[0005] 本发明的目的是提供了一种利用高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法。采用本发明的技术方案，利用高效液相色谱仪在14min内准确分析出多种抗生素，所述多种抗生素包括磺胺类抗生素、β‑内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素。
[0006] 本发明的一种高效液相色谱快速检测多种抗生素的方法，所述抗生素包括磺胺类抗生素、β‑内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素，该方法包括以下步骤：
[0007] (1)首先选取含多种抗生素的待测水样；
[0008] (2)将待测水样进行过滤，然后加入Na2‑EDTA，并调节pH值至3；
[0009] (3)在活化后的HLB小柱中通入步骤(2)处理后的待测水样，对待测水样进行富集；
[0010] (4)利用洗脱剂对富集后的HLB小柱进行洗脱，得到洗脱液，将洗脱液进行浓缩，得到浓缩液；
[0011] (5)将浓缩液用甲醇定容至1mL，移取稀释后的待测水样，利用高效液相色谱进行检测抗生素，所述高效液相色谱采用Shim‑pack GIST C18的色谱柱，柱温为40℃，进样体积为30μL，其中高效液相色谱仪采用的流动相为以浓度为0.1％的甲酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C，采用梯度洗脱方式，流动相的流速为0.8mL/min；
[0012] (6)计算出水样中抗生素对应的峰面积，根据标准曲线定量计算，得出水样中多种抗生素的含量，其中所述标准曲线是精密称取甲氧苄啶、磺胺嘧啶，磺胺甲恶唑，头孢克洛，头孢克肟，头孢唑林，氟罗沙星，诺氟沙星，环丙沙星，洛美沙星，每种标准品5mg，分别用甲醇定容至10mL，配成将标准品配制成0.5mg/mL的单标储备液。取1mL单标储备液，用甲醇定容至25ml，配置成20mg/L的混标储备液备用，4℃保存，用甲醇将混标储备液稀释成如下梯度浓度的标准系列：1μg/mL，0.6μg/mL，0.5μg/mL，0.4μg/mL，0.3μg/mL，0.2μg/mL，0.1μg/mL，然后按照步骤(5)的色谱程序进行检测得出的。
[0013] 优选的，所述步骤(2)中采用孔径为0.45μm滤膜过滤水样，且Na2‑EDTA的加入量为0.5g/L。
[0014] 优选的，所述步骤(2)中采用4mol/L的盐酸调节水样的pH。
[0015] 优选的，所述步骤(3)HLB小柱的活化方法为依次用5mL甲醇，5mL质量浓度为0.1％甲酸水溶液通过HLB小柱进行活化处理。
[0016] 优选的，所述步骤(3)中待测水样通过HLB小柱的速度为5mL/min。
[0017] 优选的，步骤(4)对富集后的HLB小柱进行洗脱具体为：首选使用6mL质量浓度为5％的甲醇水溶液对富集后的HLB小柱进行淋洗，真空干燥20min后再使用6mL甲醇进行淋洗。
[0018] 优选的，步骤(5)中洗脱液的浓缩方法为在通风橱中自然吹风至近干。
[0019] 优选的，所述磺胺类抗生素为甲氧苄啶、磺胺嘧啶，磺胺甲恶唑，β‑内酰胺类抗生素为头孢克洛，头孢克肟，头孢唑林，喹诺酮类抗生素为氟罗沙星，诺氟沙星，环丙沙星，洛美沙星。
[0020] 优选的，步骤(6)中流动相的梯度洗脱方式为：0‑6min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为8:1:1；6‑8min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为13:5:2；8‑9min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为6:3:1；9‑13min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为5:4:1；13‑14min，流动相A与流动相B、流动相C的体积比为8:1:1。
[0021] 优选的，所述高效液相色谱仪的检测波长为270nm。
[0022] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明的检测多种抗生素的方法所用的检测时间大大缩短，可同步检索出十种抗生素，其中包括磺胺类抗生素、β‑内酰胺类抗生素、喹诺酮类抗生素。简化了检测工艺、降低了检测成本同时提高了检测效率。
