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一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法   0    0

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专利申请流程有哪些步骤?
专利申请流程图
申请
申请号:指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。
申请日:提出专利申请之日。
2018-07-06
申请公布
申请公布指发明专利申请经初步审查合格后,自申请日(或优先权日)起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。
申请公布号:专利申请过程中,在尚未取得专利授权之前,国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。
申请公布日:申请公开的日期,即在专利公报上予以公开的日期。
2018-12-14
授权
授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由,授予发明专利权;或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由,授予实用新型专利权或外观设计专利权。
2021-01-05
预估到期
发明专利权的期限为二十年,实用新型专利权期限为十年,外观设计专利权期限为十五年,均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。
2038-07-06
基本信息
有效性 有效专利 专利类型 发明专利
申请号 CN201810737611.2 申请日 2018-07-06
公开/公告号 CN108834959B 公开/公告日 2021-01-05
授权日 2021-01-05 预估到期日 2038-07-06
申请年 2018年 公开/公告年 2021年
缴费截止日
分类号 A01K61/17A01K61/59 主分类号 A01K61/17
是否联合申请 独立申请 文献类型号 B
独权数量 1 从权数量 8
权利要求数量 9 非专利引证数量 0
引用专利数量 3 被引证专利数量 0
非专利引证
引用专利 CN1736183A、CN104823882A、US2014331938A1 被引证专利
专利权维持 4 专利申请国编码 CN
专利事件 事务标签 公开、实质审查、授权
申请人信息
申请人 第一申请人
专利权人 浙江海洋大学 当前专利权人 浙江海洋大学
发明人 李继姬、曾善美、叶莹莹 第一发明人 李继姬
地址 浙江省舟山市定海区临城街道长峙岛海大南路1号 邮编 316000
申请人数量 1 发明人数量 3
申请人所在省 浙江省 申请人所在市 浙江省舟山市
代理人信息
代理机构
专利代理机构是经省专利管理局审核,国家知识产权局批准设立,可以接受委托人的委托,在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。
杭州浙科专利事务所 代理人
专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务,取得一定资格的人。
吴秉中
摘要
本发明公开了一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。有益效果为:本发明采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激促进拖卵型桡足类安全释放卵粒,能使拖卵型桡足类安全释放卵粒的同时提升产卵量,能提高成体的成活率,且得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒,提高孵化率。
  • 摘要附图
    一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法
法律状态
序号 法律状态公告日 法律状态 法律状态信息
1 2021-01-05 授权
2 2018-12-14 实质审查的生效 IPC(主分类): A01K 61/17 专利申请号: 201810737611.2 申请日: 2018.07.06
3 2018-11-20 公开
权利要求
权利要求书是申请文件最核心的部分,是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。
1.一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。

2.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述超声波的参数为:频率8-32kHz,强度12-54mW/cm2。

3.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述超声波的输出模式为两短一长间断式。

4.根据权利要求3所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述两短一长间断式的参数为:发射0.1-0.4s,停顿1-3s,发射0.1-0.4s,停顿1-3s,发射0.3-0.8s,停顿
3-7s。

5.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述超声波的循环刺激持续时间为3-6min,所述超声波的循环刺激时间间隔为1-2h。

6.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述超声波循环刺激2-3周期。

7.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述海水深度为5-13cm。

8.根据权利要求1所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.34-0.38mg/L和0.05-0.12mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气24-36h,最后调节海水的盐度至2.7-3.5%,即可。

9.根据权利要求8所述的一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,其特征在于:所述半胱氨酸中含有1.5-2.5%的D-半胱氨酸。
说明书

技术领域

[0001] 本发明涉及卵粒脱离技术领域,尤其是涉及一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法。技术背景
[0002] 在海洋生态系统中,浮游动物种群变化和生产力的高低,对于整个海洋生态系统结构、功能、以及生物资源的补充都具有十分重要的影响。海洋挠桡足类,隶属于节肢动物门(Arthropoda)、甲壳亚门(Crustacea)、桡足纲(Copepoda),为小型甲壳动物,体长<3mm,营浮游、底栖或寄生生活,分布于海洋、淡水或半咸水中,数量极大,种类繁多,既是中、上层经济鱼类的主要摄食对象,又是养殖鱼、虾类幼体的重要开口饵料之一,故在水生态系统食物网和水产养殖中具有重要意义。挠足类的数量变动不仅与渔业的丰歉直接相关,对渔业资源结构有间接的影响,而且,对浮游植物的数量变化有着重要的调控作用,从而影响甚至改变海洋生态系统物流和能流路径和流向。此外,挠足类作为生产力第二环节次级生产力中的重要组成部分,在初级生产和更高营养级之间起着承上启下的重要作用,在海洋生态系统中占有非常重要的位置。由于挠足类在整个海洋生态系统中重要作用,被列入当今一些国际重大研究计划的重点研究内容。因此,实验室条件下对桡足类的养殖是实现对其生物学研究的基础。拖卵型桡足类,如太平洋真宽水蚤等,卵粒自产出后一直拖挂在母体尾枝直至孵化成无节幼体才脱离母体。拖卵型桡足类的此种拖挂卵粒的特性,使得科研人员无法轻易分离成熟卵粒而不伤害亲体,成为限制该类物种生物学研究进展的障碍。因此,亟待新装置或者新方法以解决以上问题。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激的拖卵型桡足类卵粒脱离方法,该脱离方法能使拖卵型桡足类安全释放卵粒的同时提升产卵量,能提高成体的成活率,且得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒,提高孵化率。
[0004] 本发明针对背景技术中提到的问题,采取的技术方案为:
[0005] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。本发明首次利用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激促进拖卵型桡足类安全释放卵粒,利用本方法刺激能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒的同时且对产卵量有一定程度的提升,避免了化学刺激法对桡足类成体和卵粒产生化学毒性和污染残留。
[0006] 作为优选,超声波刺激的参数为:频率8-32kHz,强度12-54mW/cm2。该超声波传递给拖卵型桡足类及其卵粒的机械压能量一般<3mg/cm2,不会引起组织致热效应,从而避免了能有效超声波的致热而引起的不良副作用,使拖卵型桡足类安全释放卵粒,同时该种超声波发生在细胞边缘及周围液体时,通过直接改变膜通透性和第二信使活性来刺激细胞活动,同时由于超声波产生的细胞膜表面电化学紊乱激活了腺苷酸环化酶,然后再刺激细胞内活动,进而刺激细胞增殖及细胞外基质合成,提高产卵量。
[0007] 作为优选,超声波的输出模式为两短一长间断式。
[0008] 进一步优选,两短一长间断式的参数为:发射0.1-0.4s,停顿1-3s,发射0.1-0.4s,停顿1-3s,发射0.3-0.8s,停顿3-7s。
[0009] 作为优选,超声波的循环刺激持续时间为3-6min,超声波的循环刺激时间间隔为1-2h。
[0010] 作为优选,超声波循环刺激2-3周期。
[0011] 作为优选,海水深度为5-13cm。该海水深度利于超声波的传播,使得海水中拖卵型桡足类均能收到超声波的刺激而提高产卵量和卵粒的脱离效果。
[0012] 作为优选,海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.34-0.38mg/L和0.05-0.12mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气24-36h,最后调节海水的盐度至2.7-3.5%,即可。该步骤能够有效地对天然海水中进行灭菌处理,杀灭海水中的各种病原性微生物,使经过除杂、灭菌、充气、调配盐度后的海水更加适合拖卵型桡足类的生长繁殖而达到生机旺盛的状态,为产卵做准备。
[0013] 为了优化技术方案,采取的措施还包括:半胱氨酸中含有1.5-2.5%的D-半胱氨酸。本发明用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠发挥协同作用,能够中和灭菌过程用氧化剂或产生的具有氧化作用的物质,避免氧化剂的存在对拖卵型桡足类及其卵粒的影响,提高成体的成活率和卵粒的孵化率,此外用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠预处理过的海水能够刺激拖卵型桡足类对光周期和氧含量的敏感度并将信息传递给卵粒,得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒而不管周围环境条件的变化,提高卵粒的环境适应性能,使得卵粒更容易生存,提高孵化率,且有助于脱离母体的卵粒迅速分散且漂浮于海水中,提高收集卵粒的简易度。
[0014] 与现有技术相比,本发明的优点在于:1)本发明首次利用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激促进拖卵型桡足类安全释放卵粒,能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒,避免了化学刺激法对桡足类成体和卵粒产生化学毒性和污染残留;2)本发明脱离方法用超声波发生能刺激细胞内活动,进而刺激细胞增殖及细胞外基质合成,提高产卵量;3)本发明用暂养水体能提高成体的成活率和卵粒的孵化率,能够刺激拖卵型桡足类对光周期和氧含量的敏感度并将信息传递给卵粒,得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒,提高孵化率。

实施方案

[0015] 下面通过实施例对本发明方案作进一步说明:
[0016] 实施例1:
[0017] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。改脱离方法首次利用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激促进拖卵型桡足类安全释放卵粒,利用本方法刺激能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒的同时且对产卵量有一定程度的提升,避免了化学刺激法对桡足类成体和卵粒产生化学毒性和污染残留。
[0018] 上述超声波刺激的参数为:频率8kHz,强度12mW/cm2。该超声波传递给拖卵型桡足类及其卵粒的机械压能量一般<3mg/cm2,不会引起组织致热效应,从而避免了能有效超声波的致热而引起的不良副作用,使拖卵型桡足类安全释放卵粒,同时该种超声波发生在细胞边缘及周围液体时,通过直接改变膜通透性和第二信使活性来刺激细胞活动,同时由于超声波产生的细胞膜表面电化学紊乱激活了腺苷酸环化酶,然后再刺激细胞内活动,进而刺激细胞增殖及细胞外基质合成,提高产卵量。
[0019] 上述超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.1s,停顿1s,发射0.1s,停顿1s,发射0.3s,停顿3s。
[0020] 上述超声波的循环刺激持续时间为3min,超声波的循环刺激时间间隔为1h。
[0021] 上述超声波循环刺激2周期。
[0022] 上述海水深度为5cm。该海水深度利于超声波的传播,使得海水中拖卵型桡足类均能收到超声波的刺激而提高产卵量和卵粒的脱离效果。
[0023] 上述海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.34mg/L和0.05mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气24h,最后调节海水的盐度至2.7%,即可。该步骤能够有效地对天然海水中进行灭菌处理,杀灭海水中的各种病原性微生物,使经过除杂、灭菌、充气、调配盐度后的海水更加适合拖卵型桡足类的生长繁殖而达到生机旺盛的状态,为产卵做准备。
[0024] 其中半胱氨酸中含有1.5%的D-半胱氨酸。本发明用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠发挥协同作用,能够中和灭菌过程用氧化剂或产生的具有氧化作用的物质,避免氧化剂的存在对拖卵型桡足类及其卵粒的影响,提高成体的成活率和卵粒的孵化率,此外用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠预处理过的海水能够刺激拖卵型桡足类对光周期和氧含量的敏感度并将信息传递给卵粒,得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒而不管周围环境条件的变化,提高卵粒的环境适应性能,使得卵粒更容易生存,提高孵化率,且有助于脱离母体的卵粒迅速分散且漂浮于海水中,提高收集卵粒的简易度。
[0025] 实施例2:
[0026] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。
[0027] 超声波刺激的参数为:频率20kHz,强度30mW/cm2;超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;超声波的循环刺激持续时间为4min,超声波的循环刺激时间间隔为1h;超声波循环刺激
2周期。
[0028] 海水深度为10cm,海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.36mg/L和0.08mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。其中半胱氨酸中含有2.0%的D-半胱氨酸。
[0029] 实施例3:
[0030] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。
[0031] 超声波刺激的参数为:频率32kHz,强度54mW/cm2;超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.4s,停顿3s,发射0.4s,停顿3s,发射0.8s,停顿7s;超声波的循环刺激持续时间为6min,超声波的循环刺激时间间隔为2h;超声波循环刺激
3周期。
[0032] 海水深度为13cm,海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.38mg/L和0.12mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气36h,最后调节海水的盐度至3.5%,即可。其中半胱氨酸中含有2.5%的D-半胱氨酸。
[0033] 实施例4:
[0034] 实验物种:太平洋真宽水蚤;
[0035] 拖挂卵粒成体的暂养水体深度10cm,对暂养水体的超声波频率20kHz,强度30mW/cm2,输出方式为脉冲式;输出模式为两短一长间断式:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;以此为一周期,循环刺激持续时间4min,1h后重复刺激一周期,结束。
[0036] 暂养水体为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。
[0037] 抽样调查刺激结果:卵粒脱离母体尾枝的比例为100%,全部脱离。脱离后,成体暂养3d,成活率依次为100%(1d)、98.2%(2d)和96.5%(3d);卵粒孵化率为78.4%。说明本实施例方法能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒,提高成体的成活率和卵粒的孵化率。
[0038] 实施例5:
[0039] 实验物种:太平洋真宽水蚤;
[0040] 拖挂卵粒成体的暂养水体深度10cm,对暂养水体的超声波频率20kHz,强度30mW/cm2,输出方式为脉冲式;输出模式为两短一长间断式:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;以此为一周期,循环刺激持续时间4min,1h后重复刺激一周期,结束。
[0041] 暂养水体为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.36mg/L和0.08mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。其中半胱氨酸中含有2.0%的D-半胱氨酸。
[0042] 抽样调查刺激结果:卵粒脱离母体尾枝的比例为100%,全部脱离。脱离后,成体暂养3d,成活率依次为100%(1d)、99.5%(2d)和98.1%(3d);卵粒中有62.8%处于滞育状态,其孵化率为90.9%。说明本实施例方法不仅能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒,提高成体的成活率和卵粒的孵化率;而且天然海水处理过程中含有D-半胱氨酸的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠发挥协同作用,提高成体的成活率和卵粒的孵化率,而且得到的拖卵型桡足类卵粒中有62.8%处于滞育状态。
[0043] 本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知,在此不进行赘述。
[0044] 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明,应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例,并不用于限制本发明,凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等,均应包含在本发明的保护范围之内。
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