[0026] 下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
[0027] 应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
[0028] 本发明提供一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法，包括如下步骤：在罗汉果组培过程中和罗汉果栽培过程中，施加浓度50‑400μmol/L的茉莉酸甲酯，以促进罗汉果UGT72B21基因的表达。
[0029] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果组培过程中，将所述茉莉酸甲酯添加到所述罗汉果组培过程中的固体培养基中。
[0030] 在上述方案中，作为优选，所述罗汉果组培过程中所述固体培养基包含：MS，1.5mg/L6‑BA，0.3mg/L IBA，3.5g/L琼脂，30g/l蔗糖和1.0g/L活性炭。
[0031] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果栽培过程中，于罗汉果授粉后20～30天后，向罗汉果表面喷洒所述浓度50‑400μmol/L的茉莉酸甲酯至其表面滴水为止，每天于早上、中午和晚上各喷洒一次，连续喷施5天。
[0032] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果组培过程中的培养条件为：于相对湿度60‑66％，光照强度1400lux，光照时间8h/d和温度21～25℃条件下培养30d。
[0033] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，还包括：茉莉酸母液配制：用2％(v/v)的乙醇水溶液溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，得到灭菌后的茉莉酸甲酯母液；
[0034] 将该茉莉酸甲酯母液添加到罗汉果组培过程中的固体培养基中，至茉莉酸甲酯的终浓度为50‑400μmol/L；
[0035] 用乙醇助溶，将茉莉酸甲酯母液配成50‑400μmol/L的溶液，施加于所述罗汉果栽培过程中。
[0036] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，还包括如下步骤：
[0037] qRT‑PCR检测UGT72B21基因的表达：
[0038] 1)采集罗汉果果实，切成2‑4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于‑80℃备用；
[0039] 2)采用Trizol法提取罗汉果果实总RNA；
[0040] 3)将RNA反转录为cDNA；
[0041] 4)采用ABI7500实时荧光定量PCR仪检测UGT72B21基因的表达量，其中，扩增UGT72B21的引物序列为：上游引物CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG(SEQ ID NO:1)，下游引物CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA(SEQ ID NO:2)，内参基因用UBQ5基因，扩增引物序列为：上游引物ATAAAAGACCCAGCACCACATTC(SEQ ID NO:3)，下游引物CCCTTGCCGACTACAACATCC(SEQ ID NO:4)。
[0042] 在本发明的其中一个实施例中，作为优选，所述罗汉果栽培过程中，向罗汉果表面喷洒的茉莉酸甲酯的温度为4～10℃，同时，还采用注射的方式将茉莉酸甲酯注射入罗汉果植株的主茎中，注射量为5～16ml，注射的速率为4～8ml/h。在罗汉果栽培过程中，向罗汉果表面喷洒此温度的茉莉酸甲酯溶液，对罗汉果的果实给予一定的冷刺激，能够进一步诱导UGT72B21基因的表达。将茉莉酸甲酯直接注射于罗汉果体内，能够便于罗汉果植株对其的直接吸收，进一步加大吸收效率，且由于是直接注射到体内，冷刺激更加明显，能够进一步促进UGT72B21基因的表达。
[0043] 实施例1
[0044] 一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法，包括以下步骤：
[0045] (1)罗汉果组培苗施加茉莉酸甲酯；用2％的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，至茉莉酸甲酯最终浓度为50μmol/L，灭菌并冷却至24℃；固体培养基配比为MS+6‑BA1.5mg/L+IBA0.3mg/L+3.5g/L琼脂+30g/l蔗糖+1.0g/L活性炭。将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中，置于相对湿度60％、光照强度1400lux，光照时间8h/d，温度23℃条件下培养30d。
[0046] (2)栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯；用少量乙醇助溶，将茉莉酸甲酯原液配成50μmol/L的溶液，喷洒于授粉后20d的罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施5d。
[0047] 同时设置对比例1，
[0048] 1)将罗汉果组培苗接种于不含有茉莉酸甲酯的固体培养基中培养；
[0049] 2)不对罗汉果植株喷洒茉莉酸甲酯；其他条件与实施例1一致。
[0050] (3)qRT‑PCR检测UGT72B21基因的表达。
[0051] 采集果实，挑取果肉，切成2mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于‑80℃备用。
[0052] 采用改良Trizol法提取罗汉果果实总RNA。
[0053] 采用ABI7500实时荧光定量PCR仪。
[0054] 将RNA反转录为cDNA的反应体系为RNA 10.0μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 1.0μL，RT Primer Mix 1.0μL，5×PrimeScript Buffer 24.0μL，RNase Free dH2O 4.0μL；
反应条件为37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。
[0055] 采用Primer Premier 5.0软件设计引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中，UGT72B21引物序列为(FP：CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG，RP：CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA)，内参基因用UBQ5，序列为(FP：ATAAAAGACCCAGCACCACATTC，RP：CCCTTGCCGACTACAACATCC)。
[0056] qRT‑PCR反应体系(20μL)为SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2×)10.0μL，PCR Forward Primer(10μM)0.8μL，PCR Reverse Primer(10μM)0.8μL，ROX Reference Dye of Dye II(50×)0.4μL，Template 2.0μL，dH2O 6.0μL。反应条件为95℃(30s)，接着进行40个cycles[95℃(5s)，95℃(34s)]。
[0057] qRT‑PCR检测结果显示，对比例1中，罗汉果UGT72B21基因的表达量为1，而实施例1中，罗汉果UGT72B21基因的表达量高达7.3，较对比例1提高了630％，可见，实施例1可以显著促进罗汉果UGT72B21基因的高表达；HPLC检测结果显示，对比例1中，罗汉果甜苷V含量为0.80％，而实施例1中，罗汉果甜苷V含量高达1.60％，较对比例1提高了100％，可见，实施例
1还可以显著促进罗汉果甜苷V产量的提高。
[0058] 实施例2
[0059] 一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法，包括以下步骤：
[0060] (1)罗汉果组培苗施加茉莉酸甲酯；用2％的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，至茉莉酸甲酯最终浓度为400μmol/L，灭菌并冷却至26℃；固体培养基配比为MS+6‑BA1.5mg/L+IBA0.3mg/L+3.5g/L琼脂+30g/l蔗糖+1.0g/L活性炭。将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中，置于相对湿度66％、光照强度1400lux，光照时间8h/d，温度21℃条件下培养30d。
[0061] (2)栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯；用少量乙醇助溶，将茉莉酸甲酯原液配成400μmol/L的溶液，喷洒于授粉后30d的罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施5d。
[0062] 同时设置对比例2，
[0063] 1)将罗汉果组培苗接种于不含有茉莉酸甲酯的固体培养基中培养；
[0064] 2)不对罗汉果植株喷洒茉莉酸甲酯；其他条件与实施例1一致。
[0065] (3)qRT‑PCR检测UGT72B21基因的表达。
[0066] 采集果实，挑取果肉，切成4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于‑80℃备用。
[0067] 采用改良Trizol法提取罗汉果果实总RNA。
[0068] 采用ABI7500实时荧光定量PCR仪。
[0069] 将RNA反转录为cDNA的反应体系为RNA 10.0μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 1.0μL，RT Primer Mix 1.0μL，5×PrimeScript Buffer 24.0μL，RNase Free dH2O 4.0μL；
反应条件为37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。
[0070] 采用Primer Premier 5.0软件设计引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中，UGT72B21引物序列为(FP：CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG，RP：CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA)，内参基因用UBQ5，序列为(FP：ATAAAAGACCCAGCACCACATTC，RP：CCCTTGCCGACTACAACATCC)。
[0071] qRT‑PCR反应体系(20μL)为SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2×)10.0μL，PCR Forward Primer(10μM)0.8μL，PCR Reverse Primer(10μM)0.8μL，ROX Reference Dye of Dye II(50×)0.4μL，Template 2.0μL，dH2O 6.0μL。反应条件为95℃(30s)，接着进行40个cycles[95℃(5s)，95℃(34s)]。
[0072] qRT‑PCR检测结果显示，对比例2中，罗汉果UGT72B21基因的表达量为1，而实施例2中，罗汉果UGT72B21基因的表达量高达10.3，较对比例2提高了930％，可见，实施例2可以显著促进罗汉果UGT72B21基因的高表达；HPLC检测结果显示，对比例2中，罗汉果甜苷V含量为0.80％，而实施例2中，罗汉果甜苷V含量高达2.43％，较对比例2提高了203.75％，可见，实施例2还可以显著促进罗汉果甜苷V产量的提高。
[0073] 实施例3
[0074] 一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法，包括以下步骤：
[0075] (1)罗汉果组培苗施加茉莉酸甲酯；用2％的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，至茉莉酸甲酯最终浓度为225μmol/L，灭菌并冷却至24‑26℃；固体培养基配比为MS+6‑BA1.5mg/L+IBA0.3mg/L+3.5g/L琼脂+30g/l蔗糖+1.0g/L活性炭。将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中，置于相对湿度63％、光照强度1400lux，光照时间8h/d，温度25℃条件下培养30d。
[0076] (2)栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯；用少量乙醇助溶，将茉莉酸甲酯原液配成225μmol/L的溶液，喷洒于授粉后25d的罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施5d。
[0077] 同时设置对比例3，
[0078] 1)将罗汉果组培苗接种于不含有茉莉酸甲酯的固体培养基中培养；
[0079] 2)不对罗汉果植株喷洒茉莉酸甲酯；其他条件与实施例1一致。
[0080] (3)qRT‑PCR检测UGT72B21基因的表达。
[0081] 采集果实，挑取果肉，切成3mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于‑80℃备用。
[0082] 采用改良Trizol法提取罗汉果果实总RNA。
[0083] 采用ABI7500实时荧光定量PCR仪。
[0084] 将RNA反转录为cDNA的反应体系为RNA 10.0μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 1.0μL，RT Primer Mix 1.0μL，5×PrimeScript Buffer 2 4.0μL，RNase Free dH2O 4.0μL；反应条件为37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。
[0085] 采用Primer Premier 5.0软件设计引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中，UGT72B21引物序列为(FP：CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG，RP：CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA)，内参基因用UBQ5，序列为(FP：ATAAAAGACCCAGCACCACATTC，RP：CCCTTGCCGACTACAACATCC)。
[0086] qRT‑PCR反应体系(20μL)为SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2×)10.0μL，PCR Forward Primer(10μM)0.8μL，PCR Reverse Primer(10μM)0.8μL，ROX Reference Dye of Dye II(50×)0.4μL，Template 2.0μL，dH2O 6.0μL。反应条件为95℃(30s)，接着进行40个cycles[95℃(5s)，95℃(34s)]。
[0087] qRT‑PCR检测结果显示，对比例3中，罗汉果UGT72B21基因的表达量为1，而实施例3中，罗汉果UGT72B21基因的表达量高达18.7，较对比例3提高了1770％，可见，实施例3可以显著促进罗汉果UGT72B21基因的高表达；HPLC检测结果显示，对比例3中，罗汉果甜苷V含量为0.80％，而实施例3中，罗汉果甜苷V含量高达2.96％，较对比例3提高了270％，可见，实施例3还可以显著促进罗汉果甜苷V产量的提高。
[0088] 实施例4
[0089] 一种促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法，包括以下步骤：
[0090] (1)罗汉果组培苗施加茉莉酸甲酯；用2％的乙醇水溶液(v/v)溶解茉莉酸甲酯，配制成10000μmol/L的母液，并用0.22μm的微孔滤膜灭菌，将灭菌后的茉莉酸甲酯母液添加到固体培养基中，至茉莉酸甲酯最终浓度为100μmol/L，灭菌并冷却至24‑26℃；固体培养基配比为MS+6‑BA1.5mg/L+IBA0.3mg/L+3.5g/L琼脂+30g/l蔗糖+1.0g/L活性炭。将罗汉果组培苗接种在含有茉莉酸甲酯的固体培养基中，置于相对湿度64％、光照强度1400lux，光照时间8h/d，温度24℃条件下培养30d。
[0091] (2)栽培罗汉果施加茉莉酸甲酯；用少量乙醇助溶，将茉莉酸甲酯原液配成300μmol/L的溶液，置于冰箱中降温，使茉莉酸甲酯的温度降至4～10℃，再喷洒于授粉后23d的罗汉果表面，至表面滴水为止，早、中、晚各喷洒一次，连续喷施5d。，同时，还采用注射的方式将茉莉酸甲酯注射入罗汉果植株的主茎中，注射量为5～16ml，注射的速率为4～8ml/h。
[0092] 同时设置对比例4
[0093] 1)将罗汉果组培苗接种于不含有茉莉酸甲酯的固体培养基中培养；
[0094] 2)不对罗汉果植株喷洒和注射茉莉酸甲酯；其他条件与实施例4一致。
[0095] (3)qRT‑PCR检测UGT72B21基因的表达。
[0096] 采集果实，挑取果肉，切成2‑4mm小块并分别用锡箔纸包好，立即置于液氮中速冻，保存于‑80℃备用。
[0097] 采用改良Trizol法提取罗汉果果实总RNA。
[0098] 采用ABI7500实时荧光定量PCR仪。
[0099] 将RNA反转录为cDNA的反应体系为RNA 10.0μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 1.0μL，RT Primer Mix 1.0μL，5×PrimeScript Buffer 24.0μL，RNase Free dH2O 4.0μL；
反应条件为37℃(15min)→85℃(5s)→4℃。
[0100] 采用Primer Premier 5.0软件设计引物，由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。其中，UGT72B21引物序列为(FP：CGCCATATGCACCACCACCACCACCACATGGAAGCTACGCAGAGAGACG，RP：CCCTCGAGTTAAGACTCAAGAAATGCAAACTTA)，内参基因用UBQ5，序列为(FP：ATAAAAGACCCAGCACCACATTC，RP：CCCTTGCCGACTACAACATCC)。
[0101] qRT‑PCR反应体系(20μL)为SYBR Premix Ex Taq II(Tli RNaseH Plus)(2×)10.0μL，PCR Forward Primer(10μM)0.8μL，PCR Reverse Primer(10μM)0.8μL，ROX Reference Dye of Dye II(50×)0.4μL，Template 2.0μL，dH2O 6.0μL。反应条件为95℃(30s)，接着进行40个cycles[95℃(5s)，95℃(34s)]。
[0102] qRT‑PCR检测结果显示，对比例4中，罗汉果UGT72B21基因的表达量为1，而实施例4中，罗汉果UGT72B21基因的表达量高达20.33，较对比例4提高了1933％，可见，实施例4可以显著促进罗汉果UGT72B21基因的高表达；HPLC检测结果显示，对比例4中，罗汉果甜苷V含量为0.80％，而实施例4中，罗汉果甜苷V含量高达3.07％，较对比例4提高了283.75％，可见，实施例4还可以显著促进罗汉果甜苷V产量的提高。
[0103] 这里说明的模块数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的促进罗汉果UGT72B21基因表达的方法的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
[0104] 尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
