[0020] 下面通过实施例对本发明方案作进一步说明:
[0021] 实施例1:
[0022] 一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方,该饵料配方中含有海洋红酵母母液,海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。海洋酵母蛋白含量高,一般为细胞干重的30~50%,且含有贝类、甲壳类所需的10种必须氨基酸,还含有生长中产生的消化酶类、维生素、矿物质、促生长因子以及酵母多糖,这些成分能提高浮游生物的消化吸收率,增加其对饵料的利用率,还能刺激机体免疫应答,提高其免疫抗病能力,海洋红酵母还可以作为有机体的腐生菌,通过分泌消化酶类物质,对水体中的有机质进行腐化,达到净化水质、改善养殖环境的功能。
[0023] 海洋红酵母培养母液的制备步骤如下:
[0024] 1)活化培养:将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上,在28℃的条件下培养45h后,即可得活化菌种,备用,菌种的保存通常是在低温或冷冻的条件下,低温保存的菌种处于休眠或活跃度较低的状态,因此使用前就得先进行活化操作,才能获得活力旺盛的、接种数量足够的菌种进行扩大培养;
[0025] 2)扩繁培养:将活化菌种接种到液体培养基上,在温度为28℃、转速为150r/min的条件下培养45h,得到一级种子,然后将一级种子按8%的接种量接种到液体培养基上,在温度为28℃、转速为150r/min的条件下培养24h,培养过程中将无菌空气通入培养基进行深层3
充气,通气量为150m/h,可得到二级种子,备用,进行菌种种子的多级培养可以获得更高的菌种底物浓度,使微生物更快的生长,而且也使菌种逐步接近和适应发酵培养的培养条件,便于菌种在发酵罐中的生长,有效减少生产成本;
[0026] 3)发酵培养:将二级种子按8%的接种量接种到发酵罐中,在温度为28℃、搅拌速率为150r/min的条件下培养36h,罐压为0.05MPa,并将无菌空气通入液体培养基进行深层3
充气,通气量为150m /h,期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基,发酵完成即得海洋红酵母母液,海洋红酵母为椭圆形的红色单细胞,约为4~6μm,悬浮性好,在海水中分散均匀、不易沉淀,营养全面,适口性好,富含虾青素、葡聚糖和甘露寡糖等活性成分,安全无毒,能显著提高水产动物幼苗存活率,提高饲料利用率,增强动物体免疫力及肉质品质,并可减少抗生素用量,还能净化水体,不污染水体,是幼体培育中最佳的活性饵料。
[0027] 海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料:葡萄糖4份、蛋白胨3份、酵母粉2份、硫酸镁0.8份、磷酸二氢钾1.0份、洁净海水55份、透明质酸0.07份、β‑环糊精0.13份。根据海洋酵母的生长繁殖特性,其培养基必须含有碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等,上述透明质酸利用自身带有的负电荷和特殊的螺旋柱状结构,与培养基中的其他成分之间具有较强亲和力,待接种后能快速填充在菌种与培养基之间,并稳定菌种与培养基之间的结构,破坏掉发酵液中分子之间的黏度,使得菌种能更迅速地溶于培养基中,提高菌种的分散度,进而加快菌种的生长速率,而β‑环糊精则将菌种生长过程中产生的疏水性的代谢产物如β‑胡萝卜素等包裹在其内部疏水性空腔里,并利用自身筒状结构外侧羟基的亲水性,使得疏水性代谢产物快速分散于水中,从而减小了菌种周围的产物浓度,降低了产物对菌种生长的抑制作用,使得菌种生长活性增长,有效增加了菌种的生长繁殖的数量和浓度,并使菌种的代谢产物也增加,进而使得饵料的营养强化效果有进一步增益。
[0028] 饵料配方中含有的原料及其重量份如下:小球藻母液1份、球等鞭金藻母液3份、三角褐指藻母液12份、亚心形扁藻母液3份、海洋红酵母母液1份。所制饵料营养丰富全面,能满足太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的需要,且适口性好,诱食性优良,海洋红酵母的加入避免了藻类的营养不足和营养缺乏,使得无节幼体的生长加快,兼顾浮游动物的消化生理和营养生理,还能够提高浮游动物的免疫力和抗应激能力,提高其对病害的抵抗力,促进浮游动物的生长发育和新陈代谢,净化水质的效果显著而持久,从而提高浮游动物在无节幼体期的营养强化效果和成活率。
[0029] 海洋红酵母母液浓度为4.5×108cells/ml,小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐8
指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为1.5×10 cells/ml。微藻中丰富而均衡的营养成分(蛋白、脂肪酸、碳水化合物)和各种生物活性物质(维生素、甾醇等),可满足浮游动物在幼体期正常生长发育的营养需求,合理利用混合微藻比单一微藻效果更好,鲜活的微藻比非活性微藻饵料更适于幼体生长,具有促进幼体生长发育、提高生长速度及体长和体重等各项性状指标、提高免疫力等综合作用。
[0030] 实施例2:
[0031] 一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方,该饵料配方中含有海洋红酵母母液,海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。
[0032] 海洋红酵母培养母液的制备步骤如下:
[0033] 1)活化培养:将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上,在33℃的条件下培养50h后,即可得活化菌种,备用;
[0034] 2)扩繁培养:将活化菌种接种到液体培养基上,在温度为33℃、转速为180r/min的条件下培养50h,得到一级种子,然后将一级种子按11%的接种量接种到液体培养基上,在温度为33℃、转速为180r/min的条件下培养28h,培养过程中将无菌空气通入培养基进行深3
层充气,通气量为200m/h,可得到二级种子,备用;
[0035] 3)发酵培养:将二级种子按11%的接种量接种到发酵罐中,在温度为33℃、搅拌速率为180r/min的条件下培养42h,罐压为0.07MPa,并将无菌空气通入液体培养基进行深层3
充气,通气量为200m /h,期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基,发酵完成即得海洋红酵母母液。
[0036] 海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料:葡萄糖6份、蛋白胨4份、酵母粉3份、硫酸镁1.0份、磷酸二氢钾1.2份、洁净海水58份、透明质酸0.09份、β‑环糊精0.15份。
[0037] 饵料配方中含有的原料及其重量份如下:小球藻母液2份、球等鞭金藻母液5份、三角褐指藻母液16份、亚心形扁藻母液5份、海洋红酵母母液3份。
[0038] 上述海洋红酵母母液浓度为5.5×108cells/ml,小球藻母液、球等鞭金藻母液、三8
角褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为2×10cells/ml。
[0039] 实施例3:
[0040] 一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方,该饵料配方中含有海洋红酵母母液,海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。
[0041] 海洋红酵母培养母液的制备步骤如下:
[0042] 1)活化培养:将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上,在30℃的条件下培养48h后,即可得活化菌种,备用;
[0043] 2)扩繁培养:将活化菌种接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h,得到一级种子,然后将一级种子按10%的接种量接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h,培养过程中将无菌空气通入培养基进行深3
层充气,通气量为180m/h,可得到二级种子,备用;
[0044] 3)发酵培养:将二级种子按10%的接种量接种到发酵罐中,在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h,罐压为0.08MPa,并将无菌空气通入液体培养基进行深层3
充气,通气量为180m /h,期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基,发酵完成即得海洋红酵母母液。
[0045] 海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料:葡萄糖5份、蛋白胨5份、酵母粉2份、硫酸镁1.1份、磷酸二氢钾1.4份、洁净海水60份、透明质酸0.08份、β‑环糊精0.16份。
[0046] 饵料配方中含有的原料及其重量份如下:小球藻母液1份、球等鞭金藻母液6份、三角褐指藻母液15份、亚心形扁藻母液3份、海洋红酵母母液1份。
[0047] 上述海洋红酵母母液浓度为5×108cells/ml,小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角8
褐指藻母液、亚心形扁藻母液的浓度均为1×10cells/ml。
[0048] 实施例4:
[0049] 一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方,该饵料配方中含有海洋红酵母母液,海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。
[0050] 海洋红酵母培养母液的制备步骤如下:
[0051] 1)活化培养:将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上,在30℃的条件下培养48h后,即可得活化菌种,备用;
[0052] 2)扩繁培养:将活化菌种接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h,得到一级种子,然后将一级种子按10%的接种量接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h,培养过程中将无菌空气通入培养基进行深3
层充气,通气量为180m/h,可得到二级种子,备用;
[0053] 3)发酵培养:将二级种子按10%的接种量接种到发酵罐中,在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h,罐压为0.08MPa,并将无菌空气通入液体培养基进行深层3
充气,通气量为180m /h,期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基,发酵完成即得海洋红酵母母液,上述发酵24h后进行培养基补充时,还添加有占酵母粉重量分别为0.06%的油酸甘油酯和0.07%的丁酸钠,此时菌种生长接近稳定期,加入油酸甘油酯和丁酸钠可以利用官能团的电子效应,以非离子的形态与发酵液中的多种含有正电荷的物质相粘合,降低了因菌种表面的负电荷而吸附在其周围的正离子浓度,破坏菌种表面形成的双电层结构,使得发酵液的粘度降低,富集的代谢产物在充气的辅助下,能在新添加的培养基中进一步扩散,从而降低发酵体系中二氧化碳、泡沫和代谢产物富集等对菌种生长的抑制作用,增加体系的稳定性和物质相容性,进而延长菌种的生长期和稳定期,获得更具活性的菌种和更多的高活性代谢产物,进而使饵料中的营养物质更加富集,达到强化增益效果。
[0054] 实施例5:
[0055] 一种用于太平洋纺锤水蚤无节幼体营养强化的饵料配方,该饵料配方中含有海洋红酵母母液,海洋红酵母母液是由海洋红酵母菌经活化培养、扩繁培养和发酵培养制得的。
[0056] 海洋红酵母培养母液的制备步骤如下:
[0057] 1)活化培养:将冷藏中的菌种接种在斜面培养基上,在30℃的条件下培养48h后,即可得活化菌种,备用;
[0058] 2)扩繁培养:将活化菌种接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养48h,得到一级种子,然后将一级种子按10%的接种量接种到液体培养基上,在温度为30℃、转速为200r/min的条件下培养30h,培养过程中将无菌空气通入培养基进行深3
层充气,通气量为180m/h,可得到二级种子,备用;
[0059] 3)发酵培养:将二级种子按10%的接种量接种到发酵罐中,在温度为30℃、搅拌速率为200r/min的条件下培养48h,罐压为0.08MPa,并将无菌空气通入液体培养基进行深层3
充气,通气量为180m /h,期间发别在发酵开始12h和24h后补加液体培养基,发酵完成即得海洋红酵母母液。
[0060] 海洋红酵母母液制备所用培养基中包含以下重量份的原料:葡萄糖5份、蛋白胨5份、酵母粉2份、硫酸镁1.1份、磷酸二氢钾1.4份、洁净海水60份。
[0061] 所制饵料配方与实施例3相同,以此培养浮游幼虫。
[0062] 实施例6:
[0063] 太平洋纺锤水蚤无节幼体生长性能测试
[0064] 统一选取刚孵化出的无节幼体,分别随机放置在6个培育池中,每个培育池中有1000重量份含浮游幼虫的养殖海水,初始投放于养殖海水中的太平洋纺锤水蚤无节幼体的密度为100个/ml海水。在培育期间,各培育池中水温、盐度保持一致,每日投饵2次,将实施例1~5所制饵料分别投喂1~5号培育池作为试验组,将某市售海洋红酵母浓缩液与小球藻母液、球等鞭金藻母液、三角褐指藻母液和亚心形扁藻母液配制而成的饵料投喂6号培育池作为对照组,期间不施用抗生素,待无节幼体经饵料强化15d后,试验结束,统计实验结果如下。
[0065] 表1不同饵料配方对纺锤水蚤无节幼体生长性能的影响
[0066] 存活率% 种群密度培育池1 82.8 69
培育池2 83.1 68
培育池3 85.9 75
培育池4 85.6 75
培育池5 81.8 70
培育池6 80.3 65
[0067] 由试验结果可知,试验组中培育池3和4号的存活率和种群密度都优于其他组,也明显优于对照组,培育池3和4号的存活率平均比培育池5号高出4.8%,比对照组高出6.8%,而种群密度则平均比培育池5号高出7.8%,比对照组高出15.3%,说明实施例中所制饵料,尤其是实施例3和4所制饵料,使得培育池3和4号中的纺锤水蚤无节幼体在发育期间摄入的营养更充足全面,饵料的吸收消化也明显优于其他组,因此在无节幼体发育过程中,营养得到强化,最终使得其生长发育良好,存活率大大增加,种群密度明显优于对照组。
[0068] 本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知,在此不进行赘述。
[0069] 以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明,应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例,并不用于限制本发明,凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等,均应包含在本发明的保护范围之内。