[0027] 下面通过具体实施例,对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
[0028] 本发明中,若非特指,所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规方法。
[0029] 人工海水配方:
[0030] 氯化钠 NaCl 25.0 g/L,氯化镁 MgCl2 2. 0 g/L,硫酸镁 MgSO4 3.2 g/L,氯化钙 CaCl2 1.2 g/L,碳酸氢钠 NaHCO3 0.2 g/L,氯化钾 KCl 0.7 g/L,溴化钠 NaBr 0.06 g/L,硼酸 H3BO3 0.06 g/L,硅酸钠 Na2SiO3 0.0024 g/L,磷酸 H3PO4 0.002 g/L,六氯化二铝 Al2Cl6 0.013 g/L,氨 NH3 0.002 g/L,硝酸锂 LiNO3 0.0013 g/L,蒸馏水余量,pH值:7.5-7.8。
[0031] 实施例1:
[0032] 一种利用海产品下脚料制备生态仿生型微生物絮凝剂的方法,包括如下步骤:
[0033] ⑴将买来的海产品下脚料(鱼肚、鱼肉碎屑)中的杂质挑拣出来,用自来水清洗海产品下脚料1-2遍后,再用蒸馏水清洗2-3遍;然后将大块部分进行剪切、搅碎后,称取500g左右放入1000mL的烧杯中;加入200mL的人工海水;
[0034] ⑵加入浓盐酸(37%)200mL;在95℃下保温24h水解;
[0035] ⑶用四层纱布过滤,收集滤液并用氢氧化钠溶液进行中和,即得到水解原液。将原液收集,并用人工海水定容至500mL;
[0036] ⑷用仪器测量出含碳量、含氮量、含磷量。因未改良前培养基中C/N的比例为22:1到23:1之间,所以每500mL的培养基添加葡萄糖1g,添加磷酸二氢钾0.5g,制成改良后的培养基;每100mL培养基加入载体7g,优选加入菲律宾蛤仔养殖地的天然沙土,沙土重量比组成为:50%沙, 50%土。
[0037] ⑸取五只原生态未经冲洗的菲律宾蛤仔(约7g/只)于装有100mL无菌海水的锥形瓶中进行冲洗,依次清洗三次且在第三次的培养瓶中直接静置吐泥24小时,从而获得菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液;
[0038] ⑹将0.5mL的菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液接种到步骤(4)所得已灭菌的100mL液体培养基中;
[0039] ⑺接种后的培养瓶放在温度为25℃,转速为180r/min的摇床培养箱中培养,培养时间为36小时;
[0040] ⑻摇床培养36小时后,直接用四层纱布进行过滤分离出沉积物,将沉积物进行冻干,制得生态仿生型微生物絮凝剂。
[0041] 实施例2:
[0042] 一种利用海产品下脚料制备生态仿生型微生物絮凝剂的方法,包括如下步骤:
[0043] ⑴将买来的海产品下脚料(鱼肚、鱼肉碎屑)中的杂质挑拣出来,用自来水清洗海产品下脚料1-2遍后,再用蒸馏水清洗2-3遍;然后将大块部分进行剪切、搅碎后,称取500g左右放入1000mL的烧杯中;加入400mL的人工海水;
[0044] ⑵加入浓盐酸(37%)400mL;在115℃下保温12h水解;
[0045] ⑶用四层纱布过滤,收集滤液并用氢氧化钠溶液进行中和,即得到水解原液。将原液收集,并用人工海水定容至1000mL;
[0046] ⑷用仪器测量出含碳量、含氮量、含磷量。因未改良前培养基中C/N的比例为22:1到23:1之间,所以每1000mL的培养基添加葡萄糖3g,添加磷酸二氢钾1g,制成改良后的培养基;每100mL培养基加入载体10g,优选加入菲律宾蛤仔养殖地的天然沙土,沙土重量比组成为: 80%沙,20%土。
[0047] ⑸取五只原生态未经冲洗的菲律宾蛤仔(约7g/只)于装有100mL无菌海水的锥形瓶中进行冲洗,依次清洗三次且在第三次的培养瓶中直接静置吐泥24小时,从而获得菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液;
[0048] ⑹将0.5mL的菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液接种到步骤(4)所得已灭菌的100mL液体培养基中;
[0049] ⑺接种后的培养瓶放在温度为25℃,转速为180r/min的摇床培养箱中培养,培养时间为36小时;
[0050] ⑻摇床培养36小时后,直接用四层纱布进行过滤分离出沉积物,将沉积物进行冻干,制得生态仿生型微生物絮凝剂。
[0051] 实施例3:
[0052] 一种利用海产品下脚料制备生态仿生型微生物絮凝剂的方法,包括如下步骤:
[0053] ⑴将买来的海产品下脚料(鱼肚、鱼肉碎屑)中的杂质挑拣出来,用自来水清洗海产品下脚料1-2遍后,用蒸馏水清洗2-3遍;然后将大块部分进行剪切、大致研磨后,称取500g左右放入1000mL的烧杯中;加入200mL的人工海水;
[0054] ⑵将木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分别称取1g放入烧杯中调节pH在6-7左右;在水浴锅中调节温度为40℃,保温4小时;
[0055] ⑶用四层纱布过滤,收集滤液并用氢氧化钠溶液进行中和,即得到酶解原液。将原液收集,并用人工海水定容至500mL。
[0056] ⑷用仪器测量出含碳量、含氮量、含磷量。因未改良前培养基中C/N的比例为22:1到23:1之间,所以每500mL的培养基添加葡萄糖1g,添加磷酸二氢钾0.5g;每100mL培养基加入载体8g,优选加入菲律宾蛤仔养殖地的天然沙土,沙土重量比组成为:70%沙,30%土。
[0057] ⑸取五只原生态未经冲洗的菲律宾蛤仔(约7g/只)于装有100mL无菌海水的锥形瓶中进行冲洗,依次清洗三次且在第三次的培养瓶中直接静置吐泥24小时,从而获得菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液;
[0058] ⑹将0.5mL的菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液接种到步骤(4)所得已灭菌的100mL液体培养基中;
[0059] ⑺接种后的培养瓶放在温度为25℃,转速为180r/min的摇床培养箱中培养,培养时间为36小时;
[0060] ⑻摇床培养36小时后,在离心机9000g的转速下分离出沉积物,将沉积物进行冻干,制得生态仿生型微生物絮凝剂。
[0061] 实施例4:
[0062] ⑴将买来的海产品下脚料(鱼肚、鱼肉碎屑)中的杂质挑拣出来,用自来水清洗海产品下脚料1-2遍后,用天然海水清洗2-3遍;然后将大块部分进行剪切、大致研磨后,称取500g左右放入1000mL的烧杯中;加入400mL的人工海水;
[0063] ⑵将木瓜蛋白酶和中性蛋白酶分别称取1g放入烧杯中调节pH在6-7左右;在水浴锅中调节温度为75℃,保温4小时;
[0064] ⑶用四层纱布过滤,收集滤液并用强碱溶液进行中和,即得到酶解原液。将原液收集,并用人工海水定容至500mL;
[0065] ⑷用仪器测量出含碳量、含氮量、含磷量。因未改良前培养基中C/N的比例为22:1到23:1之间,所以每500mL的培养基添加葡萄糖3g,添加工业磷酸二氢钾0.6g;每100mL培养基加入载体7.5g,优选加入菲律宾蛤仔养殖地的天然沙土,沙土重量比组成为:60%沙,40%土。
[0066] ⑸然后用改良后灭菌的培养基(含有7.5g的沙土)接种含有絮凝剂的菌液,每100mL的培养基接种0.5mL的菌液。
[0067] ⑸取五只原生态未经冲洗的菲律宾蛤仔(约7g/只)于装有100mL无菌海水的锥形瓶中进行冲洗,依次清洗三次且在第三次的培养瓶中直接静置吐泥24小时,从而获得菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液;
[0068] ⑹将0.5mL的菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液接种到上述改良后已灭菌的100mL液体培养基中;
[0069] ⑺接种后的培养瓶放在温度为25℃,转速为180r/min的摇床培养箱中培养,培养时间为36小时;
[0070] ⑻摇床培养36小时后,直接用四层纱布进行过滤分离出沉积物,将沉积物进行冻干,制得生态仿生型微生物絮凝剂。
[0071] 絮凝活性的测定步骤如下:1)量取高岭土悬浊液(4g/L)95mL(边加边搅拌,充分混合均匀);2)倒入烧杯中,加5mL的1%氯化钙溶液,用氢氧化钠溶液调pH至7.5;3)加入沉积物样品1g;4)快速搅拌1min,然后再缓慢搅拌2min;4)静置10min后,取距离液面3mL在分光光度计的550nm处比色;5)计算得出絮凝率。
[0072] 培养基成分:见实施例1-4。
[0073] 培养条件:温度为25℃,转速为180r/min,菲律宾蛤仔吐的污泥悬浊液接种量为5‰,培养时间为36h。在上述的培养基成分和培养条件下,冷冻干燥得到生态仿生型微生物絮凝剂,酶解工艺的培养基制备的絮凝剂的絮凝率可达到75%,酸解工艺的培养基制备的絮凝剂的絮凝率可达到75%。连续培养十代,每代的絮凝率都在60%以上。
[0074] 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。