[0051] 乙酰胆碱具有模拟酶活性，能催化过氧化氢分解，从而导致TMB被氧化显色。进行一系列实验探究，发现如图2A所示，有乙酰胆碱能使TMB从无色变成蓝色，而空白组和胆碱组都无法使TMB变色。进一步研究中，我们发现改变乙酰胆碱的浓度，其导致的TMB颜色的深度也是不一样的。所以得出TMB显色最大吸光度的大小是随乙酰胆碱浓度的变化而变化。取配制好三组的含过氧化氢的TMB溶液在试管中，第一组空白，另外一组加入0.01mM/L乙酰胆碱，另一组0.01mM/L胆碱，发现只有加入乙酰胆碱的TMB溶液由原来的无色变成蓝色。证明本实验的可行性。
[0052] 进一步探究乙酰胆碱使含过氧化氢溶液的3,3'，5,5'-四甲基联苯胺(TMB)变色，确定一系列优化条件：
[0053] 取配制好的含过氧化氢的TMB溶液在试管中，加入0.01mM/L乙酰胆碱，改变反应的条件，分三组实验。第一组乙酰胆碱溶液把pH分别调整为4,5,6,7,7.4,8,9，其他实验条件不变，加入相同的含过氧化氢的TMB溶液中，发现pH为7的时吸光度最大。
[0054] 第二组，只改变温度从20,25,30,35,37,40,45,50℃，其他实验条件不变，温度为37℃时其吸光度最大。
[0055] 第三组，只改变反应时间0-720秒，时间在720秒后最大吸光度趋于稳定。
[0056] 三组实验结果如图4A、4B和4C所示，在其他条件不变的情况下控制pH 4-9，温度20-50℃，时间0-720秒等条件下进行多组反应。最终确定pH为7.0、温度37℃、时间在720秒为最佳的实验条件。
[0057] 因为乙酰胆碱酯酶能使乙酰胆碱分解失活，导致乙酰胆碱失去模拟酶活性，无法催化过氧化氢的分解，从而使的TMB溶液无法产生显色反应。
[0058] 实施例1
[0059] 一种生物传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0060] 将乙酰胆碱缓冲溶液和乙酰胆碱酯酶缓冲溶液混合在37℃培养10--15min，将混合溶液加入含过氧化氢的TMB溶液中，即可。
[0061] 实施例2
[0062] 一种生物传感器，采用实施例所述的方法制备得到。
[0063] 实施例3
[0064] 一种生物传感器检测乙酰胆碱酯酶的应用，具体检测方法为：
[0065] 将乙酰胆碱缓冲溶液和分别与不同浓度的乙酰胆碱酯酶缓冲溶液混合，37℃培养15分钟,将混合溶液加入含过氧化氢的TMB溶液中，酰胆碱终浓度为10mM/L，乙酰胆碱酯酶终浓度分别为0.2mU/mL、0.4mU/mL、0.6mU/mL、0.8mU/mL、1.0mU/mL、1.2mU/mL和1.4mU/mL。
利用紫外可见光谱仪器测出吸收波，构建吸光度与乙酰胆碱酯酶浓度的线性关系，在652nm处的吸光度做线性，得出了线性的标准曲线方程A＝-0.10885C+0.1937，相关系数R2＝
0.99729，进而实现对乙酰胆碱酯酶的检测。结果如图6A、6B。
[0066] 实施例4
[0067] 一种检测有机磷农药的方法，具体检测方法为：
[0068] 将乙酰胆碱酯酶缓冲溶液分别和不同浓度的的有机磷农药混合，在37℃反应10分钟，然后分别加入乙酰胆碱(0.01mM/L)中，最后所述混合液分别加入到含有过氧化氢的3,3'，5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液中发生显色反应，有机磷农药终浓度分别为10mU/uL、
20mU/uL、30mU/uL、40mU/uL、50mU/uL、60mU/uL、70mU/uL、80mU/uL、90mU/uL、100mU/uL、
110mU/uL、120mU/uL、130mU/uL、140mU/uL，乙酰胆碱酯酶终浓度为1.4mU/mL。通过紫外可见光谱仪器测出吸收波，然后在652nm处的吸光度做线性，最后得出了线性的标准曲线方程A＝0.00189C+0.1679，相关系数R2＝0.99323。
