[0044] 下面结合实施例对本发明的技术内容做进一步说明，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
[0045] 各实施例中使用的一起设备、化学试剂以及检测方法如下：
[0046] 仪器与设备：FW100高速万能粉碎机，天津市泰斯特仪器有限公司；UPC-Ⅱ-20T优普系列超纯水器，四川优普超纯科技有限公司；SQP电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；ZWYR-D2403振荡培养箱，上海智诚分析仪器制造有限公司；SHZ-DⅢ予华牌循环水真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司；HHS-6S电子恒温不锈钢水浴锅，上海宜昌仪器纱筛厂；UV1901PC紫外可见分光光度计，上海奥析科学仪器有限公司；
[0047] 化学试剂：无水碳酸钠、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、福林酚试剂、没食子酸标准品、各种类型大孔树脂等均由柳州苏利有限责任公司提供。
[0048] 测定：
[0049] 没食子酸标准曲线的建立：准确称取50mg没食子酸，用70％乙醇溶液定容至50ml，即得浓度为1.0mg/ml没食子酸标准溶液。取9支50ml容量瓶，分别移取0、1、2、3、4、5、7.5、10、12.5ml上述没食子酸标准溶液，将其稀释后配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.15、
0.20、0.25mg/ml的标准液。用福林法测定吸光度值。以没食子酸浓度为横坐标，765nm处的吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，并进行回归分析。福林酚法测定总酚的标准曲线(图1)。
结果表明，没食子酸在浓度0-0.25mg/ml内与其吸光值呈良好的线性关系，在此范围内的线性回归方程为：y＝4.2974x+0.056，R2＝0.9994。
[0050] 总酚含量的测定：准确移取待测液2.0ml于50ml容量瓶中，加入福林试剂1.0ml，充分混合后静置2min，加入10ml 7％的碳酸钠溶液，充分混合后用蒸馏水定容，置30℃恒温水浴中反应1h，不断振荡。取出，在波长765nm处测定吸光度值(以蒸馏水为空白对照)。根据标准曲线及其回归方程求出待测液中的多酚含量，然后计算出1g芒果核干燥破碎后的粉末样品中多酚类物质的含量(以没食子酸计，mg/g，即多酚含量mg/芒果核粉末g)。
[0051] 抗氧化活性的测定：
[0052] 清除羟基自由基能力测定：分别取不同质量浓度的待测样液于5只试管中，各加入硫酸亚铁、双氧水，静置，10min后加入水杨酸，静置后在510nm处测定吸光度A1，用蒸馏水替代水杨酸按照上述方法测定吸光度值A2，用蒸馏水代替待测液按上述方法测定吸光度值A0，VC做对照，按照下列公式求多酚物质对羟自由基的清除率：羟自由基(％)＝[A0-(A1-A2)]/(A0)*100(％)。
[0053] 清除超氧阴离子自由基能力测定：取4.5ml Tris-HCl缓冲溶液，于20℃水浴中预热20min，分别加入1ml不同浓度的样品液和0.4ml 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，于25℃水浴中反应5min，然后加入8mol/L的HCl溶液1ml终止反应，然后在325nm处测定吸光度A1，空白以蒸馏水代替样品液，测定吸光度A0。样品对超氧阴离子自由基的清除率：清除率(％)＝(1-A1/A0)*100(％)。
[0054] DPPH清除能力测定：分别取2.0mL不同质量浓度(1.0、5.0、10.0、15.0、芒果核活性成分样液于5只试管中，各加入2mL DPPH(0.04mg/ml)，静置20min在517nm检测吸光度A1；以无水乙醇代替DPPH，按照上述方法测定吸光度A2；做空白组按上述方法测定吸光度A0，以VC做对照，样品对DPPH自由基的清除率：DPPH清除率(％)＝[1-(A1-A2)/A0]*100(％)。
[0055] 实施例1：本发明的芒果核多酚提取物的制备方法
[0056] (1)芒果核多酚提取：芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L浓度为50％的乙醇，热回流提取三次，热回流提取每次1h，合并提取液，提取液减压浓缩汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，过滤出去不溶物，得到上样溶液，总多酚含量为18-20.9g/kg芒果核粉末。
[0057] (2)上柱：将芒果核多酚提取液上柱，控制流出液流速为0.5BV/h，上样量与树脂AB-8体积比为2:1，至提取液全部进入树脂床。
[0058] (3)洗脱：采用2-5BV的水进行洗脱，以除去杂质，后分别采用3-10BV的5％-80％乙醇冲洗树脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脱液，分别减压浓缩至一定体积，进行喷雾干燥，即得不同组分的纯化产物，其中全部组分总多酚含量约为20.9g/kg，纯化产物中，水洗脱液中多酚含量约为2.2g/kg，5％乙醇洗脱液中多酚含量约为3.8g/kg，10％乙醇洗脱液中多酚含量约为4.8g/kg，20％乙醇洗脱液中多酚含量约为8.04g/kg，30％乙醇洗脱液中多酚含量约为8.5g/kg，40％乙醇洗脱液中多酚含量约为13.3g/kg，50％乙醇洗脱液中多酚含量约为15.2g/kg，60％乙醇洗脱液多酚中含量约为13.7g/kg，70％乙醇洗脱液中多酚含量约为11.1g/kg，80％乙醇洗脱液中多酚含量约为9.9g/kg。
[0059] 实施例2：选用不同条件进行提取
[0060] 采用本发明提供的方法，选用不用条件进行芒果核多酚(样品为芒果核干燥粉碎1g)提取实验，在单因素试验基础上，选取乙醇浓度、料液比、提取时间和提取温度四个主要因素做L9(34)正交试验(表1)，正交结果分析如表2。
[0061] 表1芒果核多酚提取工艺正交试验表头设计
[0062]
[0063] 表2芒果核多酚提取工艺L9(34)正交实验结果
[0064]
[0065] 表3芒果核多酚提取验证试验
[0066]
[0067] 由表2可知，各因素对芒果核多酚提取影响大小顺序为：B>A>D>C，即料液比>乙醇浓度>提取时间>提取温度，其中料液比对芒果核多酚提取影响最显著，其次是乙醇浓度和提取时间，影响显著性一样，提取温度对芒果核多酚提取影响最不显著。由正交试验结果可以得出最佳试验组合为A3B3C3D3，即乙醇浓度70％，料液比1:25，提取温度60℃，提取时间120min。并不是正交表的组合中，所以需要做验证试验(表3)，由验证试验结果可知多酚的提取含量是5.36mg/g，所以芒果核多酚提取的最佳工艺条件为乙醇浓度70％，料液比1:25，提取温度60℃，提取时间120min。
[0068] 实施例3：大孔树脂纯化工艺
[0069] 选取不同树脂种类、样液浓度、吸附速率、上样量、乙醇洗脱浓度、洗脱速率等因素分别进行单因素试验，确定各因素的最佳值。
[0070] 上样液制备：秤取芒果核粉末20g，按照乙醇浓度70％，料液比1:25，提取温度60℃，每次提取1h，提取3次，提取后滤液合并，减压浓缩至干，真空干燥至恒重，精密秤取干膏适量，以甲醇或乙醇溶液溶于10ml容量瓶中，加甲醇或乙醇溶液稀释至刻度，摇匀备用。移取1ml滤液至10ml容量瓶，加甲醇或乙醇溶液稀释至刻度，摇匀。按照上述方法测定多酚的含量。
[0071] 静态吸附：取10种经过预处理好的大孔吸附树脂各10g，各加入芒果核多酚溶液10ml，每10min振摇一次，2h后分别各取树脂吸附后的溶液测定多酚含量，计算各树脂对芒果核多酚的吸附率。
[0072] 静态解吸：
[0073] 将静态吸附的树脂过滤抽干，加30ml 50％乙醇解吸，每10min振摇一次，2h后分别各取树脂吸附后的溶液测定多酚含量，计算各树脂对芒果核多酚的解吸率。见表4。从表中可以看出，10种树脂的吸附率都较大(大于90％)，解吸率都大于40％，其中AB-8、DM21、D101的解吸率都大于60％，选取AB-8、DM21、D101做动态吸附实验。
[0074] 表4大孔树脂对芒果核多酚的吸附与解吸率
[0075]
[0076] 动态吸附：
[0077] 取处理好的静态吸附优选3种树脂AB-8、DM21、D101各15mL于柱内，加芒果核多酚提取液于柱顶，以0.5BV/h的流速进行动态吸附，按照树脂体积流出收集流出液，测定多酚含量，计算各树脂对芒果核多酚的吸附率。结果见表5，表明AB-8和D101达到饱和吸附时，所吸附的总多酚量较DM21大，选取其做解吸实验。
[0078] 表5大孔树脂对芒果核多酚的动态吸附结果
[0079]
[0080] 动态解吸：取处理好的AB-8和D101树脂各20ml于柱内，分别加芒果核多酚提取液(10.5mg/g)于柱顶，以0.5BV/h的流速进行吸附后，用60％乙醇以2BV/h的流速进行洗脱，按照树脂体积流出收集洗脱液，测定多酚含量，计算各树脂对芒果核多酚的吸附率。结果见表6，可以看出AB-8比D101解吸效果好，选取其作为最佳树脂。
[0081] 表6大孔树脂对芒果核多酚的动态解吸结果
[0082]
[0083] 乙醇浓度：取10份处理好的AB-8树脂20ml于柱内，加芒果核多酚提取液于柱顶，以0.5BV/h的流速进行吸附后，再分别用5BV的水、5％、10％、20％、30％、40％、50％、60％、
70％、80％乙醇以2BV/h流速进行单独洗脱，按照树脂体积流出收集洗脱液，测定多酚含量，结果见表7，可以看出，当乙醇洗脱浓度为40％-70％时，洗脱总多酚得率最高。
[0084] 表7乙醇洗脱浓度考察
[0085]
[0086] 实施例4：芒果核多酚提取物的制备方法
[0087] 将芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L浓度为50％的乙醇，热回流提取三次，热回流提取每次1h，合并提取液，提取液减压浓缩汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，过滤出去不溶物，得到上样溶液，总多酚含量为18-20.9g/kg。
[0088] 将芒果核多酚提取液上柱，控制流出液流速为0.5BV/h，上样量与树脂AB-8体积比为2:1，至提取液全部进入树脂床。采用2-5BV的水除去杂质，然后采用3-10BV的50％乙醇冲洗树脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脱液，分别减压浓缩至一定体积，进行喷雾干燥，即得纯化产物，多酚含量为14-15.2g/kg。
[0089] 实施例5：芒果核多酚提取物的制备方法
[0090] 将芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L浓度为50％的乙醇，热回流提取三次，热回流提取每次1h，合并提取液，提取液减压浓缩汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，过滤出去不溶物，得到上样溶液，总多酚含量为18-20.9g/kg。
[0091] 将芒果核多酚提取液上柱，控制流出液流速为0.5BV/h，上样量与树脂AB-8体积比为2:1，至提取液全部进入树脂床。采用2-5BV的水除去杂质，然后采用3-10BV的40％乙醇冲洗树脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脱液，分别减压浓缩至一定体积，进行喷雾干燥，即得纯化产物，多酚含量为12-13.3g/kg。
[0092] 实施例6：芒果核多酚提取物的制备方法
[0093] 将芒果核干燥粉碎，秤取芒果核粉末1kg加入20L浓度为50％的乙醇，热回流提取三次，热回流提取每次1h，合并提取液，提取液减压浓缩汁浸膏，浸膏用浸膏重量10倍的水溶解，过滤出去不溶物，得到上样溶液，总多酚含量为18-20.9g/kg。
[0094] 将芒果核多酚提取液上柱，控制流出液流速为0.5BV/h，上样量与树脂AB-8体积比为2:1，至提取液全部进入树脂床。采用2-5BV的水除去杂质，然后采用3-10BV的70％乙醇冲洗树脂床，控制流出液流速2BV/h，收集洗脱液，分别减压浓缩至一定体积，进行喷雾干燥，即得纯化产物，多酚含量为10-11.1g/kg。
[0095] 实施例7：本发明方法得到的芒果核多酚提取物的抗菌抗氧化性能
[0096] 抑菌效果的测定：
[0097] 将供试菌株于斜面培养基上活化，用接种环挑取环1-2环于50mL无菌生理盐水三8
角瓶中振荡10min(内有数粒玻璃珠)，要求菌悬液约10 CFU/mL左右备用。称取一定量真空冷冻干燥的实施例4-6得到的芒果核多酚提取物样品，在超净工作台上用无菌的40％乙醇水溶液溶解样品至所需的浓度，备用。新鲜配制的培养基基于121℃条件下灭菌，当培养基冷至50-60℃时，于超净工作台上将培养基倒入灭菌的 的培养皿中，每皿15-20mL培养基，待平板冷却后，每皿中加入0.5mL菌悬液，用三角玻璃涂棒均匀涂成薄板备用。将无菌滤纸片浸入配好的药液其中12h，沥干。每一含菌平板上，呈正三角形排布3片带药无菌纸片，细菌于37℃条件下培养24h，啤酒酵母和黑曲霉于30℃条件下培养5d，测其抑菌圈直径。
根据抑菌圈大小来确定其抑菌效果。以不加芒果核多酚溶液只加菌悬液为对照。结果显示，本发明得到的芒果核多酚提取物具有强烈的抑菌效果。
[0098] 芒果核多酚物质抗氧化活性研究：
[0099] 羟基是活性最强的活性氧化自由基，会诱发机体产生氧化损伤，其清除率常常是反应药物抗氧化作用的重要指标。同样的，超氧阴离子也是生物体主要的活性氧自由基，由其引起的体内脂质过氧化是机体衰老、心血管疾病及肿瘤发生的重要原因。芒果核多酚羟基自由基清除能力如图2所示，清除能力随着多酚浓度增加而增加，当芒果核多酚的浓度达到0.6mg/ml时清除率能达到约90％，说明芒果核多酚具有较强的清除羟基自由基作用。芒果核多酚超氧阴离子自由基清除能力如图3所示，芒果核多酚的浓度越高，清除超氧阴离子自由基的能力越强，当芒果核多酚的浓度达到0.5-0.6mg/mL，清除能力趋于平稳，清除率达到83％，但是清除能力较Vc弱些。芒果核多酚提取物DPPH自由基清除能力结果如图4所示，清除能力随着多酚浓度增加而增加，当浓度达到0.6mg/mL以上时，其对DPPH自由基的清除率能达到90％，说明芒果核多酚具有较强的清除DPPH自由基作用。以上数据说明芒果果核多酚对羟基自由基以及超氧阴离子自由基均具有较好的清除能力，研究结果将为芒果核资源的综合利用及其相应的功能性食品开发提供参考借鉴。
[0100] 以上通过实施例对本发明的内容进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
