实施方案
[0021] 以下结合附图实施例对本发明作进一步详细描述。
[0022] 具体实施例一
[0023] 拟除虫菊酯类农药降解菌株的筛选
[0024] 1、培养基和试剂
[0025] 营养培养基：蛋白胨5.0 g，磷酸高铁0.01 g，酵母膏1.0 g，过滤海水1000 mL，pH7.6-7.8，高压蒸汽灭菌（121℃，20 min）后制得；
[0026] 富集培养液：将氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯分别相应加入1. 5倍重量的乳化剂吐温-20，制备成相应的浓乳液，然后将各个浓乳液分别加入到营养培养基中，使氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯和联苯菊酯终浓度分别为100mg/L，得到富集培养液。
[0027] 2、菌株分离纯化
[0028] 海水样品采自宁波近岸海域，取500 mL海水无菌状态下过滤，富集后，加入到含有浓度为100 mg/L的氯氰菊酯、100 mg/L的溴氰菊酯、100 mg/L的氰戊菊酯、100 mg/L的氟氯氰菊酯、100 mg/L的联苯菊酯的富集培养液的250ml三角瓶中，在温度28℃、转速180 rpm的条件下，培养7 d，按10%体积接种量转移到新鲜的含氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯各100 mg/L的富集培养液中，同条件培养1周，取培养基发酵液进行平板划线分离、纯化，直到筛选得到单个菌落，将纯化后的各菌落分别接至富集培养液中振荡培养（25℃，180 rpm）7d，通过气相色谱-电子捕获器（GC-ECD）检测各富集培养液中拟除虫菊酯类农药残留量，最后筛选获得一株对上述5种拟除虫菊酯类农药具有高效降解能力的菌株，命名为HS-24。
[0029] 该菌株分类命名为噬甲基菌（Methylophaga sp.），菌株为HS-24株，保藏编号为CGMCC No.6046，于2012年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，该菌株的16S rRNA的Genbank登陆号为JX087925。
[0030] 菌株的生物学特征为革兰氏染色阴性，为杆菌，精氨酸双水解试验、赖氨酸脱羧酶试验、V-P反应、明胶液化试验阳性，β-半乳糖甙酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氨酶试验、尿素酶试验、吲哚试验、H2S反应均为阴性，不可以利用蔗糖。
[0031] 该菌株海水中生长，最适生长温度25-30℃，最适生长pH为7.0-7.8，在固体培养基上，菌落圆形、较薄，呈白色，半透明。
[0032] 具体实施例二
[0033] 拟除虫菊酯类农药降解菌株的鉴定
[0034] 将上述获得的菌株进行形态特征和分子生物学鉴定，该菌株的扫描电镜照片如图1所示。该菌株的主要生物学特征为：革兰氏染色阴性，为杆菌，精氨酸双水解试验、赖氨酸脱羧酶试验、V-P反应、明胶液化试验阳性，β-半乳糖甙酶、鸟氨酸脱羧酶、色氨酸脱氨酶试验、尿素酶试验、吲哚试验、H2S反应均为阴性，不可以利用蔗糖。该菌株海水中生长，
25-30℃，最适生长pH为7.0-7.8，在固体培养基上，菌落圆形、较薄，呈白色，半透明。该菌株经16S rRNA序列分析鉴定为与噬甲基菌（Methylophaga sp.）的相似性最高，达到98%。
[0035] 具体实施例三
[0036] 拟除虫菊酯类农药降解菌对海水中拟除虫菊酯类农药的降解效果及应用
[0037] 将分离、纯化后的菌株以菌量OD415nm=0.2接种到100 mL含氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯各100 mg/L的富集培养基（（配制方法如实施例一所示））的250 mL三角瓶中，以不接菌的富集培养基作对照，在28 ℃、180 rpm的恒温摇床上震荡培养
7 d。培养结束后，吸取1 mL培养液，加0.4 g NaCL，涡旋混匀，依次采用4 mL的正己烷与丙酮（体积比1:1）的混合溶液和2 mL的正己烷与丙酮的混合溶液萃取，合并两次萃取所得上清液，取3 mL上清液，加入0.4 g无水硫酸钠，氮气吹干后用1 mL异辛烷与丙酮的混合液（体积比1:1）溶解，用气相色谱检测，每个实验重复三次，通过考察降解率来判断该菌的降解能力。
[0038] 降解率计算公式：降解率（%）=（对照样品残留量-处理样品残留量）×100/对照样品残留量
[0039] 氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯的标准样品色谱图如图2所示，本发明菌株对浓度为100 mg/L的氯氰菊酯、溴氰菊酯、氰戊菊酯、氟氯氰菊酯、联苯菊酯混合拟除虫菊酯类农药的降解率分别为87.7%、84.6%、77.3%、75.5%和80.3%，表明建立的菌液中拟除虫菊酯类农药的检测方法具有较好的应用效果。
[0040] 实验结果表明该菌对海水中拟除虫菊酯类农药残留具有较好的降解能力，因此，该菌对环境中拟除虫菊酯类农药的降解，尤其是海水养殖环境污染的修复具有广泛的应用前景。
[0041] 上述实施例是对本发明的进一步详细说明，但本发明的保护范围不限于上述实施例，以权利要求书为准。
