[0041] 以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式,本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用,本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用,在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。需说明的是,在不冲突的情况下,以下实施例及实施例中的特征可以相互组合。
[0042] 实施例一:
[0043] 如图1‑4所示,本实施例以离心法为基础,提出一种利用离心法自动制备细胞蜡块的装置及其方法,使细胞团块的固定、脱水、透明、染色、浸蜡、冷却等步骤的自动运行都在设计的试管2中完成,而不需加压、抽取装置。
[0044] 具体的,自动制备细胞蜡块的装置包括转盘1、试管2、抽取石蜡装置3、取液装置4、套筒加热装置5以及搅拌装置6。
[0045] 其中,转盘1具有多个对称布置的,用于固定试管2的固定孔11,转盘1 根据大小及规模需要可开取4个、或8个、16个等固定孔11,即一次性可放置对应数量的试管2,放置时要求对称,以防止离心时偏置。
[0046] 试管2包括试管壁21,试管壁21的内侧底部镶嵌有金属片24,金属片 24形状与试管2底部贴合,金属片24要求表面光滑,以使离心后的细胞团块可附着在其表面,其同时进入搅拌过程后,细胞团块即会被打散、而不会一直粘附在金属片24上;金属片24所在的试管壁21底部为可拆卸结构或可剪裁分离,可拆卸结构可以为螺纹连接、过盈配合的插接、卡接等等,可剪裁分离则试管壁21材质选用柔性材质,比如塑料,与平常实验的试管2一致,可剪裁作为一次性使用,可拆卸根据需要可重复使用,当浸蜡步骤完毕、待试管2 内石蜡冷却后,操作人员即可方便的拆开试管2,剥离金属片24,获得制备的细胞蜡块。金属片24可以设计直接作为包埋框包埋,或者作为转移中转转移到包埋框中,进行下一步切片操作,同时金属片24在制备过程加热时,能提升底部局部的热传导,稳定细胞团块局部的制备温度要求,提升热使用效率。试管壁21的外侧中下部具有定位块22,用于与套筒加热装置5配合定位,转盘1固定孔11上适配设计有供定位块22穿过的避让孔。进一步的,试管2 底部设计为圆台结构,试管2由试管2口缩口至底部圆台,试管壁21口部直径大,然后向下不断倾斜、直径略微缩小,以方便套筒加热装置5上升时能与之接触。快到底部时倾斜加大,最后在底部收于比如3*3mm的圆形,其底部直径可根据医院人员对包埋框的大小要求设计而定,底部圆台界面为梯形,使金属片24直接作为包埋框包埋更加方便。优选的,在试管壁21的外侧贴附有金属网膜23,金属网膜23可由导热性好的金属薄片或者在金属薄片上开小洞形成,以方便套筒加热装置5的加热传导,防止在浸蜡步骤中试管2内的石蜡冷却凝固。
[0047] 抽取石蜡装置3用于向试管2内加入或吸取液体石蜡,包括第一机械臂、石蜡吸取管路、第一工作泵、第一电磁阀、金属石蜡池31,金属石蜡池31附有加热器,加热器设计在制备过程需要加入液体石蜡前,就对金属石蜡池31 进行提前加热以获取融化的液体石蜡,第一机械臂控制石蜡吸取管路伸入或伸出试管2,石蜡吸取管路连通金属石蜡池31,第一工作泵、第一电磁阀安装于石蜡吸取管路上,用于控制开关及吸取或加入的动作。优选的,在石蜡吸取管路贴附保温层,同时设计金属石蜡池31与试管2间的较近的距离,减少石蜡受冷凝固。进一步的,金属石蜡池31设计具有两个分池,其中一个作为使用过的旧液体石蜡的收集池,同时为了减少交叉污染,设计吸取与加入的石蜡吸取管路为双管路,且该双管路相互贴合,可相互吸取热量,稳定准备过程中石蜡保持稳定液态的温度需要。
[0048] 取液装置4用于向试管2内加入试剂,及从试管2中取液,包括第二机械臂、导管、第二工作泵、第二电磁阀、若干试剂瓶41,第二机械臂控制导管伸入或伸出试管2,导管连通若干试剂瓶41,第二工作泵、第二电磁阀安装于导管上,导管可将试剂瓶41内的试剂吸取并加入到试管2中或从试管2中取液至试剂瓶41中,试剂瓶41包括用于放置福尔马林、酒精、伊红、以及二甲苯等液体试剂的试剂瓶41,对应的导管从底座处具有多个分路分别连通不同的试剂瓶41,以分别用于吸取福尔马林、浓度为95%酒精、无水酒精、尹红以及二甲苯等;优选的,试剂瓶41还包括用于放置清洗用的清水试剂瓶41及收集废液的废液瓶,及用于抽取待制作的细胞液体的试剂瓶41,前者可减少交叉污染,后者可根据需要代替倒入操作及进一步的批量自动化;第一机械臂、第二机械臂结构类同,包括底座、转动部以及夹持部,底座具有多个通孔,机械臂为中空结构,转动部内设置有控制器,导管或石蜡吸取管路的管路设置经过于机械臂内部的空洞,并最终露出于夹持部。
[0049] 所述套筒加热装置5设置在转盘1下方,可被控制上下移动,包括可升降的加热套筒51,加热套筒51顶部具有与试管壁21定位块22相适配的定位凸起52,根据需要选择适当的传感器,比如接触式或者红外式等等,当加热套筒51上升时定位凸起52与试管2定位块22接触可判断上升停止,加热套筒 51容器内形状设计与试管2的外部形状相适配以包裹试管2底部,加热套筒 51内具有加热膜53,同时,加热套筒51装置的材料选用导热性好的金属,利于加热、导热。
[0050] 搅拌装置6包括搅拌臂61、搅拌棒62,搅拌臂61控制搅拌棒62伸入或伸出试管2,及控制搅拌动作,搅拌臂61包括转动部及夹持部,搅拌棒62位于夹持部处,搅拌棒62的端部设计有可拆卸的搅拌头,可根据搅拌的容器及搅拌力度选择不同的搅拌头,以便于搅拌时将底部沉积的细胞团块搅拌、打散。
[0051] 本实施例还提供离心法自动制备细胞蜡块的装置的方法,包括步骤:
[0052] S1.取样,将待制备细胞蜡块的细胞液置入试管2中,并将试管2放置于转盘1固定孔11内固定;待制备细胞蜡块的细胞液可由操作人员将临床抽取或集中收集取样,取样的对象可以为人体体液细胞,如胸水、腹水、宫颈脱落细胞、浆膜腔积液、脑脊液、痰液等等,倒入的操作也可由取液装置4设计完成;
[0053] S2.形成细胞团块,通过离心将密度大的物质聚集于试管2底部,形成细胞团块;
[0054] 其中,离心指转盘1以1000‑2000转/秒,旋转1‑2分钟,之后根据过程,取液装置4将试管2内的上清液体或试剂吸出,或者抽取石蜡装置3将上层液体石蜡吸出;取液过程或者抽取上层液体石蜡的过程由对应的机械臂控制夹持部的管路伸入或伸出试管2完成;过程中根据转盘1上的试管2数目连续进行多次,优选的,每次吸取完及后续向试管2中加入试剂前,均需对吸管以清水进行冲洗,防止样本的交叉污染;若试管2上层液体颜色浑浊,可执行吸取清水入试管2,再离心后吸取上清液,重复次数操作人员可根据情况设定,或设计光电检测、浊度检测进行自动化判断执行重复。
[0055] S3.固定,进行重复的,加入固定用试剂、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀、离心的过程,该固定过程历时2小时,时间长短可由操作人员根据需要设置,该过程保证试管2内的试剂高于底部的细胞团块5cm;
[0056] 其中,加入固定用试剂指取液装置4向试管2内加入5‑10ml浓度为10%的中性福尔马林;搅拌指搅拌装置6控制搅拌棒62伸入试管2内进行搅拌动作,将细胞团块搅拌、打散后,伸出搅拌棒62,搅拌、打散可使所有细胞都能与加入试剂充分接触,若无以上搅拌过程,加入的试剂仅会与沉淀于试管2 底部的细胞团块上表面的细胞作用,而无法与内部的细胞充分作用;自然沉淀指试管2内细胞液体自然沉淀5‑10分钟;重复搅拌沉淀指重复3‑4次的,搅拌、自然沉淀的过程;离心加入重复过程目的是为防止作用后的试剂改变性能,设计提取过程中重复离心过程及重新加入新试剂,保证反应充分,提升制备的质量。
[0057] S4.脱水,包括一次脱水和二次脱水,所述一次脱水,进行重复的,加入一次脱水用试剂、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀、离心的过程,使得细胞充分脱水,该一次脱水过程历时1.5小时,时间长短可由操作人员根据需要设置;所述二次脱水,进行重复的,加入二次脱水用试剂、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀、离心的过程,重复一次脱水过程,该二次脱水过程历时1.5小时,时间长短可由操作人员根据需要设置;
[0058] 其中,加入一次脱水用试剂指取液装置4向试管2内加入浓度为95%的酒精;加入二次脱水用试剂指取液装置4向试管2内加入无水酒精;
[0059] S5.染色,进行加入染色用试剂、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀的过程,该染色过程历时20分钟,时间长短可由操作人员根据需要设置,该过程保证试管2内的试剂高于底部的细胞团块2cm;
[0060] 其中,加入染色用试剂指取液装置4向试管2内加入1ml—2ml伊红,染色试剂选择可根据实际需要,比如苏木精,伊红染色工艺要求简单方便,在本方案中可以不需离心,节约过程时间;
[0061] S6.透明,进行重复的,加入透明用试剂、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀、离心的过程,该透明过程历时30分钟,时间长短可由操作人员根据需要设置,该过程保证试管2内的试剂高于底部的细胞团块5cm;
[0062] 其中,加入透明用试剂指取液装置4向试管2内加入二甲苯;
[0063] S7.浸泡石蜡,进行重复的,加入液体石蜡、试管2加热、搅拌、自然沉淀、重复搅拌沉淀、试管2脱离加热、离心的过程,该过程历时1.5小时,将透明处理后细胞上残留的二甲苯置换出来,时间长短可由操作人员根据需要设置,该过程中试管2的温度在60—70℃,该过程保证试管2内的液体石蜡高于底部的细胞团块5cm;
[0064] 其中,加入液体石蜡指抽取石蜡装置3将石蜡 池内的石蜡融化,将融化后的石蜡加入至试管2内向试管2内加入液体石蜡;试管2加热指加入液体石蜡的同时,套筒加热装置5控制加热套筒51上升,至加热套筒51定位凸起52 与试管壁21定位块22抵靠时停止,此时加热套筒51包裹试管2底部,加热套筒51内加热膜53开始加热,套筒内有加热膜53以保证试管2内的石蜡不因受冷而凝固;试管2脱离加热指离心前,套筒加热装置5控制加热套筒51 下降,至脱离试管2,待离心转盘1停止转动,再根据过程需要再上升,融化试管2内石蜡后,吸出旧液体石蜡,加入新液体石蜡;
[0065] S8.以上步骤完毕,细胞团块已在试管2底部形成蜡块,且位于最底部,待石蜡冷却凝固后,操作人员即可取出试管2,拆卸或剪裁分离试管壁21底部,剥离金属片24获得细胞蜡块,进行下一步的切片操作。
[0066] 本实施例的基于离心法的自动制备细胞蜡块制备系统及其方法,制备过程方便、稳定、顺畅,适用性强,不受待制备细胞液细胞的大小、数量影响,且加热能耗低,对装置的安装精度要求低,对操作人员的技术要求低。
[0067] 本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。