[0028] 实施例1：
[0029] 一、材料和试剂
[0030] 玫瑰叶为蔷薇科植物玫瑰Rosa rugosa Thunb.的绿叶，采摘后洗涤、阴干、粉碎，备用。
[0031] 无水乙醇、三氯乙酸、氯化钠为分析纯，购自麦克林试剂。
[0032] DEAE‑52纤维素购自北京索莱宝科技有限公司。
[0033] 二、方法
[0034] 1、总多糖的提取
[0035] 取2kg玫瑰叶，用20L蒸馏水热回流提取5h，自然冷却，过滤，保留水提取液，浓缩至5L，与20L无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，收集沉淀，得到玫瑰叶总多糖(MGS)。
[0036] 2、三氯乙酸脱蛋白
[0037] 称取适量MGS，用蒸馏水溶解成5mg/mL的多糖水溶液，缓慢滴加质量分数10％的三氯乙酸水溶液，多糖水溶液与三氯乙酸水溶液的体积比为20:1。4℃静置24h，4℃、5000rpm离心15分钟去除沉淀，上清液加入4倍体积无水乙醇混合均匀，静置醇沉24h，5000rpm离心15分钟，收集沉淀，冷冻干燥，得到脱蛋白的MGS。
[0038] 3、DEAE‑52纤维素柱层析分离纯化
[0039] 取0.2g脱蛋白的MGS用10mL蒸馏水溶解，上样于DEAE‑52层析柱(40cm×5cm)，依次用0、0.3、0.6mol/L NaCl溶液梯度洗脱，流速1mL/min，分步收集(每管15min)，每梯度20管。合并0.6mol/L NaCl溶液洗脱液，浓缩、透析、冷冻干燥得到纯化多糖。经硫酸‑苯酚法检测，多糖含量为99.7％。
[0040] 4、紫外吸收光谱检测
[0041] 用蒸馏水配制1mg/mL浓度的纯化多糖溶液，在190‑400nm范围内全波长扫描，观察其在波长260、280nm附近的吸收峰。
[0042] 5、扫描电子显微镜观察
[0043] 按照扫描电子显微镜操作规程制备样品，在扫描电子显微镜下观察，拍照记录。
[0044] 三、结果
[0045] 紫外吸收光谱检测图见图1，在260nm、280nm处无明显吸收峰，说明蛋白脱除成功。扫描电子显微镜观察拍照图见图2，表面较为粗糙，可观察到明显的凹陷以及空隙。
[0046] 实施例2：
[0047] 一、材料和试剂
[0048] 玫瑰多糖按实施例1方法制备，4℃保存备用。
[0049] 人皮肤成纤维细胞(HSF)购自无锡欣润生物。
[0050] 胎牛血清、DMEM/F12培养液购自凯基生物。
[0051] 二、方法
[0052] 1、细胞培养
[0053] 将HSF细胞用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液于37℃、5％CO2条件下培养，细胞长至85％时进行0.25％胰酶消化、传代培养。
[0054] 2、细胞增殖活性测定
[0055] 取对数生长期的HSF细胞，用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液制成细胞悬液，4
每孔1×10个细胞/100μL接种于96孔培养板。12小时后加入100μL含有不同浓度玫瑰多糖以及10％胎牛血清的DMEM/F12培养液，玫瑰多糖终浓度为10、20、40μg/mL，设置不含玫瑰多糖的对照组，继续培养48h，每孔加入5mg/mL的CCK‑8试剂20μL，37℃避光孵育4小时，然后除去每孔培养液，加入DMSO 150μL，震荡混匀以使CCK‑8还原产物溶解，酶标仪检测570nm波长处的吸光度值(OD值)，根据公式计算细胞增殖活性。
[0056] 细胞增殖活性(％)＝多糖组OD值/对照组OD值×100％。
[0057] 3、统计分析
[0058] 统计分析采用SPSS 17.0软件，结果用均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性。
[0059] 三、结果
[0060] 细胞增殖活性测定结果见表1和图3A，不同浓度玫瑰多糖均明显促进HSF细胞增殖，而且玫瑰多糖浓度越高，增殖活性越高，呈明显的浓度依赖效应。
[0061] 表1细胞增殖活性
[0062] 10μg/mL 20μg/mL 40μg/mL细胞增殖活性(％) 127.4±2.9 165.5±3.2 233.7±2.8
[0063] HSF细胞的增殖活性直接关系到皮肤的更新修复能力，这对皮肤的新老更替、受损修复至关重要。上述结果说明，本发明提供的玫瑰多糖具有促进皮肤更新修复的作用，可以用于制备促进皮肤更新修复的化妆品或药物。
[0064] 实施例3：
[0065] 一、材料和试剂
[0066] 玫瑰多糖按实施例1方法制备，4℃保存备用。
[0067] 人真皮成纤维细胞(HDF‑a)购自深圳市豪地华拓生物。
[0068] 胎牛血清、DMEM/F12培养液购自凯基生物。
[0069] 二、方法
[0070] 1、细胞培养
[0071] 将HDF‑a细胞用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液于37℃、5％CO2条件下培养，细胞长至85％时进行0.25％胰酶消化、传代培养。
[0072] 2、弹性蛋白(Elastin)表达水平测定
[0073] 取对数生长期的HDF‑a细胞，用含有10％胎牛血清的DMEM/F12培养液制成细胞悬5
液，每孔1×10 个细胞/500μL接种于24孔培养板。12小时后加入500μL含有不同浓度玫瑰多糖以及10％胎牛血清的DMEM/F12培养液，玫瑰多糖终浓度为10、20、40μg/mL，设置不含玫瑰多糖的对照组，继续培养48h，收集细胞，PBS洗涤，提取细胞总蛋白并定量，行SDS‑PAGE电泳，用转移电泳槽280mA恒流90min，将凝胶中蛋白转印至NC膜上，5％脱脂乳封闭2h，加一抗
4℃孵育过夜。PBST洗涤3次后加入二抗，37℃孵育1h。PBST洗涤3次后加入ECL，曝光显影后分析蛋白条带。内参为GAPDH。
[0074] 3、统计分析
[0075] 统计分析采用SPSS 17.0软件，结果用均数±标准差表示，两组间比较采用t检验，P<0.05为差异有显著性。
[0076] 三、结果
[0077] 弹性蛋白表达水平测定结果见图3B，不同浓度玫瑰多糖均明显促进弹性蛋白表达，而且玫瑰多糖浓度越高，弹性蛋白表达水平越高，呈明显的浓度依赖效应。
[0078] 真皮层的弹性蛋白含量高低决定了人皮肤的弹性大小。上述结果说明，本发明提供的玫瑰多糖具有提高皮肤弹性的作用，可以用于制备增加皮肤弹性的化妆品或药物。
