[0020] 参见图1，畜禽用复方淫羊藿免疫增强可溶性粉的生产工艺流程图，畜禽用复方淫羊藿免疫增强可溶性粉的生产工艺，包括药材的干燥、粉碎、过筛、浸提分离、真空浓缩、真空干燥、加辅料制备成可溶性粉，以及产品的外观均匀度、干燥失重、引湿性、稳定性、含量测定的考察，具体而言，将原料药材淫羊藿、女贞子、白术、金荞麦、菝葜和茯苓干燥至水分含量为6%、粉碎，过2号药典筛，混合成粉料，然后加入水，粉料与水的质量比为1:8-12；浸泡1h后回流提取，回流提取的时间为0.5-1.5h，连续提取1-3次；提取液过滤去除药渣后1000r/min离心10min，上清液于70℃真空浓缩成稠浸膏后，于60℃真空干燥为干浸膏，而后加入辅料，使得总重量等于最先投入的原料药材的总重量，粉碎混合成可溶性粉，以梯度洗脱程序进行淫羊藿苷的含量测定，并进行外观均匀度、干燥失重、引湿性、稳定性的考察以及强光照射试验、高温高湿加速试验、长期稳定性试验验证产品的稳定性。
[0021] 下面举例对本发明进行详细阐述。
[0022] 1．将原料中药材淫羊藿、女贞子、白术、金荞麦、菝葜和茯苓干燥、粉碎，过筛，按质量比2∶7∶4∶3∶2∶2混合成粉料，加入10倍药材重量的水，放入夹层锅内加热浸提；分离溶液和药渣；将溶液经真空浓缩为稠浸膏，稠浸膏经真空干燥为干浸膏。通过正交试验设计考查提取次数、加水倍数、提取时间三个影响因素的不同水平，得有效成分的最佳提取工艺为药粉加入10倍重量的水，浸泡1h，回流提取1.5h，连续提取3次。（参见实验Ⅰ）[0023] 2．用增强流动性、抗湿性辅料乳糖、可溶性淀粉、葡萄糖作为筛选的研究对象，以吸湿百分率、休止角、外观性状为考察指标，先优选出乳糖与可溶性淀粉的组合，再以乳糖与可溶性淀粉的不同配比来优选成型工艺，得乳糖与可溶性淀粉的优选配比为1∶1，解决了工艺参数不确定、质量不稳定等问题。（参见实验Ⅱ）
[0024] 3．建立君药淫羊藿的指标成分淫羊藿苷的高效液相色谱梯度洗脱程序，通过精密度、回收率等方面验证后建立质量标准，控制产品质量，并进行外观均匀度、干燥失重、引湿性、稳定性考察。（见实验Ⅲ）
[0025] 4．将样品在照度为4500Lx±500Lx的条件下放置10d的进行强光照射试验；在40±2℃、相对湿度为75%±5%条件下放置6个月的高温高湿加速试验；以及在温度
25±2℃、相对湿度60%±5%的条件下放置12个月的长期稳定性试验评价稳定性，解决了产品的稳定性问题。（见实验Ⅳ）。
[0026] 实验Ⅰ正交试验设计优选最佳提取工艺
[0027] 1．因素、水平的确定
[0028] 本品各原料药材的主要药效成分为水溶性，故以水为提取溶剂，采用加热回流提取法提取。结合经验，影响水提取的主要工艺参数包括提取次数、加水量、提取时间，故我们以提取次数、加水量、提取时间为考察因素，以各因素提取常用量为各因素的水平，以处方的出膏率、君药淫羊藿的指标成分淫羊藿苷的提取率为考察指标，优选提取工艺参数。因素、水平设计见表1。
[0029] 表1因素水平表
[0030]
[0031] 2．试验方法
[0032] 按照处方中药材比例称取药材，按正交试验表L9（34）(略)进行试验，计算出膏率与淫羊藿苷的提取率，计算公式如下：
[0033] 淫羊藿苷提取率＝
[0034] 出膏率＝
[0035] 3．试验结果分析4
[0036] 表2 L9（3）正交试验结果
[0037]
[0038] 表3 出膏率极差分析表
[0039]
[0040] 表4 出膏率极差分析表
[0041]
[0042] 表5 淫羊藿苷提取率极差分析表
[0043]
[0044] 表6 淫羊藿苷提取率方差分析表
[0045]
[0046] 查表知： F0.05(2,2)=19
[0047] 表3～表6结果显示，以出膏率为指标时，从直观分析可见，影响水提效果的因素主次顺序为A (提取次数) > C(提取时间) >B(加水量)，优化水平是A3 C3 B3， 但方差分析结果表明，A、B和C 三种因素中，只有A (提取次数)与C(提取时间)对淫羊藿苷含量与浸膏得率的影响有显著性意义(P < 0.05)。同样以淫羊藿苷提取率为指标时，从直观分析可见，影响水提效果的因素主次顺序为A (提取次数) > C(提取时间) >B(加水量)，优化水平是A3 C3 B3， 但方差分析结果表明，A、B和C 三种因素中，只有A (提取次数)与C(提取时间)对淫羊藿苷含量与浸膏得率的影响有显著性意义(P < 0.05)。
[0048] 为了降低大批量生产成本，最后决定提取工艺为A3B2C3，即加10倍药材质量水提取3次，每次1.5 h。经验证，工艺稳定，淫羊藿苷提取率与浸膏得率均较高。
[0049] 实验Ⅱ 畜禽用复方淫羊藿可溶性粉成型工艺优化
[0050] 复方淫羊藿经提取后干浸膏得率为26%，若制备1g产品相当1g生药量时，需要加入辅料量占产品量的74%。拟用增强流动性、抗湿性辅料葡萄糖、乳糖、可溶性淀粉等作为筛选的研究对象，以吸湿百分率、休止角、外观性状为考察指标，优选成型工艺。
[0051] 1．不同辅料的吸湿百分率与休止角的测定
[0052] 取干膏粉适量，分别与辅料Ⅰ(乳糖)、Ⅱ(可溶性淀粉)、Ⅲ(葡萄糖)、Ⅳ(乳糖＋葡萄糖)、Ⅴ(乳糖＋可溶性淀粉)、Ⅵ(葡萄糖＋可溶性淀粉)按比例混匀。取适量按吸湿百分率、休止角的测定方法进行测定。
[0053] 1．1吸湿百分率的测定
[0054] 按比例称取一定量复方淫羊藿干浸膏与辅料，干燥至恒重，置于底部盛有氯化钠过饱和溶液的干燥器内，分别于6，12，24，48，60h称取质量，计算吸湿百分率，结果见表7。
[0055] 表7 浸膏粉与不同辅料的混合的吸湿百分率
[0056]
[0057] Δ为浸膏粉放置60h所观察到的外观变化；
[0058] 1．2休止角的测定
[0059] 采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于水平放置的坐标纸上1cm的高度处，小心地将复方淫羊藿干浸膏与辅料的混合物沿漏斗壁倒入最上的漏斗中直到坐标纸上形成的干膏粉圆锥体尖端接触到漏斗口为止，由坐标纸测出圆锥底部的直径（D），计算出休止角（tgα=2H/D），重复5次并取平均值，结果见表8。
[0060] 表8 浸膏粉与不同辅料的混合物的休止角
[0061]
[0062] 对表7和表8用SPSS软件进行SNK检验得到表9。
[0063] 表9 浸膏粉及与不同辅料混合的休止角数据统计分析结果
[0064]
[0065] * 在统计学上具有显著性差异（P<0.05）。
[0066] 由上可知，浸膏粉添加辅料后可以降低其吸湿性，增加流动性，其中以Ⅴ（乳糖＋可溶性淀粉）粉末基本上不液化；但从休止角上看， 浸膏粉+Ⅴ与浸膏粉、浸膏粉+Ⅰ、浸膏粉+Ⅱ、浸膏粉+Ⅲ之间有显著性差异（P<0.05），与浸膏粉+Ⅳ、浸膏粉+Ⅵ则无显著性差异（P＞0.05），而浸膏粉+Ⅴ的休止角又相对较小，所以初步选（乳糖＋可溶性淀粉）为处方辅料。
[0067] 2．既定辅料比例对干膏粉吸湿性与流动性的影响
[0068] 乳糖与可溶性淀粉分别按2∶1，1∶1，1∶2，1∶3称取并混匀，然后取适量不同配比的混合物，分别按上述方法测定吸湿百分率和休止角，结果见表10和表11，对表10和表11用SPSS软件进行SNK检验得到表12。
[0069] 表10 不同配比混合物的吸湿百分率
[0070]
[0071] 表11 不同配比混合物的休止角
[0072]
[0073] 表12 不同配比混合物的休止角数据统计分析结果
[0074]
[0075] * 在统计学上具有显著性差异（P<0.05）。
[0076] 由表10、11、12可知，混合物的吸湿性随着辅料用量的加入而下降，而休止角则随用量的增加相应减小；当干膏粉与辅料固定时，辅料内部的比例不同，其休止角存在差异：②与其他组均有显著性差异（P<0.05），①、③、④之间无显著性差异（P＞0.05），综合考虑，复方淫羊藿干膏粉与辅料(乳糖＋可溶性淀粉)混合时，乳糖与可溶性淀粉比例为1∶1时，吸湿性相对较低，流动性较好。
[0077] 实验Ⅲ HPLC测定畜禽用复方淫羊藿免疫增强可溶性粉中淫羊藿苷的含量[0078] 1．仪器与试药
[0079] 岛津2010AHT高效液相色谱仪（SIL-20A进样器、SPD-20A紫外-可见检测器、LCSolution工作站）；淫羊藿苷，中国药品生物制品检定所；畜禽用复方淫羊藿免疫增强可溶性粉，湖南农大动物药业有限公司实验室提供。甲醇、乙腈为色谱纯，美国天地公司；其余均为分析纯，水为超纯水。
[0080] 2．方法与结果
[0081] 2．1色谱方法
[0082] 色谱柱：WATERS Symmetry C18（4.6mm×150mm,5μm）；流动相：水(A)—乙腈(B)，按照表13梯度洗脱程序进行洗脱；柱温：30℃；检测波长：270nm；流速：1mL/min；进样量：20μL；淫羊藿苷保留时间为6.2min；定量方法：外标法。
[0083] 表13 梯度洗脱程序
[0084]
[0085] 2．2含量测定方法
[0086] 2.2.1 对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1 mL含0.100mg的溶液，再依次用甲醇稀释定容，得到0.080 mg/mL、0.050 mg/mL、0.040 mg/mL、0.030 mg/mL、0.020 mg/mL、0.010 mg/mL的系列淫羊藿苷对照品溶液。
[0087] 2.2.2供试品溶液的的制备 精密称取本品1g，精密加入稀乙醇20ml，超声处理15min，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
[0088] 2.2.3标准曲线的制作 精密吸取对照品溶液，按建立的色谱条件进样分析，记录色谱图与峰面积，以淫羊藿苷峰面积为横坐标，淫羊藿苷的量(μg)为纵坐标绘制得淫6
羊藿苷标准曲线，得到线性回归方程：y=2×10x—64594，r=0.9994，即淫羊藿苷含量在
0.204—2.04μg范围内与峰面积成良好线性关系。
[0089] 2.2.4 精密度试验 精密吸取供试品溶液，按建立的色谱条件重复进样6次，峰面积值的RSD为0.76%。
[0090] 2.2.5 回收率实验 将已测定淫羊藿苷含量的复方淫羊藿可溶性粉中精密加入一定量的淫羊藿苷对照品，按相同的方法处理并测定，淫羊藿苷的平均回收率为99.87%，RSD为0.94%。
[0091] 3．样品测定
[0092] 精密吸取供试品进样，根据标准曲线计算含量，结果见表14。
[0093] 表14 十批样品淫羊藿苷含量测定结果
[0094]
[0095] 对复方淫羊藿免疫增强可溶性粉中淫羊藿苷的含量进行测定，所建立的HPLC测定方法，在所用色谱条件下基线稳定，具有快速简便，灵敏度高，重现性好，并且十批样品中淫羊藿苷的含量满足要求。
[0096] 实验Ⅳ 样品稳定性研究试验
[0097] 1．样品来源
[0098] 三批畜禽用复方淫羊藿免疫增强可溶性粉由湖南农大动物药业有限公司提供。
[0099] 2．强光照射试验
[0100] 将三批供试样品，置于照度为4500Lx±500Lx的条件下放置10天，分别于第5、10天取样，进行淫羊藿苷含量测定，结果见表15。
[0101] 表15 强光照射试验结果(mg·g-1)
[0102]
[0103] 3．高温高湿加速试验
[0104] 三批供试样品按市售包装，在40℃±2℃、相对湿度为75%±5%条件下放置6个月，分别于1个月，2个月，3个月和6个月末取样，进行淫羊藿苷含量测定，结果见表16。
[0105] 表16 高温高湿加速试验结果(mg·g-1)
[0106]
[0107] 4．长期稳定性试验
[0108] 将三批供试品模拟市售包装，在温度25±2℃、相对湿度60±5%的条件下放置12个月，分别于0个月、3个月、6个月、9个月、12个月取样，进行淫羊藿苷含量测定，结果见表17。
[0109] 表17 长期稳定性试验结果(mg·g-1)
[0110]
[0111] 根据以上的试验结果，本品的稳定性较好，储藏条件为：密封、避光保存。有效期暂定12个月。
[0112] 参见图2：本发明中指标成分淫羊藿苷的HPLC图，具体说明以下实施例：
[0113] 实施例一，将原料药材淫羊藿、女贞子、白术、金荞麦、菝葜和茯苓干燥至水分含量为6%、粉碎，过2号药典筛，按淫羊藿10份、女贞子35份、白术20份、金荞麦15份、菝葜10份和茯苓10份的比例混合成粉料，然后加入8倍药材重量的水，浸泡1h，回流提取0.5h，提取1次，提取液过滤去除药渣后1000r/min离心10min，上清液于70℃下真空浓缩至稠浸膏后，60℃下真空干燥为干浸膏，干浸膏得率为18.22%，所得干浸膏中淫羊藿苷的提取率为45.13%。
[0114] 实施例二，将原料药材淫羊藿、女贞子、白术、金荞麦、菝葜和茯苓干燥至水分含量为6%、粉碎，过2号药典筛，按淫羊藿10份、女贞子35份、白术20份、金荞麦15份、菝葜10份和茯苓10份的比例混合成粉料，然后加入10倍药材重量的水，浸泡1h，回流提取1h，提取2次，提取液过滤去除药渣后1000r/min离心10min，上清液于70℃下真空浓缩至稠浸膏后，60℃下真空干燥为干浸膏，干浸膏得率为21.09%， 所得干浸膏中淫羊藿苷的提取率为62.54%。
[0115] 实施例三，将原料药材淫羊藿、女贞子、白术、金荞麦、菝葜和茯苓干燥至水分含量为6%、粉碎，过2号药典筛，按淫羊藿10份、女贞子35份、白术20份、金荞麦15份、菝葜10份和茯苓10份的比例混合成粉料，然后加入12倍药材重量的水，浸泡1h，回流提取1.5h，提取3次，提取液过滤去除药渣后1000r/min离心10min，上清液于70℃下真空浓缩至稠浸膏后，60℃下真空干燥为干浸膏，干浸膏得率为26.13%，所得干浸膏中淫羊藿苷的提取率为84.7%。
[0116] 实施例四，按实施例三所述工艺制成干浸膏，所得干浸膏加入辅料使总重量等于投料药材的总重量，粉碎混合成可溶性粉，辅料由乳糖和可溶性淀粉组成，其比例为1∶0.5时，休止角为36.41。
[0117] 实施例五，按实施例三所述工艺制成干浸膏，所得干浸膏加入辅料使总重量等于投料药材的总重量，粉碎混合成可溶性粉，辅料由乳糖和可溶性淀粉组成，其比例为1∶2时，休止角为35.66。
[0118] 实施例六，按实施例三所述工艺制成干浸膏，所得干浸膏加入辅料使总重量等于投料药材的总重量，粉碎混合成可溶性粉，辅料由乳糖和可溶性淀粉组成，其比例为1∶1时，休止角为35.75。
[0119] 实施例七，按实施例三与实施例六所述工艺制成可溶性粉，置光滑纸上，平铺约2
5cm，将其表面压平，在亮处观察，色泽均匀，无花纹与色斑。
[0120] 按上述工艺制成可溶性粉，照2010年版《中国兽药典》二部附录中“干燥失重测定法”，10个批次复方淫羊藿可溶性粉减失重量均不超过6.0%。
[0121] 按上述工艺制成可溶性粉，取供试品适量，置纳氏比色管中，加水50mL制成临床使用量的2倍浓度，在25℃±2℃上下翻转10次，供试品全部溶解，静置30min没有浑浊或沉淀出现。
[0122] 按上述工艺制成可溶性粉，根据《中华人民共和国兽药典》2010年版二部附录药物引湿性指导原则进行测定，取干燥器一只，于底部放一内盛饱和氯化铵水溶液的培养皿，置25℃±1℃恒温箱内放置6h以上使干燥器内湿度稳定，湿度约为89％。取外径为50mm、高为15mm的具塞玻璃称量瓶，105℃干燥2h，于试验前一天放入上述干燥器内。取上述具塞玻璃称量瓶，精密称定质量（m1），供试品预先用适当方法干燥至恒重，以去除药品粉末表面的吸附水，取供试品适量，置称量瓶内，精密称定质量（m2）。将上述盛有供试品的称量瓶置干燥器内，于25℃±1℃保温放置48小时，取出称质量（m3），并按公式：
[0123] 增重百分率(%)＝ 计算引湿增重为1.8%，按照《中华人民共和国兽药典》可界定为略有引湿性。
[0124] 按上述工艺制成可溶性粉，休止角为32°，流动性好，临界相对湿度为65%，抗湿性好，经过高温高湿实验，可溶性粉中有效成分淫羊藿苷的含量减少低于1%，稳定性好。
[0125] 按上述工艺制成可溶性粉，制备成高效液相色谱供试样品进行分析，淫羊藿苷主峰与杂质峰分离度最佳，保留时间适中，峰形好，且对泵与色谱柱的损耗小，有利于延长色谱柱的寿命，同时所建立的淫羊藿苷HPLC测定方法，在所用色谱条件下基线稳定，具有快速简便，灵敏度高，重现性好等优点，可适用于淫羊藿苷的定量。
[0126] 畜禽用复方淫羊藿原方临床以汤剂入药，但汤剂需临用新制，久制易发霉变质，不易携带，口感差，使用容积大；直接将全方药材粉碎拌料则投料量大，且气味较大，畜禽不愿采食，这些严重制约了复方淫羊藿的推广应用，因此，有必要对其进行剂型改革以利于普及应用。我们因而将其提取浓缩干燥成浸膏，再与矫味剂制备成可溶性粉，既保持了汤剂吸收快、显效迅速等特点，又克服了汤剂服用前临时煎煮、久置霉败变质的缺点，并可矫味，畜禽易于采食，且成本较低，能适合于大规模生产，亦能运输、储藏、携带、使用方便。同时，在提取工艺优化中，我们采用正交试验设计考查提取次数、加水倍数、提取时间三个影响因素的不同水平；在辅料筛选方面以吸湿百分率、休止角、外观性状为考察指标，结合数理统计优选辅料组合与配比，科学地解决了工艺参数不确定、质量不稳定等问题；更为重要的是对产品的指标成分淫羊藿苷建立比现有方法准确度高、干扰少的高效液相色谱梯度洗脱程序，并进行含量测定，以及对产品的外观均匀度、干燥失重、引湿性、稳定性进行考察，一同进行质量控制，确保疗效。
[0127] 以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征及本发明的优点，本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内，本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
