实施方案
[0018] 为了使本发明更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0019] 实施例1：
[0020] (1)合成PEI/PEG修饰的氧化铁纳米粒子(PEG/PEI‑SPIONs)。称取15g PEG和0.3g PEI 于三口烧瓶中，在氩气的氛围中280℃回流1h。产物依次用甲苯和丙酮清洗三次，并用磁选柱清洗残留的甲苯丙酮，所得样品分散于去离子水中，即得到PEG/PEI‑SPIONs。 PEG‑PEI‑SPIONs的平均粒径是9.25±0.36nm。
[0021] (2)将20mg CS分别与20ml浓度为1mg/ml的PEG/PEI‑SPIONs水分散液混合，在温度为4℃，转速为60r/min的摇床中反应5h。反应后的样品置于4℃冰箱过夜，然后样品在透析袋中透析120h，即得到CS‑SPIONs，CS‑SPIONs在水中的电泳粒度为30.9nm,zeta电位为 ‑15.3mV。热重分析表明CS在SPIONs上的修饰量为37.0wt％
[0022] (3)取体重约220～250g的健康成年SD大鼠，腹腔注射10％水合氯醛麻醉(3.5ml/kg 体重)。然后将实验大鼠头部固定于显微操纵仪上。大鼠头部手术区域去毛，沿着头颅正中切开头皮，形成切口。分离皮下组织，用止血钳保持切口，暴露颅骨找到前囟和后囟。用手术刀和手术剪缓慢机械分离颅骨上组织直至颅骨表面，用去离子水去除碎组织，使前后囟充分暴露。调整大鼠立体定位仪使前囟和后囟处于同一水平线上，并记录相应的坐标。参照Paxinos 图谱确定左侧黑质坐标。根据操纵器上注射器针尖所指位置，用手术刀在颅骨上做记号并用颅骨钻在颅骨上小心钻孔(孔径约2mm)，小心去除头盖骨和脑膜。用25μl微量进样器(0.57 mm内径)抽取5μl浓度为2mg/ml的CS‑SPIONs样品(样品事先用滤膜过滤)。微量进样器固定于微量操纵器上，缓慢地将样品注入左侧黑质部位。注射完毕留针5min，缓慢退针，以防纳米粒子分散液溢出和有利于样品扩散。取下止血钳，用手术线缝合切口皮肤，青霉素涂抹切口预防感染。给大鼠做好标记，待苏醒后放动物房中饲养。
[0023] 大鼠黑质部位组织切成体积约为1mm3大小的颗粒样品，放入EP管，加入3％的戊二醛溶液4℃过夜，倒掉3％戊二醛溶液，用0.1M，pH 7.0的PBS反复浸洗样品三次，清除残留在组织中的戊二醛，每次15min，此过程为前固定；用1％的锇酸溶液在避光的情况下固定样品1～2h，此过程称为后固定；倒掉1％的锇酸溶液，用0.1M，pH 7.0的PBS反复浸洗样品三次，每次15min，这样可以避免固定液与脱水剂间的反应。样品依次用50％、70％、80％、 90％以及100％的乙醇溶液对样品进行逐级脱水，每种浓度处理时间10～15min，再用体积比为1:1的乙醇和丙酮处理样品30min，最后用丙酮处理样品20min；用包埋剂与丙酮的混合液(体积比为1:1)处理样品1h(37℃)；用包埋剂与丙酮的混合液(体积比为3:1)处理样品3h(37℃)；
最后样品在37℃下包埋剂浸透过夜；将样品整齐放入包埋板的承接孔一端，缓慢倒入包埋剂，放入鼓风干燥箱中。编程设定加热温度和时间(37℃ 12h，45℃ 12h，60℃48h)使样品聚合固定在凝固的包埋剂中。得到样品包埋快后，先修块，再经过半薄切片，最后超薄切片，切下厚度约为70nm薄片。使用专用镊子将薄片置于200目的载网(碳支持膜)上。含有样品薄片的载网自然干燥后，用事先配制的醋酸双氧铀染色7～9min，最后用柠檬酸铅染色2～3min，再将样品放置于汞灯下干燥后，用TEM观察切片，修饰了CS的 PEG/PEI‑SPIONs极少数被内吞，大部分填充在细胞间隙中，且未发生团聚现象(图1)。
[0024] 实施例2：
[0025] (1)合成PEI/PEG修饰的氧化铁纳米粒子(PEG/PEI‑SPIONs)。称取15g PEG和0.3g PEI 于三口烧瓶中，在氩气的氛围中280℃回流1h。产物依次用甲苯和丙酮清洗三次，并用磁选柱清洗残留的甲苯丙酮，所得样品分散于去离子水中，即得到PEG/PEI‑SPIONs。 PEG‑PEI‑SPIONs的平均粒径是9.25±0.36nm。
[0026] (2)将40mg CS分别与20ml浓度为1mg/ml的PEG/PEI‑SPIONs水分散液混合，在温度为4℃，转速为60r/min的摇床中反应5h。反应后的样品置于4℃冰箱过夜，然后样品在透析袋中透析120h，即得到CS‑SPIONs，CS‑SPIONs在水中的电泳粒度为28.1nm,zeta电位为 ‑23.6mV。热重分析表明CS在SPIONs上的修饰量为41.3wt％
[0027] 其它动物实验及组织样品制作步骤及表征同实施例1，将5μl浓度为2mg/ml的 CS‑SPIONs样品注入到大鼠黑质部位以后，采用固定包埋、超薄切片技术在TEM下观察粒子的细胞结构分布。修饰了CS的PEG/PEI‑SPIONs极少数被内吞，大部分填充在细胞间隙中，且未发生团聚(图2)。
[0028] 实施例3(对比实施例)：
[0029] (1)合成PEI/PEG修饰的氧化铁纳米粒子(PEG/PEI‑SPIONs)。称取15g PEG和0.3g PEI 于三口烧瓶中，在氩气的氛围中280℃回流1h。产物依次用甲苯和丙酮清洗三次，并用磁选柱清洗残留的甲苯丙酮，所得样品分散于去离子水中，即得到PEG/PEI‑SPIONs。 PEG‑PEI‑SPIONs的平均粒径是9.25±0.36nm。
[0030] 其它动物实验及组织样品制作步骤及表征同实施例1，将5μl浓度为2mg/ml的 PEG/PEI‑SPIONs样品注入到大鼠黑质部位以后，采用固定包埋、超薄切片技术在TEM下观察粒子的细胞结构分布。PEG/PEI‑SPIONs在脑内大都被细胞吞噬，呈团聚态分布于细胞内的髓鞘或线粒体上，但很少分布于细胞间隙或细胞膜附近(图3)。
