[0025] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0026] 实施例1:秘鲁鱿鱼吸盘环齿研究
[0027] 原料:冷冻秘鲁鱿鱼须,购自舟山海利远洋渔业有限公司。
[0028] 试剂:标准牛血清蛋白,美国Sigma公司;甲壳素,上海生工生物工程有限公司;其余盐酸、氢氧化钠试剂均为分析纯,国药集团化学试剂有限公司。
[0029] 仪器与设备:Nicolet 6700红外光谱仪,美国Thermo Nicolet公司;HH‑4型电热恒温水浴锅,常州国华电器有限公司;LGJ‑10冷冻干燥机,北京松源华兴科技发展有限公司;GZX‑9240MBE电热鼓风干燥箱,上海博迅实业有限公司;飞纳台式扫描显微镜,复纳科学仪器上海有限公司;DFT‑250高速万能粉碎机,上海楚定分析仪器有限公司;200F 3型差示热扫描仪,德国耐驰公司。
[0030] 1.1秘鲁鱿鱼吸盘环齿基本成分的测定
[0031] 按照国标GB5009.3‑2016中直接干燥法进行测定水分含量;按照国标GB5009.5‑2016中凯氏定氮的方法进行测定蛋白质含量;按照国标GB5009.4‑2016中高温灼烧法进行测定灰分含量。
[0032] 测定结果如表1所示,由表1可见,秘鲁鱿鱼吸盘环齿主要由蛋白质组成,其蛋白含量达86.75%。
[0033] 表1秘鲁鱿鱼吸盘环齿的基本成分
[0034]
[0035] 1.2秘鲁鱿鱼吸盘环齿红外光谱分析
[0036] 参照官爱艳等的方法(官爱艳,杨文鸽等,秘鲁鱿鱼皮明胶‑壳聚糖复合膜的性能与结构表征[J].核农学报,2017,31(7):1349‑1354)进行红外光谱分析:将鱿鱼吸盘环齿粉碎后取环齿粉末在玛瑙研钵中进一步研磨,环齿粉末与干燥KBr粉末按质量比约为1:100在玛瑙研钵中研磨混匀,将研磨均匀的粉末放于模具中,均匀加压,得到薄且透明的待测样‑1片,使用红外光谱仪进行扫描测试,光谱范围:4000~400cm 。牛血清白蛋白(BSA)与甲壳素(chitin)样品同样磨成粉末后进行红外光谱分析。
[0037] 对秘鲁鱿鱼吸盘环齿进行红外光谱分析,并与牛血清蛋白、甲壳素的红外光谱进行比较,结果如图1所示。由图1可见,秘鲁鱿鱼吸盘环齿谱图与牛血清蛋白类似,具有蛋白‑1 ‑1类物质的特征吸收峰(3421,1644,1544和1116cm ),其中3421cm 附近的强吸收峰为蛋白‑1 ‑1
质类O‑H的伸缩振动峰,2918cm 附近的吸收峰是C‑H的伸缩振动峰,1640cm 附近的吸收峰‑1 ‑1
是C=O的伸缩振动峰,1544cm 和1457cm 附近的吸收峰分别为酰胺2带中N‑H面内弯曲振‑1 ‑1
动峰及C‑N伸缩振动峰,1230cm 和1116.58cm 附近的吸收峰分别为酰胺3带中N‑H面内弯曲振动峰和C‑N伸缩振动峰。
[0038] 与甲壳素的红外图谱对比可发现,秘鲁鱿鱼吸盘环齿样品中未出现甲壳素的特征‑1峰(2934.65和2871.61cm ),这表明秘鲁鱿鱼吸盘环齿中不存在甲壳素成分,这与鱿鱼另一个坚硬组织喙不一样,鱿鱼喙中的甲壳素含量达15~20%,是其主要的组成部分之一。
[0039] 1.3秘鲁鱿鱼吸盘环齿微观结构观察
[0040] 切取秘鲁鱿鱼吸盘环齿截面,用去离子水浸泡过夜以除去残留盐,干燥后,按照王绍清等的方法(王绍清,曹红,曹宝森.扫描电镜法观察鸡蛋壳超微结构形貌[J].食品科学,2013,34(13):110‑114)进行扫描电镜观察。
[0041] 秘鲁鱿鱼吸盘环齿的外观和扫描电子显微镜观察结果如图2~5所示。由图2可见,秘鲁鱿鱼吸盘环齿呈环状,由基底环和一系列牙列组成,颜色为黄褐色。由3和图4可见,秘鲁鱿鱼吸盘环齿的微观结构呈平行管状构造,该构造会直接影响到环齿的机械性能,由于吸盘环齿分布于鱿鱼须和触手位置并被用于捕获猎物,通常要求能承受很大的机械载荷,而吸盘环齿的平行管状结构能增强环齿的弯曲刚度,使其能够承受很大的弯曲力或剪切力。
[0042] 由图5可知,秘鲁鱿鱼吸盘环齿同时也具有多孔结构,其孔隙度通常高达80~90%,因此相对连续介质材料,它具有相对密度低、重量轻等特点;同时,秘鲁鱿鱼吸盘环齿的孔隙呈梯度分布,这使其具有梯度硬度的特征(即在齿边缘硬度最高,后朝向环齿基底内部逐渐变软)。此外,多孔结构还能使秘鲁鱿鱼吸盘环齿在其构成介质之间形成防裂机制,以增强其结构的稳定性。
[0043] 1.4秘鲁鱿鱼吸盘环齿热稳定性分析
[0044] 差示扫描量热法(Differential scanning calorimetry,DSC)参照高必成等的方法(高必成,郑尚菊.羽毛角蛋白及加工产品的热分析研究[J].上海交通大学学报(农业科学版),1994(3):182‑185):将秘鲁鱿鱼吸盘环齿用研钵均匀研磨后,取适量吸盘环齿粉末,使用DSC从30℃升温至300℃,升温速率10℃/min,氮气为保护气。
[0045] 差示热量扫描仪检测出的曲线图会在最大迁移点处显示出样品的热变性温度。由秘鲁鱿鱼吸盘环齿的热变性曲线图(图6)发现:在温度30~250℃内,氮气流保护下,鱿鱼吸盘环齿在69.4℃左右出现一个吸收峰,这是由于环齿中水分蒸发的物理变化引起的,同时吸盘环齿在约36℃处检测到DSC曲线的斜率出现明显的降低,也说明其内部水分在蒸发,在118.6℃左右有一个吸热峰,表明鱿鱼吸盘环齿在118.6℃以前没有状态变化,性质稳定,之后由固体变成熔融状态;在218.4℃之后出现一个很明显吸热转变峰,此时说明在该温度下鱿鱼吸盘环齿中的蛋白二级结构β‑折叠受热被破坏。
[0046] 1.5秘鲁鱿鱼环齿耐酸碱性测试
[0047] 耐酸碱性测试参照夏锟峰等的方法(夏锟峰,王芬,阮蒙,杨仁党,刘德桃.生物可降解纤维素/聚乳酸复合薄膜的制备与性能[J].高分子材料科学与工程,2014,30(1):149‑152.):采用HCl、NaOH和NaHCO3分别配制pH为2、4、6、7、8、10、12的溶液,将样品在60℃真空中干燥至恒重后称量(M),分别放入上述已配置好溶液中,浸泡处理2h后取出用去离子水洗净,干燥至恒重后称量(m),平行实验3次。利用以下公式计算质量损失率:
[0048]
[0049] 材料的耐酸碱性很大程度上决定了材料的耐用性。秘鲁鱿鱼吸盘环齿的主要组成为蛋白质,容易在酸碱条件出现水解,因此实验进行了鱿鱼吸盘环齿的耐酸碱性测试,结果如图7所示。由图7可见,在酸性条件下鱿鱼吸盘环齿的质量损失较高,随pH值的降低,其质量损失率增加;而在碱性条件下,鱿鱼吸盘环齿的稳定性相对较好。虽然同样会有一定的质量损失,但是与酸性条件相比,其质量损失率较小,且质量损失率随着pH值增加而增加。以上结果表明,秘鲁鱿鱼吸盘环齿在弱酸和弱碱中均具有一定的耐酸碱性,但长时间置于强酸强碱环境中会出现较大的质量损失。
[0050] 在实施例1的基础上,本发明对秘鲁鱿鱼须环齿的脱离方法进行设计,具体如实施例2~4所示,实施例2~4中的冷冻鱿鱼须也购自舟山海利远洋渔业有限公司。
[0051] 实施例2:
[0052] 一种利用酶法脱离秘鲁鱿鱼吸盘环齿的工艺,包括以下步骤:
[0053] (1)预处理:将冷冻的鱿鱼须解冻,清洗沥干,备用。
[0054] (2)预分离:将预处理后的鱿鱼须放置在加热板上,接着在鱿鱼须上放置挤压板,60℃下加热4s,加热过程中同时用挤压板挤压鱿鱼须。由实施例1可知,环齿的主要成分为蛋白质,而蛋白质具有遇热变性的问题,因此本实施例中,将加热温度设置在60℃,加热时间设置在4s。环齿加热后发生软化而与挤压板发生一定的粘附作用,从而能使挤压板在挤压环齿的同时能在环齿与吸盘之间发生一定的拉伸作用,从而实现吸盘与环齿的分离。
[0055] (3)快速冷却:将预分离后的鱿鱼须放入流化冰溶液中冷却。为进一步避免环齿和吸盘在加热过程中变性而影响鱿鱼须产品的品质,同时也能更好地避免加热软化后的环齿与吸盘复粘,本实施例中的冷却温度为1℃,冷却时间为3min。此外,为进一步避免加热对鱿鱼须蛋白成分的影响,又能避免环齿与吸盘复粘,上述流化冰溶液中溶解有海藻糖和乳酸钠,其中海藻糖的浓度为5g/L,乳酸钠的浓度为5g/L。
[0056] (4)酶解脱齿:将鱿鱼须从流化冰溶液中取出,沥干,在超声条件下,采用风味酶和胶原酶对冷却后的鱿鱼须进行酶解,以使环齿与鱿鱼须脱离。本实施例中超声频率为18KHZ,超声时间为20min,酶的添加总量为鱿鱼须总量的0.05%,酶解时间为50min,酶解温度为70℃,风味酶和胶原酶的质量比为1:2,脱齿率可达96.2%。
[0057] 实施例3:
[0058] 一种利用酶法脱离秘鲁鱿鱼吸盘环齿的工艺,包括以下步骤:
[0059] (1)预处理:将冷冻的鱿鱼须解冻,清洗沥干,备用。
[0060] (2)预分离:将预处理后的鱿鱼须放置在加热板上,接着在鱿鱼须上放置挤压板,80℃下加热3s,加热过程中同时用挤压板挤压鱿鱼须。由实施例1可知,环齿的主要成分为蛋白质,而蛋白质具有遇热变性的问题,因此本实施例中,将加热温度设置在80℃,加热时间设置在2s。环齿加热后发生软化而与挤压板发生一定的粘附作用,从而能使挤压板在挤压环齿的同时能在环齿与吸盘之间发生一定的拉伸作用,从而实现吸盘与环齿的分离。
[0061] (3)快速冷却:将预分离后的鱿鱼须放入流化冰溶液中冷却。为进一步避免环齿和吸盘在加热过程中变性而影响鱿鱼须产品的品质,同时也能更好地避免加热软化后的环齿与吸盘复粘,本实施例中的冷却温度为2℃,冷却时间为4min。此外,为进一步避免加热对鱿鱼须蛋白成分的影响,又能避免环齿与吸盘复粘,上述流化冰溶液中溶解有海藻糖和乳酸钠,其中海藻糖的浓度为10g/L,乳酸钠的浓度为5g/L。
[0062] (4)酶解脱齿:将鱿鱼须从流化冰溶液中取出,沥干,在超声条件下,采用风味酶和胶原酶对冷却后的鱿鱼须进行酶解,以使环齿与鱿鱼须脱离。本实施例中超声频率为30KHZ,超声时间为15min,酶的添加总量为鱿鱼须总量的0.25%,酶解时间为10min,酶解温度为30℃,风味酶和胶原酶的质量比为1:2,脱齿率可达96.1%。
[0063] 实施例4:
[0064] 一种利用酶法脱离秘鲁鱿鱼吸盘环齿的工艺,包括以下步骤:
[0065] (1)预处理:将冷冻的鱿鱼须解冻,清洗沥干,备用。
[0066] (2)预分离:将预处理后的鱿鱼须放置在加热板上,接着在鱿鱼须上放置挤压板,70℃下加热3s,加热过程中同时用挤压板挤压鱿鱼须。由实施例1可知,环齿的主要成分为蛋白质,而蛋白质具有遇热变性的问题,因此本实施例中,将加热温度设置在70℃,加热时间设置在3s。环齿加热后发生软化而与挤压板发生一定的粘附作用,从而能使挤压板在挤压环齿的同时能在环齿与吸盘之间发生一定的拉伸作用,从而实现吸盘与环齿的分离。
[0067] (3)快速冷却:将预分离后的鱿鱼须放入流化冰溶液中冷却。为进一步避免环齿和吸盘在加热过程中变性而影响鱿鱼须产品的品质,同时也能更好地避免加热软化后的环齿与吸盘复粘,本实施例中的冷却温度为4℃,冷却时间为5min。此外,为进一步避免加热对鱿鱼须蛋白成分的影响,又能避免环齿与吸盘复粘,上述流化冰溶液中溶解有海藻糖和乳酸钠,其中海藻糖的浓度为15g/L,乳酸钠的浓度为6g/L。
[0068] (4)酶解脱齿:将鱿鱼须从流化冰溶液中取出,沥干,在超声条件下,采用风味酶和胶原酶对冷却后的鱿鱼须进行酶解,以使环齿与鱿鱼须脱离。本实施例中超声频率为22KHZ,超声时间为17min,酶的添加总量为鱿鱼须总量的0.17%,酶解时间为34min,酶解温度为43℃,风味酶和胶原酶的质量比为1:2,脱齿率可达97.2%。
[0069] 实施例5:
[0070] 一种利用酶法脱离秘鲁鱿鱼吸盘环齿的工艺,包括以下步骤:
[0071] (1)预处理:将冷冻的鱿鱼须解冻,清洗沥干,备用。
[0072] (2)预分离:将预处理后的鱿鱼须放置在加热板上,接着在鱿鱼须上放置挤压板,65℃下加热3s,加热过程中同时用挤压板挤压鱿鱼须。由实施例1可知,环齿的主要成分为蛋白质,而蛋白质具有遇热变性的问题,因此本实施例中,将加热温度设置在65℃,加热时间设置在3s。环齿加热后发生软化而与挤压板发生一定的粘附作用,从而能使挤压板在挤压环齿的同时能在环齿与吸盘之间发生一定的拉伸作用,从而实现吸盘与环齿的分离。
[0073] (3)快速冷却:将预分离后的鱿鱼须放入流化冰溶液中冷却。为进一步避免环齿和吸盘在加热过程中变性而影响鱿鱼须产品的品质,同时也能更好地避免加热软化后的环齿与吸盘复粘,本实施例中的冷却温度为2℃,冷却时间为4min。此外,为进一步避免加热对鱿鱼须蛋白成分的影响,又能避免环齿与吸盘复粘,上述流化冰溶液中溶解有海藻糖和乳酸钠,其中海藻糖的浓度为12g/L,乳酸钠的浓度为6g/L。
[0074] (4)酶解脱齿:将鱿鱼须从流化冰溶液中取出,沥干,在超声条件下,采用风味酶和胶原酶对冷却后的鱿鱼须进行酶解,以使环齿与鱿鱼须脱离。本实施例中超声频率为25KHZ,超声时间为15min,酶的添加总量为鱿鱼须总量的0.10%,酶解时间为30min,酶解温度为50℃,风味酶和胶原酶的质量比为1:2,脱齿率可达96.5%。