[0038] 下面结合实施例对本发明进行详细说明，以使本领域技术人员更好地理解本发明，但本发明并不局限于以下实施例。
[0039] 实施例1
[0040] 集成化CoP纳米片阵列作为整体式类过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤：
[0041] 1)将商品化泡沫镍剪成1cm×1cm的正方形，先后用37％的盐酸浸泡30min和去离子水超声清洗10min，然后移至60℃恒温干燥箱中干燥，得到纯净的泡沫镍；
[0042] 2)将1.4055g硫酸钴和0.3g尿素溶解到30mL去离子水中，通过在室温下搅拌10min混合均匀；
[0043] 3)将处理好的泡沫镍(30片)与上述溶液置于水热反应釜中在80℃下反应12h，得到Co(OH)2纳米片阵列修饰的泡沫镍复合物；
[0044] 4)用去离子水将上述复合物淋洗干净后，将其置于60℃烘箱中烘干。将干燥的Co(OH)2/NF片(6片)和300mg次磷酸钠分别放入两个临近的瓷舟内(瓷舟置于管式炉中，且装有次磷酸钠的瓷舟放在气流上游位置)，在氮气气流中进行磷化，程序升温速率为2℃/min，在200℃下保持2h。反应后冷却至室温，取出即可得到CoP/NF整体式类过氧化物酶。
[0045] 整体式类过氧化物酶催化过氧化氢氧化其底物反应的应用实验：
[0046] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0047] 2)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液反应36min之内在652nm处的吸光度。
[0048] 实施例2
[0049] 集成化CoP纳米片阵列作为整体式类过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤：
[0050] 1)将商品化泡沫镍剪成1cm×1cm的正方形，先后用37％的盐酸浸泡30min和去离子水超声清洗10min，然后移至60℃恒温干燥箱中干燥，得到纯净的泡沫镍；
[0051] 2)将1.4055g硫酸钴和0.9g尿素溶解到60mL去离子水中，通过在室温下搅拌20min混合均匀；
[0052] 3)将处理好的泡沫镍(30片)与上述溶液置于水热反应釜中在150℃下反应24h，得到Co(OH)2纳米片阵列修饰的泡沫镍复合物；
[0053] 4)用去离子水将上述复合物淋洗干净后，将其置于60℃烘箱中烘干。将干燥的Co(OH)2/NF片(6片)和450mg次磷酸钠分别放入两个临近的瓷舟内(瓷舟置于管式炉中，且装有次磷酸钠的瓷舟放在气流上游位置)，在氮气气流中进行磷化，程序升温速率为2℃/min，在400℃下保持1h。反应后冷却至室温，取出即可得到CoP/NF整体式类过氧化物酶。
[0054] 整体式类过氧化物酶催化过氧化氢氧化其底物反应的应用实验：
[0055] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0056] 2)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液反应36min之内在652nm处的吸光度。
[0057] 实施例3
[0058] 集成化CoP纳米片阵列作为整体式类过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤：
[0059] 1)将商品化泡沫镍剪成1cm×1cm的正方形，先后用37％的盐酸浸泡30min和去离子水超声清洗10min，然后移至60℃恒温干燥箱中干燥，得到纯净的泡沫镍；
[0060] 2)将1.4055g硫酸钴和1.9g尿素溶解到100mL去离子水中，通过在室温下搅拌20min混合均匀；
[0061] 3)将处理好的泡沫镍(30片)与上述溶液置于水热反应釜中在120℃下反应48h，得到Co(OH)2纳米片阵列修饰的泡沫镍复合物；
[0062] 4)用去离子水将上述复合物淋洗干净后，将其置于60℃烘箱中烘干。将干燥的Co(OH)2/NF片(6片)和600mg次磷酸钠分别放入两个临近的瓷舟内(瓷舟置于管式炉中，且装有次磷酸钠的瓷舟放在气流上游位置)，在氮气气流中进行磷化，程序升温速率为2℃/min，在300℃下保持0.5h。反应后冷却至室温，取出即可得到CoP/NF整体式类过氧化物酶。
[0063] 整体式类过氧化物酶催化过氧化氢氧化其底物反应的应用实验：
[0064] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0065] 2)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液反应36min之内在652nm处的吸光度。
[0066] 实施例4
[0067] 集成化CoP纳米片阵列作为整体式类过氧化物酶的制备方法，包括如下步骤：
[0068] 1)将商品化泡沫镍剪成1cm×1cm的正方形，先后用37％的盐酸浸泡30min和去离子水超声清洗10min，然后移至60℃恒温干燥箱中干燥，得到纯净的泡沫镍；
[0069] 2)将1.4055g硫酸钴和2.1g尿素溶解到150mL去离子水中，通过在室温下搅拌30min混合均匀；
[0070] 3)将处理好的泡沫镍(30片)与上述溶液置于水热反应釜中在180℃下反应36h，得到Co(OH)2纳米片阵列修饰的泡沫镍复合物；
[0071] 4)用去离子水将上述复合物淋洗干净后，将其置于60℃烘箱中烘干。将干燥的Co(OH)2/NF片(6片)和800mg次磷酸钠分别放入两个临近的瓷舟内(瓷舟置于管式炉中，且装有次磷酸钠的瓷舟放在气流上游位置)，在氮气气流中进行磷化，程序升温速率为2℃/min，在500℃下保持0h。反应后冷却至室温，取出即可得到CoP/NF整体式类过氧化物酶。
[0072] 整体式类过氧化物酶催化过氧化氢氧化其底物反应的应用实验：
[0073] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0074] 2)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液反应36min之内在652nm处的吸光度。
[0075] 对以上四个实施例所得的紫外-可见光谱对比可得，实施例3制备的CoP/NF酶活性最好。
[0076] 实施例5
[0077] CoP/NF催化过氧化氢氧化其底物反应的实验
[0078] 1)体系一：取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；体系二：取2.95mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；体系三：取2.95mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB和1片CoP/NF(1cm×1cm)，然后将上述溶液混合均匀；体系四：取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB和0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液，然后将上述溶液混合均匀；
[0079] 2)将步骤1)中各体系所得混合液分别在30℃水浴中反应35min；
[0080] 3)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外-可见吸收光谱。
[0081] 实验结果如图1所示，图1的四条光谱是四个反应体系对应的紫外可见吸收光谱图，由图可见H2O2+CoP/NF、TMB+CoP/NF和H2O2+TMB三个体系几乎没有吸收峰，只有H2O2+TMB+CoP/NF体系有明显吸收峰且在TMB的特征峰652nm处峰形很好。
[0082] 实施例6
[0083] CoP/NF催化过氧化氢氧化其底物反应的条件优化试验
[0084] 实施例6A反应时间对利用CoP/NF催化过氧化氢氧化其底物反应的影响
[0085] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0086] 2)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液反应36min之内在652nm处的吸光度。
[0087] 结果如图2所示，从图2可以看出反应溶液在652nm处的吸光度随着反应时间的延长而增加。在本实验中，反应时间为35min时其吸光度已经达到饱和且满足检测的需要，故选用反应时间为35min作为最优条件。
[0088] 实施例6B CoP/NF催化过氧化氢氧化其底物反应对过氧化氢浓度的响应
[0089] 1)取2.9mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入TMB(0.13mM)、过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；在所述混合溶液中只改变加入的过氧化氢溶液的浓度(6mM、33mM、100mM、160mM、320mM、490mM或640mM)；
[0090] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应35min；
[0091] 3)用干净的镊子夹取出CoP/NF，停止反应；
[0092] 4)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液的紫外-可见吸收光谱。
[0093] 实验结果如图3所示，当过氧化氢浓度为490mM时混合溶液的吸光度最大，故选用490mM的过氧化氢溶液为最优条件。
[0094] 实施例7
[0095] 利用H2O2+TMB+CoP/NF体系比色测定尿酸的原理探索实验
[0096] 根据实施例3所选择的条件，利用CoP/NF催化过氧化氢氧化其底物反应，发明人探索了尿酸使显色底物褪色的现象，具体步骤如下：
[0097] 实施例7A
[0098] 1)取2.87mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0099] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应10min；
[0100] 3)用干净的镊子夹取出CoP/NF，停止反应；
[0101] 4)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液的紫外-可见吸收光谱；
[0102] 5)在步骤4)的混合溶液中加入0.03mL 5mM的尿酸并混合均匀；
[0103] 6)将步骤5)中所得混合液在30℃水浴中反应10min；
[0104] 7)用紫外-可见吸收分光光度计测定步骤6)的混合溶液的紫外-可见吸收光谱；
[0105] 实验结果如图4所示。从图4A可以看出，不加尿酸时体系显蓝色，而当显色反应的同时加入尿酸时，溶液的显色反应不明显，其原理如图4B所示。由此推测发生此现象的原因为：(1)羟基自由基与尿酸发生反应；(2)CoP/NF的活性被尿酸抑制；(3)氧化态的TMB被尿酸还原了。对此，做了以下实施例进一步验证。
[0106] 实施例7B
[0107] 1)取2.87mL 0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次向其中加入0.03mL 5mM的尿酸、0.05mL 8mM的TMB、0.05mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0108] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应10min；
[0109] 3)用紫外-可见吸收分光光度计测定步骤2)的混合溶液的紫外-可见吸收光谱。
[0110] 实验结果如图5所示。图5A中当显色反应停止后再加入尿酸，有色物质会褪色，而没有加入尿酸的体系反应相同的时间，其蓝色很明显，其原理如图5B所示。由此可证明，尿酸使氧化态的TMB褪色，导致加入尿酸的体系颜色比无尿酸的体系浅。
[0111] 实施例8
[0112] 利用H2O2+TMB+CoP/NF体系比色测定尿酸
[0113] 1)取2.32mL0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次加入480μL尿酸溶液、0.05mL8mM的TMB、0.15mL 9.8M的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；所述混合溶液中只改变加入尿酸磷酸缓冲溶液的浓度为1μM、2μM、5μM、10μM、20μM、30μM、50μM、75μM、100μM、150μM或200μM；
[0114] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应35min；
[0115] 3)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外吸收光谱。
[0116] 利用本发明的比色方法对于尿酸检测的结果如图6所示。其中,图6A说明随着尿酸浓度的增加，溶液的吸光度逐渐减小；由图6B可以看出,该方法对于尿酸的可检测范围为1μM到200μM，有优良的可视化检测效果(如该图插图所示)。
[0117] 实施例9
[0118] 利用H2O2+TMB+CoP/NF体系比色测定尿酸的选择性
[0119] 1)取2.32mL0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次加入0.8mM的尿酸(或0.8mM的抗坏血酸、或8mM的尿素、或8mM的甘油三酯、或8mM的胆固醇或8mM的葡萄糖)、0.13mM的TMB、490mM的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0120] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应35min；
[0121] 3)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外吸收光谱。
[0122] 结果如图7所示。图7是用H2O2+TMB+CoP/NF体系检测尿酸时其检测选择性的柱形图，柱形图从左到右依次为尿酸、抗坏血酸、尿素、甘油三酯、胆固醇和葡萄糖。从图7中可以看出代表尿酸的柱高要比其它高出许多，说明该传感器可以高选择性地完成尿酸的比色检测。
[0123] 实施例10
[0124] 利用H2O2+TMB+CoP/NF体系比色测定人血清中的尿酸
[0125] 1)取2.7mL0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次加入100μL的血清(分别来自三个不同样品)、0.13mM的TMB、490mM的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0126] 2)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应35min；
[0127] 3)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外吸收光谱。
[0128] 其测定结果如下表1所示：
[0129] 表1本方法对血清尿酸的检测结果与临床检测结果的对比
[0130]
[0131] 由上表可知，H2O2+TMB+CoP/NF体系对血清中尿酸的检测与临床检测结果相近。
[0132] 实施例11
[0133] 利用H2O2+TMB+CoP/NF体系比色测定人尿液中的尿酸的回收率实验
[0134] 1)将所得尿液样品用0.1M的磷酸盐缓冲液(pH为8.5)稀释2.67倍，待用；
[0135] 2)取2.7mL0.2M的醋酸盐缓冲液(pH为4)，依次加入100μL的步骤1)所得尿液(分别来自二个不同样品)、0.13mM的TMB、490mM的过氧化氢溶液和1片CoP/NF(0.5cm×0.5cm)，然后将上述溶液混合均匀；
[0136] 3)将步骤1)中所得混合液在30℃水浴中反应35min；
[0137] 4)用紫外-可见吸收分光光度计测定上述混合溶液紫外吸收光谱。
[0138] 其测定结果如下表2所示：
[0139] 表2本方法对尿液尿酸的检测结果
[0140]
[0141] 由上表可知，H2O2+TMB+CoP/NF体系对实际尿液样品中所含尿酸含量的变化响应灵敏。
[0142] 以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。
