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三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺   0    0

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专利申请流程有哪些步骤?
专利申请流程图
申请
申请号:指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。
申请日:提出专利申请之日。
2020-12-29
申请公布
申请公布指发明专利申请经初步审查合格后,自申请日(或优先权日)起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。
申请公布号:专利申请过程中,在尚未取得专利授权之前,国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。
申请公布日:申请公开的日期,即在专利公报上予以公开的日期。
2021-05-28
授权
授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由,授予发明专利权;或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由,授予实用新型专利权或外观设计专利权。
2022-10-11
预估到期
发明专利权的期限为二十年,实用新型专利权期限为十年,外观设计专利权期限为十五年,均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。
2040-12-29
基本信息
有效性 有效专利 专利类型 发明专利
申请号 CN202011601163.7 申请日 2020-12-29
公开/公告号 CN112776325B 公开/公告日 2022-10-11
授权日 2022-10-11 预估到期日 2040-12-29
申请年 2020年 公开/公告年 2022年
缴费截止日
分类号 B29C64/20B29C64/30B29C64/35B29C64/321C12M3/00B33Y30/00B33Y40/00 主分类号 B29C64/20
是否联合申请 独立申请 文献类型号 B
独权数量 1 从权数量 8
权利要求数量 9 非专利引证数量 0
引用专利数量 0 被引证专利数量 0
非专利引证
引用专利 被引证专利
专利权维持 1 专利申请国编码 CN
专利事件 事务标签 公开、实质审查、授权
申请人信息
申请人 第一申请人
专利权人 杭州电子科技大学 当前专利权人 杭州电子科技大学
发明人 王洪成、徐凯、徐海浩、黄阿龙、吴立群、张俐楠 第一发明人 王洪成
地址 浙江省杭州市经济技术开发区白杨街道2号大街1158号 邮编 310018
申请人数量 1 发明人数量 6
申请人所在省 浙江省 申请人所在市 浙江省杭州市
代理人信息
代理机构
专利代理机构是经省专利管理局审核,国家知识产权局批准设立,可以接受委托人的委托,在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。
浙江千克知识产权代理有限公司 代理人
专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务,取得一定资格的人。
周希良
摘要
三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺,包括细胞输送机构、打印平台、平台驱动机构、输送驱动机构和三维超声阵列微势阱发生系统,打印平台安装在平台驱动机构上,细胞输送机构安装在输送驱动机构上,三维超声阵列微势阱发生系统与打印平台连接,在打印平台内形成平面声压微势阱,在打印平台上形成多个不同高度的平面声压微势阱,来实现对需要在不同高度打印的细胞进行定位,采用构建三维阵列声压势阱的方式构建细胞三维体系,可操控性更好,能用于多种细胞、多种环境下的细胞三维打印,具有极好的普适性。
  • 摘要附图
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图1
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图2
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图3
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图4
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图5
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图6
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图7
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图8
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
  • 说明书附图:图9
    三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺
法律状态
序号 法律状态公告日 法律状态 法律状态信息
1 2022-10-11 授权
2 2021-05-28 实质审查的生效 IPC(主分类): B29C 64/20 专利申请号: 202011601163.7 申请日: 2020.12.29
3 2021-05-11 公开
权利要求
权利要求书是申请文件最核心的部分,是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。
1.三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,包括细胞输送机构(A)、打印平台(B)、平台驱动机构(C)、输送驱动机构(D)和三维超声阵列微势阱发生系统(E),打印平台(B)安装在平台驱动机构(C)上,细胞输送机构(A)安装在输送驱动机构(D)上,三维超声阵列微势阱发生系统(E)与打印平台(B)连接,在打印平台(B)内形成平面声压微势阱阵列;
三维超声阵列微势阱发生系统(E)包括信号发生器(1)、功率放大器(2)和压电换能器阵列(13),压电换能器阵列(13)固定安装在打印平台(B)上,功率放大器(2)与压电换能器阵列(13)连接,信号发生器(1)与功率放大器(2)连接;信号发生器的前端连接有上位机,所述信号发生器在上位机的控制下产生特定频率、特定波形的信号,波信号经由功率放大器按需放大为特定电压的电信号,再传输到压电换能器阵列某一层的阵列;所述压电换能器阵列在所述电信号的驱动下产生特定能量、特定频率的声波,形成多边形平面声场,构建平面声压微势阱阵列;压电换能器阵列通过激发不同层的阵列形成不同的平面阵列声压微势阱,所述平面阵列声压微势阱的层层构建叠加形成三维阵列声压微势阱。

2.根据权利要求1所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,打印平台(B)包括底盘(8)和多边形谐振腔(14),底盘(8)与平台驱动机构(C)连接,多边形谐振腔(14)固定安装在底盘(8)上,压电换能器阵列(13)固定安装在多边形谐振腔(14)的内壁上,在多边形谐振腔(14)内形成平面声压微势阱阵列。

3.根据权利要求2所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,压电换能器阵列(13)在高度方向上等距排列,形成多个不同高度的声压微势阱阵列。

4.根据权利要求1所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,细胞输送机构(A)包括微输送喷嘴(4)、脉冲致动装置(5)、喷嘴夹(6)、架板(7),微输送喷嘴(4)通过喷嘴夹(6)固定安装在架板(7)上,脉冲致动装置(5)固定安装在架板(7)上,并与微输送喷嘴(4)上部连接。

5.根据权利要求4所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,微输送喷嘴(4)的下端安装有喷头(16),微输送喷嘴(4)与喷头(16)之间固定安装有细胞计数器(12)。

6.根据权利要求5所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,架板(7)上固定安装有显微镜(3),显微镜(3)朝向喷头(16)设置。

7.根据权利要求1所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,平台驱动机构(C)包括底座板、升降支架、升降丝杆滑块组件和升降电机,升降支架固定安装在底座板上,升降丝杆滑块组件转动安装在升降支架上,升降电机与升降丝杆滑块组件连接。

8.根据权利要求1所述的三维超声阵列无支架细胞打印装置,其特征在于,输送驱动机构(D)包括X轴驱动件、Y轴驱动件和支撑柱,支撑柱固定安装在底座板上,Y轴驱动件固定安装在支撑柱上,X轴驱动件固定安装在Y轴驱动件上,细胞输送机构(A)安装在X轴驱动件上。

9.基于权利要求1‑8任一项所述三维超声阵列无支架细胞打印装置的打印工艺,其特征在于,包括以下步骤,
S1:对打印装置进行灭菌处理,并保持温度恒定适宜,往多边形谐振腔中注入培养液,在微喷嘴中注入细胞悬浮液;
S2:根据预先设计的模型,压电换能器阵列工作,在多边形谐振腔最下层按需激发平面阵列声压微势阱;
S3:根据预先设计的模型,控制平台驱动机构移动,使喷头到达多边形谐振腔模型打印所需的特定高度,再控制输送驱动机构运动,使微喷嘴运动到指定声压微势阱位置;
S4:根据模型需要,细胞输送机构向对应的平面阵列声压微势阱内输送特定数量的细胞,输送出的细胞在声压势阱内声回复力的作用被俘获在该声压势阱内,完成单个势阱内细胞的打印,以次类推,直到完成一层平面所有声势阱内细胞的打印;
S5:待第一层全部打印完成后,所述的三维超声阵列微势阱发生系统激发第二层阵列声压微势阱阵列,向下移动多边形培养平台继续打印,重复S2‑S4步骤,以此类推实现细胞三维体系的打印;
S6:打印完成后将细胞三维体系在适宜温度下进行细胞培养,细胞分裂生长最终形成细胞组织。
说明书

技术领域

[0001] 本发明属于生物制造、细胞打印领域,具体涉及三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺。

背景技术

[0002] 细胞/生物3D打印通过逐步沉积活细胞、细胞外基质、生物因子和必要的生物材料进行细胞的三维组装,在体外构建具有生物活性的三维多细胞体系,再经培养繁殖达到组织再生、器官修复的目的,是解决传统组织工程困境的有效途径,对生命科学和生物医药的发展意义重大。
[0003] 在细胞打印技术中,首要解决的问题是如何将设定数量的特定细胞精准地沉积到三维空间的预设位置,即如何按需构建细胞的三维体系,且有利于细胞培养繁殖的营养输送,最终形成组织。为达到上述目的,现有细胞3D打印通常将以水凝胶为代表的支架材料与细胞液混合配制成生物墨水进行打印,水凝胶凝固后成为细胞附着的生物支架。然而,作为细胞进一步繁殖的载体,生物支架面临的挑战众多,如细胞间通信的干扰、细胞附着的不均匀、支架降解的影响以及支架材料的精度差等问题。而目前无支架细胞打印技术避免了将支架材料掺入细胞液制成生物墨水进行打印,在细胞间通讯等方面优势显著。然而,已有无支架细胞打印技术仍需使用琼脂杆等作为细胞打印过程中的物理支撑。因此研究无支架无支撑的细胞3D打印技术具有重要意义。

发明内容

[0004] 针对以上不足,本发明所要解决的技术问题是提供三维超声阵列无支架细胞打印装置及其打印工艺,通过逐步沉积活细胞、细胞外基质、生物因子和必要的生物材料进行细胞的三维组装,在体外构建具有生物活性的三维多细胞体系,再经培养繁殖达到组织再生、器官修复的目的。
[0005] 为解决以上技术问题,本发明采用的技术方案是,
[0006] 三维超声阵列无支架细胞打印装置,包括细胞输送机构、打印平台、平台驱动机构、输送驱动机构和三维超声阵列微势阱发生系统,打印平台安装在平台驱动机构上,细胞输送机构安装在输送驱动机构上,三维超声阵列微势阱发生系统与打印平台连接,在打印平台内形成平面声压微势阱阵列。
[0007] 进一步的,三维超声阵列微势阱发生系统包括信号发生器、功率放大器和压电换能器阵列,压电换能器阵列固定安装在打印平台上,功率放大器与压电换能器阵列连接,信号发生器与功率放大器连接。
[0008] 进一步的,打印平台包括底盘和多边形谐振腔,底盘与平台驱动机构连接,多边形谐振腔固定安装在底盘上,压电换能器阵列固定安装在多边形谐振腔的内壁上,在多边形谐振腔内形成平面声压微势阱阵列。
[0009] 进一步的,多边形谐振腔内壁上安装有压电换能器阵列,压电换能器阵列在高度方向上等距排列,形成多个不同高度的声压微势阱。
[0010] 进一步的,细胞输送机构包括微输送喷嘴、脉冲致动装置、喷嘴夹、架板,微输送喷嘴通过喷嘴夹固定安装在架板上,脉冲致动装置固定安装在架板上,并与微输送喷嘴上部连接。
[0011] 进一步的,微输送喷嘴的下端安装有喷头,微输送喷嘴与喷头之间固定安装有细胞计数器。
[0012] 进一步的,架板上固定安装有显微镜,显微镜朝向喷头设置。
[0013] 进一步的,平台驱动机构包括底座板、升降支架、升降丝杆滑块组件和升降电机,升降支架固定安装在底座板上,升降丝杆滑块组件转动安装在升降支架上,升降电机与升降丝杆滑块组件连接。
[0014] 进一步的,输送驱动机构包括X轴驱动件、Y轴驱动件和支撑柱,支撑柱固定安装在底座板上,Y轴驱动件固定安装在支撑柱上,X轴驱动件固定安装在Y轴驱动件上,细胞输送机构安装在X轴驱动件上。
[0015] 上述三维超声阵列无支架细胞打印装置的打印工艺,包括以下步骤,
[0016] S1:对本打印装置进行灭菌处理,并保持温度恒定适宜,往多边形谐振腔中注入培养液,在微喷嘴中注入细胞悬浮液;
[0017] S2:根据预先设计的模型,压电换能器阵列工作,在多边形谐振腔最下层按需激发平面阵列声压微势阱;
[0018] S3:根据预先设计的模型,所述控制平台驱动机构移动,使喷头到达多边形谐振腔模型打印所需的特定高度,再控制输送驱动机构运动,使微喷嘴运动到指定声压微势阱位置;
[0019] S4:根据模型需要,细胞输送机构向对应的平面阵列声压微势阱内输送特定数量的细胞,输送出的细胞在声压势阱内声回复力的作用被俘获在该声压势阱内,完成单个势阱内细胞的打印,以次类推,直到完成一层平面所有声势阱内细胞的打印;
[0020] S5:待第一层全部打印完成后,所述的三维超声阵列微势阱发生系统激发第二层阵列声压微势阱,向下移动多边形培养平台继续打印,重复S2‑S4步骤,以此类推实现细胞三维体系的打印;
[0021] S6:打印完成后将细胞三维体系在适宜温度下进行细胞培养,细胞分裂生长最终形成细胞组织。
[0022] 本发明的有益效果是,
[0023] 本发明中利用声辐射力操控细胞实现构建细胞的三维体系,声辐射力操控细胞在普适性、生物相容性和操纵尺度等方面优势显著。对细胞种类、密度和形状等无特殊需求且可在不透光介质中传播,适用性更强,可以完成多种细胞,多种环境下的细胞三维操控。本发明采用构建三维阵列声压势阱的方式构建细胞三维体系,可操控性更好,能用于多种细胞、多种环境下的细胞三维打印,具有极好的普适性。
[0024] 本发明通过阵列换能器构建三维阵列声压微势阱,利用声辐射力将细胞微粒捕获,一个微势阱是一个细胞捕获点(节点),节点排列成线,线排列成面,面叠加成体,从而构建细胞三维体系,再经过培养形成细胞组织。该技术无需生物支架/支撑,在细胞密度、细胞间通讯、以及细胞生长等方面具有显著优势。且无支架/支撑降解过程,无降解副产物,细胞更易存活生长。且该细胞打印工艺不产生高温、高压、强电场等现象,细胞打印后成活率进一步提高,能保证成活率在90%以上。
[0025] 本发明中采用脉冲惯性力驱动细胞打印的技术,该技术通过脉冲致动装置产生的脉冲惯性力,通过改变单个脉冲的大小,可以实现单个细胞或者多个细胞的精确输送,实现打印过程中细胞输送的精准可控,保证了细胞三维体系的高效精准构建,具有重要的体外生物工程应用潜力。

实施方案

[0031] 下面结合附图对本发明进行进一步描述。
[0032] 三维超声阵列无支架细胞打印装置,包括细胞输送机构A、打印平台B、平台驱动机构C、输送驱动机构D和三维超声阵列微势阱发生系统E,打印平台B安装在平台驱动机构C上,细胞输送机构A安装在输送驱动机构D上,三维超声阵列微势阱发生系统E与打印平台B连接,在打印平台B内形成平面声压微势阱阵列,在打印平台B上形成多个不同高度的平面声压微势阱阵列,来实现对需要在不同高度打印的细胞进行定位,采用构建三维阵列声压势阱的方式构建细胞三维体系,可操控性更好,能用于多种细胞、多种环境下的细胞三维打印,具有极好的普适性。
[0033] 三维超声阵列微势阱发生系统包括信号发生器1、功率放大器2和压电换能器阵列13,压电换能器阵列13固定安装在打印平台B上,功率放大器2与压电换能器阵列13连接,信号发生器1与功率放大器2连接,所述压电换能器阵列固定于培养腔内壁,在高度方向等距排列,且每一层的多个换能器在同一水平面上,从而形成多个不同高度的平面声压微势阱阵列;信号发生器2的前端连接有上位机15,所述信号发生器2在上位机15的控制下产生特定频率、特定波形的信号,所述波信号经由功率放大器按需放大为特定电压的电信号,再传输到所述阵列压电换能器阵列某一层的压电换能器阵列;所述压电换能器阵列在所述电信号的驱动下产生特定能量、特定频率的声波,形成多边形平面声场,构建平面声压微势阱阵列;所述阵列压电换能器阵列通过激发不同层的压电换能器阵列形成不同的平面阵列声压微势阱,所述平面阵列声压微势阱的层层构建叠加形成三维阵列声压微势阱。
[0034] 打印平台包括底盘8和多边形谐振腔14,底盘8与平台驱动机构C连接,多边形谐振腔14固定安装在底盘8上,压电换能器阵列13固定安装在多边形谐振腔14的内壁上,在多边形谐振腔14内形成平面声压微势阱阵列,不同高度的换能器激发形成多个平面阵列声压势阱,叠加形成三维阵列声压势阱。
[0035] 多边形谐振腔14内壁上安装有压电换能器阵列13,压电换能器阵列13在高度方向上等距排列,形成多个不同高度的声压微势阱,叠加形成三维阵列声压势阱。
[0036] 细胞输送机构A包括微输送喷嘴4、脉冲致动装置5、喷嘴夹6、架板7,微输送喷嘴4通过喷嘴夹6固定安装在架板7上,脉冲致动装置5固定安装在架板7上,并与微输送喷嘴4上部连接,通过脉冲致动装置产生的脉冲惯性力,通过改变单个脉冲的大小,可以实现单个细胞或者多个细胞的精确输送,实现打印过程中细胞输送的精准可控,保证了细胞三维体系的高效精准构建。
[0037] 微输送喷嘴4的下端安装有喷头16,微输送喷嘴4与喷头16之间固定安装有细胞计数器12,当输送的细胞达到指定的数量时停止输送。
[0038] 架板7上固定安装有显微镜3,显微镜3朝向喷头16设置,显微镜跟随喷头运动,用于打印时观测细胞位置状态,显微镜3与上位机15连接,所述上位机15根据显微镜3的检测反馈控制三维平台的运动以及细胞的输送。
[0039] 平台驱动机构C包括底座板1‑1、升降支架1‑2、升降丝杆滑块组件1‑3和升降电机1‑4,升降支架1‑2固定安装在底座板1‑1上,升降丝杆滑块组件1‑3转动安装在升降支架1‑2上,升降电机1‑4与升降丝杆滑块组件1‑3连接,打印平台B固定安装在升降丝杆滑块组件1‑
3的滑块上,通过平台驱动机构C对打印平台B进行高度调节。
[0040] 输送驱动机构D包括X轴驱动件、Y轴驱动件和支撑柱2‑1,支撑柱2‑1固定安装在底座板1‑1上,Y轴驱动件固定安装在支撑柱1‑1上,X轴驱动件固定安装在Y轴驱动件上,细胞输送机构安装在X轴驱动件上,通过X轴驱动件、Y轴驱动件对细胞输送机构A的平面位置进行调节。
[0041] 在一些优选的方式中,X轴驱动件、Y轴驱动件的结构与平台驱动机构C的结构一致,均包括支架、丝杆滑块组件和驱动电机,丝杆滑块组件转动安装在支架内,驱动电机与丝杆滑块组件连接。
[0042] 在一些优选的方式中,在本装置外罩设有罩壳,在罩壳上固定安装有紫外灭菌灯9。
[0043] 上述三维超声阵列无支架细胞打印装置的打印工艺,包括以下步骤,
[0044] S1:对本打印装置进行灭菌处理,并保持温度恒定适宜,往多边形谐振腔中注入培养液,在微喷嘴中注入细胞悬浮液;
[0045] S2:根据预先设计的模型,压电换能器阵列工作,在多边形谐振腔最下层按需激发平面阵列声压微势阱;
[0046] S3:根据预先设计的模型,所述控制平台驱动机构移动,使喷头到达多边形谐振腔模型打印所需的特定高度,再控制输送驱动机构运动,使微喷嘴运动到指定声压微势阱位置;
[0047] S4:根据模型需要,细胞输送机构向对应的平面阵列声压微势阱内输送特定数量的细胞,输送出的细胞在声压势阱内声回复力的作用被俘获在该声压势阱内,完成单个势阱内细胞的打印,以次类推,直到完成一层平面所有声势阱内细胞的打印;
[0048] S5:待第一层全部打印完成后,所述的三维超声阵列微势阱发生系统激发第二层阵列声压微势阱,向下移动多边形培养平台继续打印,重复S2‑S4步骤,以此类推实现细胞三维体系的打印;
[0049] S6:打印完成后将细胞三维体系在适宜温度下进行细胞培养,细胞分裂生长最终形成细胞组织。
[0050] 在进行细胞打印时,细胞输送机构A输出的打印细胞是单个或者多个,根据模型要求打印的细胞可以是单种或者多种,打印细胞时细胞液浓度较高,所述微喷嘴中载有的细6 7
胞液浓度大致为10~10,依据打印细胞的大小调节细胞液浓度。
[0051] 在打印过程中,所述喷头16运动到培养腔指定位置时,喷头16并不是悬浮于阵列声势阱之上,而是处于势阱当中,微喷嘴直接往特定的势阱中合适的位置打印细胞。
[0052] 本发明中,所述阵列超声换能器放置于多边形谐振腔的内壁,可以是两个面也可以是多个面,当放置在多个面时,所述阵列超声换能器通过不同面的换能器之间的组合形成不同的阵列声压势阱,所述阵列超声换能器可以通过激发不同频率的声波形成不同大小的声势阱,构建不同密度的阵列声压微势阱,所述阵列超声换能器的激发频率为MHz级别,所形成的势阱大小为微米级。
[0053] 对所公开的实施例的上述说明,使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的,本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下,在其它实施例中实现;因此,本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例,而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
[0054] 尽管本文较多地使用了图中附图标记对应的术语,但并不排除使用其它术语的可能性;使用这些术语仅仅是为了更方便地描述和解释本发明的本质;把它们解释成任何一种附加的限制都是与本发明精神相违背的。

附图说明

[0026] 图1为三维超声阵列微势阱无支架细胞3D打印系统的示意图。
[0027] 图2为多边形谐振腔的局部放大示意图。
[0028] 图3至图5为单个声势阱中的单细胞与多细胞打印示意图。
[0029] 图6至图9为三维超声阵列微势阱无支架细胞3D打印工艺的原理示意图。
[0030] 附图说明:1、信号发生器;2、功率放大器;3、观察显微镜;4、微输送喷嘴;5、脉冲致动装置;6、喷嘴夹、;7、架板;8、底盘;9、紫外灭菌灯;12细胞计数器;13压电换能器阵列;14、多边形谐振腔、;15、上位机;16、喷头。
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