酶快速检测过氧化氢的方法具体步骤如下:
[0017] 步骤⑴、将步骤6中得到的四氧化三铁复合金属螯合物分散于水中形成模拟酶储备液;
[0018] 步骤⑵、将步骤⑴制备的模拟酶储备液加入到HAc‑NaAc缓冲液中;然后向体系中加入3,3’,5,5’‑四甲基联苯胺盐酸盐(TMB)作为比色反应底物;再加入50μL已知浓度的过氧化氢溶液,在水浴中培养35分钟后得到最终反应液;
[0019] 步骤⑶、取步骤⑵中的最终反应液,测定在紫外‑可见吸收分光光谱652nm处的吸光度值;
[0020] 步骤(4)、根据步骤⑵中过氧化氢浓度和步骤⑶中得到的吸光光度值,建立浓度‑吸光光度值的标准曲线;
[0021] 步骤⑸、按照步骤⑵中的方法,配制未知过氧化氢浓度的溶液,同时测定该溶液的吸光光度值;将该吸光光度值代入步骤(4)得到的浓度‑吸光光度值标准曲线,从而计算出未知溶液中过氧化氢的浓度。
[0022] 优选的,步骤1中的表面活性剂选用的是木质素磺酸盐。
[0023] 优选的,步骤5中三颈烧瓶置于25℃的环境中进行搅拌。
[0024] 优选的,步骤⑵中模拟酶储备液浓度为0.1mg/mL~0.8mg/mL。
[0025] 优选的,步骤⑵中HAc‑NaAc缓冲液pH值范围2~12。
[0026] 优选的,步骤⑵中培养温度范围为15℃~75℃。
[0027] 本发明的显著优点是:
[0028] 1)本发明中Fe3O4复合金属螯合物通过两步合成。首先采用水热法合成了Fe3O4‑SL,SL分子衍生出大的RCOO‑基团,可以吸附在Fe3O4粉末的表面,在温和条件下金属离子被Fe3O4‑SL吸附形成纳米复合材料,由于静电和空间效应,颗粒具有良好的分散性;
[0029] 2)本发明制备的Fe3O4复合金属螯合物具有良好的形貌且粒径小,具有优异的过氧化物酶催化能力,分离过程简单、方便的、稳定的、可重复利用;
[0030] 3)基于Fe3O4复合金属螯合物模拟酶优异的过氧化物酶活性,本发明建立了高灵敏、低成本、简便检测过氧化氢的方法。本发明的反应条件温和,检测速度快,灵敏度高,选择性好,可实现过氧化氢的可视化快速识别和检测,具有较高的使用价值。