盲专网 - 一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2017-09-26

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2018-01-30

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2020-07-17

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2037-09-26

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201710887571.5	申请日	2017-09-26
公开/公告号	CN107541531B	公开/公告日	2020-07-17
授权日	2020-07-17	预估到期日	2037-09-26
申请年	2017年	公开/公告年	2020年
缴费截止日
分类号	C12P13/12 、C02F3/34 、C12R1/645 、C02F101/10	主分类号	C12P13/12
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	0
权利要求数量	1	非专利引证数量	0
引用专利数量	0	被引证专利数量	0
非专利引证
引用专利		被引证专利
专利权维持	4	专利申请国编码	CN
专利事件		事务标签	公开、实质审查、授权

申请人信息

申请人	扬州工业职业技术学院	第一申请人	扬州工业职业技术学院
专利权人	扬州工业职业技术学院	当前专利权人	扬州工业职业技术学院
发明人	汪洋、张猛	第一发明人	汪洋
地址	江苏省扬州市华扬西路199号	邮编	225127
申请人数量	1	发明人数量	2
申请人所在省	江苏省	申请人所在市	江苏省扬州市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

北京中济纬天专利代理有限公司

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

于跃

摘要

本发明涉及一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法，包括如下步骤：(1)菌种活化：从‑80℃冰箱中取出海洋真菌k21‑1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20‑25℃培养基箱中培养3‑5天，备用；(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20‑25℃摇床，150‑180转/分钟，培养3‑4天，备用；(3)硫化物的转化：向含硫(S2‑)废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20‑25℃静置培养3‑4周，即可将含硫(S2‑)废水中的硫(S2‑)转化为蛋氨酸。

摘要附图
说明书附图：图1

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2020-07-17	授权
2	2018-01-30	实质审查的生效	IPC(主分类): C12P 13/12 专利申请号: 201710887571.5 申请日: 2017.09.26
3	2018-01-05	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种海洋真菌k21-1将S2-转化为蛋氨酸的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基平板中，于20-25℃培养基箱中培养3-5天，备用；
(2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20-25℃摇床，150-180转/分钟，培养3-4天，备用；
(3)硫化物的转化：向含S2-废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20-25℃静置培养3-4周，即可将含S2-废水中的S2-转化为蛋氨酸；
步骤(1)中所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂；
步骤(2)所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素；
步骤(3)中废水、煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素的用量为每1000mL废水中加入200g煮沸的土豆汁、15g葡萄糖、30g海水素，含S2-废水中S2-的浓度为30-40mg/L。

说明书

技术领域

[0001] 本发明属于石油化工污水处理领域，具体涉及一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法。

背景技术

[0002] 石油炼制的主要生产过程包括：常压蒸馏、减压蒸馏、催化裂化、催化加氢、重油重整等，这些工艺是炼油污水形成的主要原因。炼油废水根据其产生来源和组成特点一般可分为：含油污水、含硫污水和含碱污水。

[0003] 石油开采过程中往往会产生大量的含硫废水，不仅会引起管线与设备的腐蚀，还会导致受纳水体的水质恶化，对正常生产、水生生物以及人类健康造成威胁。因此，在该类废水排放之前，S2-的去除非常重要。废水中的硫化物可以通过物理、化学以及生物三种方法去除。目前石油化工行业普遍采用的是气提法，即通过高温蒸汽将污水中的硫化物吹脱至大气，以缓解其可能带来的腐蚀问题。然而，该方法不仅能耗高，吹脱至大气中的H2S也是重要的污染物，导致二次污染问题，因此，寻找一种高效、环保的除硫方法显得尤为重要。

[0004] 石化炼油污水污染物成分复杂，主要含有石油类杂质、硫化物、氨氮、金属盐类化合物、氰化物、无机酸以及少量的芳香胺类化合物、多环芳经化合物、杂环化合物等物质，其中石油类、氰化物、硫醇以及重金属未、铅、铬、辐等污染危害严重，且难降解和可生化性差，如污染物中一些物质或本身难于被生物降解，电脱盐工段产生的具有一定温度的高含盐污水也难以被生物降解，一些物质的存在也会影响微生物的生长或抑制生物降解的进行，导致生物系统处理效果变差，或可抑制硝化菌的生长繁殖，从而影响生物处理工艺对氨氮的去除。

发明内容

[0005] 本发明提供一种海洋真菌k21-1在含硫污水处理中的应用。所述含硫污水优选石油化工污水。

[0006] 本发明的另一实施方案提供一种海洋真菌k21-1在含硫污水处理中的应用，其特征在于所述海洋真菌k21-1将污水中的硫化物(S2-)转化为蛋氨酸。

[0007] 本发明的另一实施方案提供一种海洋真菌k21-1将硫化物(S2-)转化为蛋氨酸的方法，其特征在于包括如下步骤：

[0008] (1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20-25℃培养基箱中培养3-5天，备用；

[0009] (2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20-25℃摇床，150-180转/分钟，培养3-4天，备用；

[0010] (3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水中加入煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20-25℃静置培养3-4周，即可将含硫(S2-)废水中的硫(S2-)转化为蛋氨酸。

[0011] 步骤(1)中所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂；步骤(2)所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素；步骤(3)中废水、煮沸的土豆汁、葡萄糖、海水素的用量为每1000mL废水中加入200g煮沸的土豆汁、15g葡萄糖、
30g海水素，含硫废水中S2-的浓度为30-40mg/L。

[0012] 本发明所述的海洋真菌k21-1的菌种信息已在NCBI中公布GenBank:MF179020.1。

[0013] 与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明利用海洋真菌k21-1自身代谢摄取外界S2-，并将其转化为蛋氨酸的方法，能有效去除含硫污水(尤其是石油化工污水)中的S2-，本发明的技术方案利用了微生物的体内代谢的特点，不污染环境，具有环保和废物回收再利用等诸多优点。

实施方案

[0015] 为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。

[0016] 根据取自中国石化某油田采油厂二级过滤器出口的废水中硫(S2-)的含量(约30mg/L)，本发明实施例中采用蒸馏水和Na2S·9H2O(分析纯)分别配制30、40mg/L的含S2-废水。

[0017] 实施例1

[0018] (1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于20℃培养基箱中培养5天，备用；所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、
15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂。

[0019] (2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，20℃摇床，180转/分钟，培养4天，备用；所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素。

[0020] (3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水(200mL，S2-的浓度为30mg/L)中加入煮沸的土豆汁(40g)、葡萄糖(3g)、海水素(6g)后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于20℃静置培养4周后，检测液体中S2-浓度(采用X射线荧光光谱法)及蛋氨酸(HPLC法)的定性检测，结果表明S2-的浓度<1.0mg/L，确实产生了蛋氨酸(保留时间20.1min，图1)。

[0021] HPLC分析条件：流动相A：0.1％磷酸溶液(用三乙胺调至pH6.4)，流动相B：甲醇；.A：60％，B：40％，流速1mL/min；检测波长260nm；柱温30℃；进样量10μL。

[0022] 实施例2

[0023] (1)菌种活化：从-80℃冰箱中取出海洋真菌k21-1菌种，菌种保存液融化至室温后，挑取菌种接种于PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板中，于25℃培养基箱中培养3天，备用；所述PDA培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、
15g葡萄糖、30g海水素、12g琼脂。

[0024] (2)制备种子液：用接种环从步骤(1)平板上挑取菌株，转接至种子培养基中，25℃摇床，150转/分钟，培养3天，备用；所述的种子培养基的配置方法为每1000mL水中，使用如下成分：200g土豆煮沸取汁、15g葡萄糖、30g海水素。

[0025] (3)硫化物的转化：向含硫(S2-)废水(200mL，S2-的浓度为40mg/L)中加入煮沸的土豆汁(40g)、葡萄糖(3g)、海水素(6g)后，将步骤(2)制备的种子液转接其中，于25℃静置培养3周后，检测液体中S2-浓度(采用X射线荧光光谱法)及蛋氨酸(HPLC法)的定性检测，结果表明S2-的浓度<1.0mg/L，确实产生了蛋氨酸。

[0026] 注：实施例1和实施例2在步骤(3)转接种子液后，立即进行HPLC分析，未检测到蛋氨酸(图1)，足以说明本发明海洋真菌k21-1的确利用了外界环境中的S2-，经代谢产生了蛋氨酸(还可能包括其他含硫物质)。

附图说明

[0014] 图1a：实施例1静置4周后的培养液的HPLC图；b：实施例1步骤(3)转接种子液后，立即进行HPLC分析图；c：L-蛋氨酸的HPLC图；d：实施例1静置4周后的培养液+L-蛋氨酸的HPLC图

首页 > 专利 > 扬州工业职业技术学院 > 一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法专利详情

一种利用微生物代谢处理石油化工污水生产蛋氨酸的方法 0 0

技术领域

背景技术

发明内容

实施方案

附图说明