[0028] 为了更好的理解本发明,下面通过实施例对本发明进一步说明,实施例只用于解释本发明,并不会对本发明构成任何限定。
[0029] 所用仪器为:IS5傅立叶变换红外光谱仪(赛默飞世尔)、ATR-ID7附件、P210超声器 (Elma)、6mL SPE小柱塑料管及筛板(Agilent);
[0030] 所用试剂为:95%乙醇、正己烷、氢氧化钾均为分析纯(国药),3A分子筛(郑州天祥无机材料有限公司,Ф=0.5-1mm);
[0031] 所用植物油样品为:5种品牌芝麻油、5种品牌玉米油都购于超市。
[0032] 高碱度皂化液的配制方法:准确称取氢氧化钾,用50mL去离子水溶解,转移到1000mL 的容量瓶中,用无水乙醇定容至刻度,制得浓度为2mol/L氢氧化钾乙醇溶液;乙醇水溶液为10%(v/v)乙醇水溶液。
[0033] 国标法提取不皂化物用正己烷,每次25mL提取三次,具体方法为:植物油试样皂化结束,冷却后转移皂化液至第一个分液漏斗中,加入25mL去离子水,25mL正己烷混匀后静止分层,将下层皂化液放入第二个分液漏斗,用相同方法每次用25mL正己烷对皂化液再提取两次;三次正己烷提取液收集在同一个分液漏斗中(如果形成乳化液,必须加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠破乳),用乙醇水溶液将不皂化物提取液洗至中性,再移取有机相于试管中,加入适量无水硫酸钠,上层清液转移至蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂,采集不皂化物红外光谱。
[0034] 红外光谱采集数据:波数范围3100-670cm-1,分辨率4cm-1,扫描次数32,植物油、不皂化物直接涂抹在ATR-ID7金刚石晶体上,采集的红外光谱通过OMNIC软件,经自动基线校正、纵坐标归一化后保存。采集后,晶体用正己烷清洗两次,然后用丙酮清洗,并用软布擦干,再涂抹下一个样品。
[0035] 实施例1
[0036] 一种植物油不皂化物的提取方法,具体包括以下步骤:
[0037] (1)在2g植物油试样中加入30mL的2mol/L的氢氧化钾乙醇溶液,涡旋震荡0.5min,并在超声加热作用下对其进行皂化处理;其中,氢氧化钾乙醇溶液中乙醇为无水乙醇;
[0038] (2)对植物油试样进行皂化处理后,在处理液中先加入去离子水摇匀对皂化液进行稀释,再加入正己烷进行不皂化物提取;其中,加入的去离子水和正己烷的体积比为7:3,去离子水加入量为35mL,正己烷的加入量为15mL,提取不皂化物一次后静置,直至水相和有机相分层,即完成不皂化物提取;
[0039] (3)设计专用于除水除皂的SPE小柱,吸取静置分层后的底部有机相过SPE小柱进行一次除水除皂处理;其中,SPE小柱带下筛板,下层填充1/3柱体积的无水硫酸钠,上层填充1/3柱体积的3A分子筛,在本实施例中,SPE小柱中无水硫酸钠的填充高度为2cm,3A 分子筛的填充高度为2cm;
[0040] (4)收集流经SPE小柱的流出物于蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂后采集不皂化物的红外光谱,观察不皂化物红外谱图1748cm-1峰的强度。
[0041] 进一步地,所述步骤(1)皂化处理中超声皂化温度为55℃,超声皂化时间为10min,超声频率为37Hz,超声能量为70%power。
[0042] 实施例2
[0043] 一种植物油不皂化物的提取方法,具体包括以下步骤:
[0044] (1)在4g植物油试样中加入60mL的2mol/L的氢氧化钾乙醇溶液,涡旋震荡0.7min,并在超声加热作用下对其进行皂化处理;其中,氢氧化钾乙醇溶液中乙醇为无水乙醇;
[0045] (2)对植物油试样进行皂化处理后,在处理液中先加入去离子水摇匀对皂化液进行稀释,再加入正己烷进行不皂化物提取;其中,加入的去离子水和正己烷的体积比为7:3,去离子水加入量为40mL,正己烷的加入量为18mL,提取不皂化物一次后静置,直至水相和有机相分层,即完成不皂化物提取;
[0046] (3)设计专用于除水除皂的SPE小柱,吸取静置分层后的底部有机相过SPE小柱进行一次除水除皂处理;其中,SPE小柱带下筛板,下层填充1/3柱体积的无水硫酸钠,上层填充1/3柱体积的3A分子筛,在本实施例中,SPE小柱中无水硫酸钠的填充高度为3cm,3A 分子筛的填充高度为3cm;
[0047] (4)收集流经SPE小柱的流出物于蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂后采集不皂化物的红外光谱,观察不皂化物红外谱图1748cm-1峰的强度。
[0048] 进一步地,所述步骤(1)皂化处理中超声皂化温度为60℃,超声皂化时间为15min,超声频率为80Hz,超声能量为30%power。
[0049] 实施例3
[0050] 一种植物油不皂化物的提取方法,具体包括以下步骤:
[0051] (1)在1g植物油试样中加入15mL的2mol/L的氢氧化钾乙醇溶液,涡旋震荡0.6min,并在超声加热作用下对其进行皂化处理;其中,氢氧化钾乙醇溶液中乙醇物无水乙醇;
[0052] (2)对植物油试样进行皂化处理后,在处理液中先加入去离子水摇匀对皂化液进行稀释,再加入正己烷进行不皂化物提取;其中,加入的去离子水和正己烷的体积比为7:3,去离子水加入量为30mL,正己烷的加入量为12.8mL,提取不皂化物一次后静置,直至水相和有机相分层,即完成不皂化物提取;
[0053] (3)设计专用于除水除皂的SPE小柱,吸取静置分层后的底部有机相过SPE小柱进行一次除水除皂处理;其中,SPE小柱带下筛板,下层填充1/3柱体积的无水硫酸钠,上层填充1/3柱体积的3A分子筛,在本实施例中,SPE小柱中无水硫酸钠的填充高度为0.5cm,3A 分子筛的填充高度为0.5cm;
[0054] (4)收集流经SPE小柱的流出物于蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂后采集不皂化物的红外光谱,观察不皂化物红外谱图1748cm-1峰的强度。
[0055] 进一步地,所述步骤(1)皂化处理中超声皂化温度为45℃,超声皂化时间为12min,超声频率为50Hz,超声能量为70%power。
[0056] 实施例4
[0057] 一种植物油不皂化物的提取方法,具体包括以下步骤:
[0058] (1)在1.5g植物油试样中加入22.5mL的2mol/L的氢氧化钾乙醇溶液,涡旋震荡0.7min,并在超声加热作用下对其进行皂化处理;其中,氢氧化钾乙醇溶液中乙醇物无水乙醇;
[0059] (2)对植物油试样进行皂化处理后,在处理液中先加入去离子水摇匀对皂化液进行稀释,再加入正己烷进行不皂化物提取;其中,加入的去离子水和正己烷的体积比为7:3,去离子水加入量为38mL,正己烷的加入量为16.2mL,提取不皂化物一次后静置,直至水相和有机相分层,即完成不皂化物提取;
[0060] (3)设计专用于除水除皂的SPE小柱,吸取静置分层后的底部有机相过SPE小柱进行一次除水除皂处理;其中,SPE小柱带下筛板,下层填充1/3柱体积的无水硫酸钠,上层填充1/3柱体积的3A分子筛,在本实施例中,SPE小柱中无水硫酸钠的填充高度为1cm,3A 分子筛的填充高度为1cm;
[0061] (4)收集流经SPE小柱的流出物于蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂后采集不皂化物的红外光谱,观察不皂化物红外谱图1748cm-1峰的强度;
[0062] 进一步地,所述步骤(1)皂化处理中超声皂化温度为50℃,超声皂化时间为14min,超声频率为70Hz,超声能量为100%power;
[0063] 综上所述,根据上述实施例1至4提取植物油不皂化物,筛选出最优超声皂化参数为:在sweep模式下,皂化温度为55℃,超声皂化时间为10min,超声频率37Hz,能量70%时,不皂化物红外光谱中表征脂肪酸甘油酯的特征吸收峰1748cm-1峰强最小,该条件下皂化效率最高,因此选择该条件进行后续植物油皂化。
[0064] 实施例5
[0065] 本发明提供的植物油不皂化物提取方法的稳定性研究,具体步骤如下:
[0066] (1)称取4份相同质量的2g玉米油试样,由两人分别按以下步骤完成玉米油不皂化提取:每份玉米油试样分别添加30mL,2mol/L的氢氧化钾乙醇溶液并在超声加热作用下对其进行皂化处理;将分别添加了氢氧化钾乙醇溶液的玉米油试样进行涡旋震荡0.5min,超声器在sweep模式下对玉米油试样进行超声加热皂化处理,选择超声温度为55℃,超声处理时间为10min,超声频率为37HZ,超声能量为70%power;
[0067] (2)对玉米油试样进行皂化处理后,在处理液中先加入去离子水摇匀对皂化液进行稀释,再加入正己烷进行不皂化物提取;其中,加入的去离子水和正己烷的体积比为7:3,去离子水加入量为35mL,正己烷的加入量为15mL,提取不皂化物一次后静置,直至水相和有机相分层,即完成不皂化物提取;
[0068] (3)设计专用于除水除皂的SPE小柱,吸取静置分层后的底部有机相过SPE小柱进行一次除水除皂处理;其中,SPE小柱带下筛板,下层填充2cm的无水硫酸钠,上层填充2cm 的3A分子筛;
[0069] (4)收集流经SPE小柱的流出物于蒸发皿中,在60℃水浴加热条件下挥干溶剂后采集 4份不皂化物的红外光谱,观察不皂化物红外谱图1748cm-1峰的强度。
[0070] 实施例6
[0071] 利用本发明提供的植物油不皂化物的提取方法,分离、富集了五个牌号的玉米油与五个牌号的芝麻油中的不皂化物,获得了五个牌号的玉米油与五个牌号的芝麻油的不皂化物谱图,具体不皂化物的分离、富集方法参见实施例1。
[0072] 数据分析:
[0073] 参见附图1为根据本发明实施例1的植物油不皂化物提取方法(SPE法)和国标法分别提取玉米油不皂化物的红外光谱对比图,从图中可知,两种方法得到的玉米油不皂化物,它们的红外光谱相同,都不存在皂的红外特征吸收峰1580cm-1和水的红外特征吸收峰1640cm-1,表明本发明提供的SPE小柱可以一次性除去含有不皂化物的有机相中残余的碱性物质和水。
[0074] 参见附图2为利用本发明本发明方法不同次、不同人采集同一玉米油试样的不皂化物的红外光谱对比图,附图2表明四次制样得到的玉米油不皂化物红外光谱谱图相同,说明利用本发明的方法对植物油不皂化物进行分离富集具有很好的稳定性,可以保证一个样品一种谱图。
[0075] 参见附图3和附图4,附图3是本发明中收集的五个牌号的玉米油与五个牌号的芝麻油红外光谱图,其中cornoil-1至cornoil-5为5个玉米油试样,sesameoil-1至sesameoil-5为5 个芝麻油试样,由附图3可知玉米油和芝麻油两种植物油的红外光谱几乎完全相同;根据本发明实施例1的植物油不皂化物提取方法,采集上述五个牌号的玉米油与五个牌号的芝麻油的不皂化物红外光谱图进行对比(如图4),其中cornoil unsapofiable-1至cornoil unsapofiable-5 为分离富集后五个玉米油的不皂化物试样红外光谱图,sesameoil unsapofiable-1至sesameoil unsapofiable-5为分离富集后五个芝麻油不皂化物试样红外光谱图,由附图4可知,玉米油和芝麻油的不皂化物红外光谱有很大差异。显然,采用红外光谱法与化学计量学结合建立植物油鉴定或掺假植物油筛查方法,在现有的植物油红外光谱数据的基础上添加经分离、富集获取的植物油不皂化物红外光谱数据,将大大提高方法的敏感性和特异性。
[0076] 以上所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。