[0015] 下面通过实施例对本发明方案作进一步说明:
[0016] 实施例1:
[0017] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。改脱离方法首次利用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波刺激促进拖卵型桡足类安全释放卵粒,利用本方法刺激能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒的同时且对产卵量有一定程度的提升,避免了化学刺激法对桡足类成体和卵粒产生化学毒性和污染残留。
[0018] 上述超声波刺激的参数为:频率8kHz,强度12mW/cm2。该超声波传递给拖卵型桡足类及其卵粒的机械压能量一般<3mg/cm2,不会引起组织致热效应,从而避免了能有效超声波的致热而引起的不良副作用,使拖卵型桡足类安全释放卵粒,同时该种超声波发生在细胞边缘及周围液体时,通过直接改变膜通透性和第二信使活性来刺激细胞活动,同时由于超声波产生的细胞膜表面电化学紊乱激活了腺苷酸环化酶,然后再刺激细胞内活动,进而刺激细胞增殖及细胞外基质合成,提高产卵量。
[0019] 上述超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.1s,停顿1s,发射0.1s,停顿1s,发射0.3s,停顿3s。
[0020] 上述超声波的循环刺激持续时间为3min,超声波的循环刺激时间间隔为1h。
[0021] 上述超声波循环刺激2周期。
[0022] 上述海水深度为5cm。该海水深度利于超声波的传播,使得海水中拖卵型桡足类均能收到超声波的刺激而提高产卵量和卵粒的脱离效果。
[0023] 上述海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.34mg/L和0.05mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气24h,最后调节海水的盐度至2.7%,即可。该步骤能够有效地对天然海水中进行灭菌处理,杀灭海水中的各种病原性微生物,使经过除杂、灭菌、充气、调配盐度后的海水更加适合拖卵型桡足类的生长繁殖而达到生机旺盛的状态,为产卵做准备。
[0024] 其中半胱氨酸中含有1.5%的D-半胱氨酸。本发明用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠发挥协同作用,能够中和灭菌过程用氧化剂或产生的具有氧化作用的物质,避免氧化剂的存在对拖卵型桡足类及其卵粒的影响,提高成体的成活率和卵粒的孵化率,此外用特别配比的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠预处理过的海水能够刺激拖卵型桡足类对光周期和氧含量的敏感度并将信息传递给卵粒,得到大量处于滞育状态的拖卵型桡足类卵粒而不管周围环境条件的变化,提高卵粒的环境适应性能,使得卵粒更容易生存,提高孵化率,且有助于脱离母体的卵粒迅速分散且漂浮于海水中,提高收集卵粒的简易度。
[0025] 实施例2:
[0026] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。
[0027] 超声波刺激的参数为:频率20kHz,强度30mW/cm2;超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;超声波的循环刺激持续时间为4min,超声波的循环刺激时间间隔为1h;超声波循环刺激
2周期。
[0028] 海水深度为10cm,海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.36mg/L和0.08mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。其中半胱氨酸中含有2.0%的D-半胱氨酸。
[0029] 实施例3:
[0030] 一种拖卵型桡足类卵粒脱离方法,将拖卵型桡足类暂养在海水中进行产卵培养,培养过程中对暂养水体采用低剂量、脉冲式、间断性发射的超声波进行超声波循环刺激使卵粒脱离,收集卵粒。
[0031] 超声波刺激的参数为:频率32kHz,强度54mW/cm2;超声波的输出模式为两短一长间断式,两短一长间断式的参数为:发射0.4s,停顿3s,发射0.4s,停顿3s,发射0.8s,停顿7s;超声波的循环刺激持续时间为6min,超声波的循环刺激时间间隔为2h;超声波循环刺激
3周期。
[0032] 海水深度为13cm,海水为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.38mg/L和0.12mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气36h,最后调节海水的盐度至3.5%,即可。其中半胱氨酸中含有2.5%的D-半胱氨酸。
[0033] 实施例4:
[0034] 实验物种:太平洋真宽水蚤;
[0035] 拖挂卵粒成体的暂养水体深度10cm,对暂养水体的超声波频率20kHz,强度30mW/cm2,输出方式为脉冲式;输出模式为两短一长间断式:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;以此为一周期,循环刺激持续时间4min,1h后重复刺激一周期,结束。
[0036] 暂养水体为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。
[0037] 抽样调查刺激结果:卵粒脱离母体尾枝的比例为100%,全部脱离。脱离后,成体暂养3d,成活率依次为100%(1d)、98.2%(2d)和96.5%(3d);卵粒孵化率为78.4%。说明本实施例方法能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒,提高成体的成活率和卵粒的孵化率。
[0038] 实施例5:
[0039] 实验物种:太平洋真宽水蚤;
[0040] 拖挂卵粒成体的暂养水体深度10cm,对暂养水体的超声波频率20kHz,强度30mW/cm2,输出方式为脉冲式;输出模式为两短一长间断式:发射0.2s,停顿2s,发射0.2s,停顿2s,发射0.5s,停顿5s;以此为一周期,循环刺激持续时间4min,1h后重复刺激一周期,结束。
[0041] 暂养水体为经过预处理的天然海水,其预处理步骤为:将天然海水用滤膜通过真空过滤泵筛去浮沙与杂物,灭菌后按添加量为0.36mg/L和0.08mg/L加入半胱氨酸和抗坏血酸钠,并且期间连续充气30h,最后调节海水的盐度至3.0%,即可。其中半胱氨酸中含有2.0%的D-半胱氨酸。
[0042] 抽样调查刺激结果:卵粒脱离母体尾枝的比例为100%,全部脱离。脱离后,成体暂养3d,成活率依次为100%(1d)、99.5%(2d)和98.1%(3d);卵粒中有62.8%处于滞育状态,其孵化率为90.9%。说明本实施例方法不仅能够使拖卵型桡足类安全释放卵粒,提高成体的成活率和卵粒的孵化率;而且天然海水处理过程中含有D-半胱氨酸的半胱氨酸能够和抗坏血酸钠发挥协同作用,提高成体的成活率和卵粒的孵化率,而且得到的拖卵型桡足类卵粒中有62.8%处于滞育状态。
[0043] 本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知,在此不进行赘述。
[0044] 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明,应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例,并不用于限制本发明,凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等,均应包含在本发明的保护范围之内。