一种黑曲霉6-4光修复酶及其构建方法   0    0

本发明公开了一种黑曲霉6‑4光修复酶及其构建方法，所述的黑曲霉具有SEQ ID NO.1的核苷酸序列。构建方法为从现有的野生型黑曲霉中获得6‑4光修复酶基因基因An6‑4，重新设计核苷酸序列，选择大肠杆菌表达系统偏好的密码子进行优化，得到改造后的基因An6‑4'，连接基因片段与pET22b质粒，构建出重组表达质粒；将该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出工程菌，所述的工程菌在20℃和1mM IPTG条件下获得了较好的表达。本发明与现有技术相比，成功在异源表达系统中表达出的6‑4光修复酶，获得活性可溶蛋白，具有抗氧化能力极好，而且活性持久稳定的特点，可以在生物医药、化妆品领域应用。

1.一种黑曲霉(Aspergillus niger)6-4光修复酶的编码基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种表达载体，所述的载体为重组质粒，其特征在于：该重组质粒为含有权利要求1所述编码基因的pET-22b(+)重组质粒。

3.一种宿主细胞，其特征在于：所述的宿主细胞为大肠杆菌且含有权利要求2所述的表达载体。

4.一种黑曲霉6-4光修复酶的构建方法：包括以下步骤：
从现有的野生型(wild-type，WT)黑曲霉(Aspergillus niger)中获得6-4光修复酶基因基因An6-4，重新设计核苷酸序列，选择大肠杆菌表达系统偏好的密码子进行优化，得到改造后的如SEQ ID NO.1所示的基因An6-4'；
将改造后的基因An6-4'与pET22b质粒连接，构建具Amp抗性的重组表达载体pET22b-An6-4'；
将pET22b-An6-4'重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞，构建用于An6-4'表达的基因工程菌Rosetta(DE3)/pET22b-An6-4'；
采用Ni2+离子亲和层析法及SDS-PAGE电泳，进行纯化，即可得到黑曲霉6-4光修复酶。