[0028] 以下通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步解释说明。
[0029] 实施例1：
[0030] 本实施例的检测四环素用适配体传感器的制备方法，包括以下步骤：
[0031] (1)适配体试剂的制备(简称适体)
[0032] 以39‑聚硫醇化TET结合适配体作为探针，序列为(5’‑SH‑CCC CCG GCA GGC CAC GGC TTG GGT TGG TCC CAC TGC GCG‑3’)，光密度为13.7，高效液相色谱纯化；然后使用水将寡核苷酸稀释后，与39‑聚硫醇化TET结合适配体混合作为储备溶液保存在冰箱中(‑20℃)；另外，冰箱的温度可以在‑10～‑30℃之间任意选取。
[0033] 为了打破适配体的二硫键，在上述储备溶液中加入体积比为1：5的DTT。在室温下静置保存15分钟；
[0034] 将保存溶液混合几秒钟后，将乙酸乙酯与等体积的保存溶液混合，以去除DTT；然后，3000rpm离心30s，去除上层，得到适配体试剂。其中，离心转速为1000～4000rpm，时间为10～60s；离心过程重复三次。
[0035] (2)检测四环素用适配体传感器的制备
[0036] 电化学测量为传统的三电极系统，包括：PGE电极作为工作电极，Ag/AgCl作为参考电极，以及铂丝作为对电极，应用于电化学测量。
[0037] 将带有0.1M KCl溶液的5.0mM Fe(CN)64‑溶液用作CV和EIS测量的氧化还原探针。
[0038] 如图1所示，PGE电极在NaOH溶液中具有活性，将其在1M NaOH溶液中从0～+1.5V扫描，扫描速率为40mV/s，扫描周期为10个周期，得到改良的PGE电极。
[0039] 为了在处理过的PGE表面上固定MNP，在室温下将工作电极置于MNP悬液中(60min)，并在‑0.20～+0.70V下进行CV扫描，10个循环，得到MNP/PGE电极；
[0040] 然后，用电晕电化学方法将GNP固定在MNP/PGE电极表面。为此，在3.0mM HAuCl4·3H2O溶液中，以5mV/s的扫描速率从‑0.50～+1.50V进行CV扫描；然后，将电极浸入到0.1M KNO3中，并在‑0.50～+1.50V的电势下运行CV，循环数为10，得到GNP/MNP/PGE电极。
[0041] 硫代适配体在GNP/MNP/PGE上自组装：将GNP/MNP/PGE电极浸泡在适配体试剂中，在室温下固定适配体，然后用去离子水缓慢洗涤，以消除电极表面的无限适配体链，并在室温下干燥，得到适配体传感器。
[0042] 本实施例的适配体传感器的应用，具体如下：
[0043] (1)为了评估适配体传感器的性能，选择了四个牛奶样品，包括牛、绵羊、山羊和水牛的牛奶，并将其用作真实样品。
[0044] (2)将适配体传感器浸入TET溶液中以进行TET检测，然后将其用去离子水洗涤以除去未吸附的抗生素。其中，浸入时间为60～120分钟。
[0045] (3)在具有KCl溶液的Fe(CN)64‑中运行电化学阻抗谱(EIS)，将适配体传感器的Rct4‑
值用作信号。其中，KCl溶液的浓度为0.05～0.2M，Fe(CN)6 溶液的浓度为2.0～7.0mM。
[0046] (4)为了研究适配体传感器的适用性，制备了各种浓度水平的TET。其中，TET浓度为1.0pM至1.0μM。
[0047] (5)为了绘制使用ΔRct对TET的不同对数浓度绘制的校准曲线，使用了EIS信号。所有实验至少进行三个重复。
[0048] (6)检测适配体传感器在各种牛奶样品中的TET检测。在样品测试之前，首先使用磷酸盐缓冲溶液稀释每个样品，并离心混合。其中，样品与磷酸盐缓冲溶液稀释的体积比为1：10，样品重量为0.5～3.0g，离心转速为9000～12000rpm，混合时间为10～40s。
[0049] (7)将溶液离心以去除蛋白质和脂肪，为了进样不同水平的TET并研究真实样品中的适配体性能，中间层被保存为纯牛奶。其中，离心转速为20000～28000rpm，离心时间为10～60分钟。
[0050] (8)将适配体传感器浸入牛奶溶液中以进行TET检测。
[0051] 具体地，本实施例的适配体传感器用于检测牛奶样品中的TET，具体如下：
[0052] 将适配体传感器浸入TET溶液中90分钟以进行TET检测；然后用去离子水洗涤以除4‑
去未吸附的抗生素；之后，在具有0.1M KCl溶液的5.0mM Fe(CN)6 中运行EIS；将适配体传感器的Rct值用作信号；为了研究适配体传感器的适用性，制备了1.0pM至1.0μM的各种浓度水平的TET。为了绘制使用ΔRct对TET的不同对数浓度绘制的校准曲线，使用了EIS信号。
[0053] 所有实验至少进行三个重复。
[0054] 适配体传感器检测牛奶样品中的TET。
[0055] 在样品测试之前，首先使用磷酸盐缓冲溶液以体积比1：10的比例稀释2.0g的牛奶样品，并以10800rpm的转速混合25s；
[0056] 将混合后的溶液以24000rpm离心30分钟以去除蛋白质和脂肪。
[0057] 为了研究不同水平的TET并研究真实样品中的适配体性能，中间层被保存为纯牛奶。将适配体传感器浸入牛奶溶液中以进行TET检测。
[0058] 本实施例还将适配体传感器应用于绵羊奶、山羊奶和水牛奶中的TET检测，步骤同上，具体数据如表1所示，回收率均在94％至103％的范围内，在适配体传感器的可接受范围内。
[0059] 表1适配体传感器在不同奶样品中TET的检测回收率和偏差
[0060]
[0061] 本实施例通过EIS方法，可实现0.03pM TET的低LOD。提出的适配体传感器具有可接受的重现性、稳定性和良好的选择性。
[0062] 作为上述实施例及其替代方案，Fe(CN)64‑还可以为Fe(CN)63‑。
[0063] 作为上述实施例及其替代方案，储备溶液与DTT的混合静置时间还可以为10分钟、20分钟、25分钟、30分钟等。
[0064] 作为上述实施例及其替代方案，KCl溶液的浓度还可以为0.05M、0.15M、0.2M等，Fe4‑
(CN)6 溶液的浓度还可以为2.0mM、3.0mM、6.0mM、7.0mM等。
[0065] 作为上述实施例及其替代方案，NaOH溶液对应的CV扫描参数中，NaOH溶液的浓度还可以为0.5M、1.5M、2M等，CV扫描的电势从0～+1.5V，扫描速率还可以为10mV/s、30mV/s、50mV/s、60mV/s等。
[0066] 作为上述实施例及其替代方案，工作电极置于磁性纳米粒子悬浮液中的目标时长还可以为20分钟、40分钟、50分钟、80分钟等。
[0067] 作为上述实施例及其替代方案，HAuCl4·3H2O溶液对应的CV扫描参数中，HAuCl4·3H2O溶液的浓度还可以为1M、2.5M、5M等，扫描速率还可以为1mV/s、3mV/s、6mV/s、8mV/s等。
[0068] 作为上述实施例及其替代方案，KNO3溶液的浓度还可以为0.05M、0.15M、0.2M等。
[0069] 以上所述仅是对本发明的优选实施例及原理进行了详细说明，对本领域的普通技术人员而言，依据本发明提供的思想，在具体实施方式上会有改变之处，而这些改变也应视为本发明的保护范围。
