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一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法 0 0

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申请进展

基本信息

申请人信息

代理人信息

摘要

法律状态

权利要求

说明书

专利申请流程有哪些步骤？

申请

申请号：指国家知识产权局受理一件专利申请时给予该专利申请的一个标示号码。唯一性原则。

申请日：提出专利申请之日。

2014-11-21

申请公布

申请公布指发明专利申请经初步审查合格后，自申请日（或优先权日）起18个月期满时的公布或根据申请人的请求提前进行的公布。

申请公布号：专利申请过程中，在尚未取得专利授权之前，国家专利局《专利公报》公开专利时的编号。

申请公布日：申请公开的日期，即在专利公报上予以公开的日期。

2015-02-25

授权

授权指对发明专利申请经实质审查没有发现驳回理由，授予发明专利权；或对实用新型或外观设计专利申请经初步审查没有发现驳回理由，授予实用新型专利权或外观设计专利权。

2016-07-06

预估到期

发明专利权的期限为二十年，实用新型专利权期限为十年，外观设计专利权期限为十五年，均自申请日起计算。专利届满后法律终止保护。

2034-11-21

基本信息

有效性	有效专利	专利类型	发明专利
申请号	CN201410674716.X	申请日	2014-11-21
公开/公告号	CN104304037B	公开/公告日	2016-07-06
授权日	2016-07-06	预估到期日	2034-11-21
申请年	2014年	公开/公告年	2016年
缴费截止日
分类号	A01H4/00	主分类号	A01H4/00
是否联合申请	独立申请	文献类型号	B
独权数量	1	从权数量	3
权利要求数量	4	非专利引证数量	3
引用专利数量	4	被引证专利数量	0
非专利引证	1、罗鸣等.流苏石斛组培快繁与炼苗移栽.《湖北农业科学》.2014,第53卷(第8期),第1930-1932页。.; 2、Ramnath Sharma, et al..Micropropagation of Dendrobium fimbriatum Hook.by green pod culture.《Journal of Plant Biology》.2005,第48卷(第2期),第253-257页。.; 3、黄勇.流苏石斛组织培养体系研究.《安徽农业科学》.2010,第38卷(第2期),第627-628页.;
引用专利	CN101213940A、CN103314858A、CN101889547A、US2009176227A1	被引证专利
专利权维持	5	专利申请国编码	CN
专利事件	转让	事务标签	公开、实质审查、授权、权利转移

申请人信息

申请人	广西中医药大学	第一申请人	广西中医药大学
专利权人	广西中医药大学	当前专利权人	嘉兴芸诗娇电子商务有限公司
发明人	霍丽妮、苏钛、陈睿、李培源、苏炜、马静	第一发明人	霍丽妮
地址	广西壮族自治区南宁市青秀区五合大道13号	邮编	530213
申请人数量	1	发明人数量	6
申请人所在省	广西壮族自治区	申请人所在市	广西壮族自治区南宁市

代理人信息

代理机构

专利代理机构是经省专利管理局审核，国家知识产权局批准设立，可以接受委托人的委托，在委托权限范围内以委托人的名义办理专利申请或其他专利事务的服务机构。

北京远大卓悦知识产权代理事务所

代理人

专利代理师是代理他人进行专利申请和办理其他专利事务，取得一定资格的人。

靳浩

摘要

本发明公开了一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，将流苏石斛的种子播种于诱导培养基中诱导发芽，然后将流苏石斛小芽转先后移至继代培养基、生根培养基中继续培养，得到流苏石斛生根组培苗，即可移栽至大棚中进行炼苗。本发明的组织培养方法简便，步骤简单，操作方便，所得流苏石斛生根组培苗植株健壮，生长能力强，适于工厂化生产。

摘要附图
说明书附图：[0075]

法律状态

序号	法律状态公告日	法律状态	法律状态信息
1	2020-08-18	专利权的转移	登记生效日: 2020.07.29 专利权人由浙江麦知网络科技有限公司变更为嘉兴芸诗娇电子商务有限公司地址由314500 浙江省嘉兴市桐乡市桐乡经济开发区发展大道133号3幢503室变更为314500 浙江省嘉兴市桐乡市崇福镇南门工农路1号XC1001-3号
2	2016-07-06	授权
3	2015-02-25	实质审查的生效	IPC(主分类): A01H 4/00 专利申请号: 201410674716.X 申请日: 2014.11.21
4	2015-01-28	公开

权利要求

权利要求书是申请文件最核心的部分，是申请人向国家申请保护他的发明创造及划定保护范围的文件。

1.一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法包括以下步骤：
步骤一、将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，培养7-15天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-
5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为5.6-6.0；
步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，培养30-40天，获得流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.6-6.0；
步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养40-50天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉，0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及
0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.2；
步骤四、将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩，待流苏石斛小苗生长稳定，移栽至大棚。

2.如权利要求1所述流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤一所述流苏石斛种子的预处理为，先将流苏石斛硕果用80-85％乙醇溶液浸泡20-40秒，再用升汞消毒10-20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子。

3.如权利要求1所述流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤四中将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床之前，先将流苏石斛生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，再移栽至苗床上。

4.如权利要求1所述流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤一至步骤三中，流苏石斛于培养基中的培养条件均为：培养温度为28-32℃，光照强度为2500-
3000lux，光照时间为13-15h/d。

说明书

技术领域

[0001] 本发明涉及植物快速繁殖方法，特别是一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法。

背景技术

[0002] 石斛为兰科植物金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.、铁皮石斛Dendrobium candidum Wall.ex Lindl.或马鞭石斛Dendrobium fimbriatum Hook.var.oculatum Hook.及其近似种的新鲜或干燥茎。在我国传统医学中，石斛为常用珍贵药材，始载于《神农本草经》，列为上品。

[0003] 流苏石斛(Dendrobium fimbriatum Hook.var.oculatum Hook.)系兰科石斛属植物，茎粗壮，斜立或下垂，质地硬，圆柱形或有时基部上方稍呈纺锤形，叶二列，革质，长圆形或长圆状披针形，总状花序长5～15厘米，疏生6～12朵花，花金黄色，质地薄，开展，稍具香气，花期4～6月，产广西南部至西北部(天峨、凌云、田林、龙州、天等、隆林、东兰、武鸣、靖西、南丹)、贵州南部至西南部(罗甸、兴义、独山)、云南东南部至西南部(西畴、蒙自、石屏、富民、思茅、勐海、沧源、镇康)，海拔600～1700米，生于密林中树干上或山谷阴湿岩石上，分布于印度、尼泊尔、锡金、不丹、缅甸、泰国、越南。《中国药典》称马鞭石斛，具有益胃生津，生津止渴。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。现代研究表明，流苏石斛中发现的毛兰素、毛兰菲、鼓槌菲等化学成分具有抗肿瘤作用。

[0004] 由于兰科植物种子在野外很难发芽，自然繁殖主要是靠分株繁殖，繁殖率地下，自然更新困难，随着社会的发展，人民对美的追求以及长期以来药用的需求，造成野生资源的严重破坏，现野外已经很少能见到美丽的流苏石斛。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，直接取流苏石斛的种子进行组织培养，有效缩短流苏石斛的培养周期，减小因多次继代培养造成的变异概率，采用组织培养所得的流苏石斛组培苗，植株健壮，生长能力强，适于工厂化生产，以解决流苏石斛人工种植的种苗问题。

[0006] 本发明提供的技术方案是：

[0007] 一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

[0008] 优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

[0009] 步骤一、将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，培养7-15天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为5.6-6.0；

[0010] 步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，培养30-40天，获得流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、
25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.6-6.0；

[0011] 步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，培养30-40天后，转移至自然光下照射培养40-50天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉，0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.2；

[0012] 步骤四、将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，待流苏石斛小苗生长稳定，即可移栽至大棚。

[0013] 优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤一所述流苏石斛种子的预处理为，先将流苏石斛硕果用80-85％乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子。

[0014] 优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四所述的苗床基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩。

[0015] 优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，步骤四中将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床之前，先将流苏石斛生根组培苗根部的培养基清洗干净，晾干水汽，在移栽至苗床上。

[0016] 优选的是，所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，所述步骤一至步骤三中，流苏石斛于培养基中的培养条件均为：培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d。

[0017] 本发明的有益效果是：本发明采用现代生物技术，克隆流苏石斛，规模化生产种苗，解决流苏石斛人工种植的种苗问题，为社会的发展以及流苏野生植物资源的保护做出贡献。

[0018] 本发明中流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，种子诱导的发芽率达96％，经过继代培养后的成苗率95％，转移至生根培养基中，流苏石斛的生根率为90％，最后移入大棚炼苗的成活率为94％，大大提高了流苏石斛的组织培养效率；尽管嫩芽和种子都可以作为组培的原始材料，但是石斛嫩芽是从外面的植株上取的部分材料，由于一株石斛只有一个芽，用茎段也只能获得几个芽，每个芽采下来以后消毒灭菌，最后获得的无菌材料大概只有40％左右，然后利用无菌材料才能继续增殖、诱导原球茎、扩繁，要经过非常长的时间，一般需要经过10-20代才能获得足够多的材料，然而组培过程中继代代数越长，成本升高，玻璃化变异加大，因此此时的材料已经没有很大的价值，随着继代的增加，材料退化也是很严重的问题。本发明中使用流苏石斛的种子进行培养，种子发芽到最后出苗所需时间远远短于嫩芽继代，几乎是嫩芽的零头，这在很大程度上节约了资金，节约了能源，提高了竞争力，利用种子所需仅200多天可以出苗，而利用嫩芽做到出苗所需的时间将是1000多天，因此从市场角度考虑也远远优于嫩芽诱导苗。相对嫩芽而言组织培养而言，本发明的利用流苏石斛的种子作为组培材料成本低，推广容易，经济性好，技术先进，并且具有很高的市场价值，让利种植，有利于扩大推广，对石斛资源的保护提供了新的思路。

实施方案

[0019] 下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

[0020] 一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

[0021] 所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

[0022] 步骤一、先将流苏石斛硕果用80-85％乙醇溶液浸泡20-40秒，升汞消毒10-20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子，将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下培养7-15天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为5.6-6.0；其中，诱导培养基中吲哚乙酸为一种植物体内普遍存在的内源生长素，促进流苏石斛种子快速萌发小芽；蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境，同时在一定程度上还能减少微生物的污染，提高流苏石斛的无菌环境质量；采用的诱导培养基大大提高了流苏石斛的愈伤组织分化能力，使得流苏石斛小芽的出芽率高达92％。

[0023] 步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下培养30-40天，获得2-4cm高度整齐的流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、
2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.6-6.0；其中，继代培养基中，激动素为6-糠基腺嘌呤，是植物细胞分裂素，有效促进流苏石斛的细胞分裂；6-苄氨基嘌呤有效加快植物细胞生长，促进植物生长发育，诱导流苏石斛小芽的分化，促进侧芽萌发生长；萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根；蔗糖为能源物质，为植物组织培养提供碳源和能源，还能很好的维持培养基内的低渗环境；流苏石斛组培分化苗的成苗率为98％。

[0024] 步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为28-32℃，光照强度为2500-3000lux，光照时间为13-15h/d的条件下培养30-40天后，转移至自然光下照射培养40-50天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉，0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.8-6.2；其中，生根培养基中加入打碎的香蕉，促进流苏石斛组培分化苗快速生根，为流苏石斛组培分化苗提供所需营养物质，萘乙酸为广谱型植物生长调节剂，能有效促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根，蔗糖为能源物质，提供能量，活性炭的加入有助于吸附一些有害的代谢物质，同时活性炭使得生根培养基变黑，可模仿黑暗条件，有利于组培分化苗的生根；流苏石斛组培分化苗生根后放在自然光下照射，为组培分化苗提供与户外环境相似的培养环境，提高了流苏石斛组培分化苗在后期炼苗过程中的成活率。

[0025] 步骤四、将流苏石斛生根组培苗根部的培养基用清洗干净，晾干水汽，再将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，其中苗床上设置的基质为：20-30树皮、10-20杂木、20-30蛭石及10-15珍珠岩，培养30-40天，流苏石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。

[0026] 实施例1

[0027] 一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

[0028] 所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

[0029] 步骤一、先将流苏石斛硕果用80％乙醇溶液浸泡20秒，升汞消毒10分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子，将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，在培养温度为28℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下培养10天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入2.0mg/L吲哚乙酸、2.0mg/L萘乙酸、0.5mg/L噻苯隆、25g/L蔗糖及3.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为5.9；

[0030] 步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，在培养温度为28℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下培养40天，获得3cm高度整齐的流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.5mg/L激动素、2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L吲哚丙酸、0.5mg/L噻苯隆、40g/L蔗糖及4.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为5.9；

[0031] 步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为28℃，光照强度为2600lux，光照时间为15h/d的条件下培养35天后，转移至自然光下照射培养50天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入10％香蕉，1.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、3％蔗糖及0.2％活性炭，并调整生根培养基的pH值为5.9；

[0032] 步骤四、将流苏石斛生根组培苗根部的培养基用清洗干净，晾干水汽，再将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，其中苗床上设置的基质为：20g树皮、15g杂木、25g蛭石及15g珍珠岩，培养40天，流苏石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。

[0033] 实施例2

[0034] 一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

[0035] 所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

[0036] 步骤一、先将流苏石斛硕果用80％乙醇溶液浸泡30秒，升汞消毒20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子，将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下培养15天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入1.0mg/L吲哚乙酸、3.0mg/L萘乙酸、0.8mg/L噻苯隆、30g/L蔗糖及4.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为6.0；

[0037] 步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下培养30天，获得2-4cm高度整齐的流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入2.0mg/L激动素、4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、3.0mg/L萘乙酸、2.0mg/L吲哚丙酸、1.0mg/L噻苯隆、30g/L蔗糖及4.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为6.0；

[0038] 步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为30℃，光照强度为2800lux，光照时间为14h/d的条件下培养35天后，转移至自然光下照射培养45天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入15％香蕉，2.0mg/L萘乙酸、3.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2％蔗糖及0.5％活性炭，并调整生根培养基的pH值为6.0；

[0039] 步骤四、将流苏石斛生根组培苗根部的培养基用清洗干净，晾干水汽，再将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，其中苗床上设置的基质为：30g树皮、15g杂木、20g蛭石及10g珍珠岩，培养30天，流苏石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。

[0040] 实施例3

[0041] 一种流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，取流苏石斛种子作为材料进行离体诱导培养，获取流苏石斛的组织培养苗。

[0042] 所述的流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法中，包括以下步骤：

[0043] 步骤一、先将流苏石斛硕果用85％乙醇溶液浸泡40秒，升汞消毒20分钟，清洗干净后切开流苏石斛的硕果，得到预处理的流苏石斛种子，将预处理的流苏石斛种子播种于诱导培养基上，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下培养14天，得到流苏石斛小芽，其中，所述诱导培养基为：以MS-H为基本培养基，加入3.0mg/L吲哚乙酸、4.0mg/L萘乙酸、1.0mg/L噻苯隆、40g/L蔗糖及5.0g/L琼脂，并调整诱导培养基的pH值为6.0；

[0044] 步骤二、将流苏石斛小芽置于继代培养基中，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下培养38天，获得2-4cm高度整齐的流苏石斛组培分化苗，其中，所述继代培养基为：以MS为基本培养基，加入1.0mg/L激动素、2.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0mg/L萘乙酸、1.0mg/L吲哚丙酸、0.5mg/L噻苯隆、25g/L蔗糖及3.0g/L琼脂，并调整继代培养基的pH值为6.0；

[0045] 步骤三、将流苏石斛组培分化苗移栽至生根培养基中，在培养温度为32℃，光照强度为3000lux，光照时间为13h/d的条件下培养30天后，转移至自然光下照射培养40天，获得流苏石斛生根组培苗；其中，所述生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入20％香蕉，3.0mg/L萘乙酸、4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2％蔗糖及0.2％活性炭，并调整生根培养基的pH值为6.0；

[0046] 步骤四、将流苏石斛生根组培苗根部的培养基用清洗干净，晾干水汽，再将流苏石斛生根组培苗移栽至苗床上，其中苗床上设置的基质为：20g树皮、15g杂木、20g蛭石及10g珍珠岩，培养40天，流苏石斛生根组培苗生长稳定后即可移栽至大棚中，大棚栽培时要适当遮阴，控制遮阴度为75％，间隔浇水，温度为28℃，超过28℃要水帘降温，防止根腐病发生。

[0047] 试验比较

[0048] (1)组1为本发明所述流苏石斛种子组织培养快速繁殖方法，采用流苏石斛种子作为组培材料；培养基分别为：

[0049] 诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0050] 继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0051] 生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。

[0052] (2)组2为采用流苏石斛嫩芽作为组培材料，采用的培养基与组1相同；

[0053] (3)组3为采用流苏石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：

[0054] 诱导培养基为MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0055] 继代培养基为以MS为基本培养基，以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0056] 生根培养基：加入5-20％香蕉、0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。

[0057] (4)组4为采用流苏石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：

[0058] 诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0059] 继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0060] 生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-4.0mg/L萘乙酸、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。

[0061] (5)组5为采用流苏石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：

[0062] 诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0063] 继代培养基为：以MS为基本培养基，加入0.2.0-2.0mg/L激动素、2.0-4.0mg/L 6-苄氨基嘌呤、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0064] 生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、2.0-4.0mg/L6-苄氨基嘌呤、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。

[0065] (6)组6为采用流苏石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：

[0066] 诱导培养基以MS-H为基本培养基，加入0.5-3.0mg/L吲哚乙酸、1.0-5.0mg/L萘乙酸、0.1-1.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0067] 继代培养基为：以MS为基本培养基，加入1.0-4.0mg/L萘乙酸、0.5-3.0mg/L吲哚丙酸、0.1-2.0mg/L噻苯隆、25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

[0068] 生根培养基为：以1/2MS为基本培养基，加入5-20％香蕉、0.1-4.0mg/L萘乙酸、2-5％蔗糖及0.2-0.5％活性炭。

[0069] (7)组7为采用流苏石斛种子作为组培材料，采用的培养基相较于组1分别为：

[0070] 诱导培养基以MS-H为培养基，25-40g/L蔗糖及3.0-5.0g/L琼脂；

1插杆装置 2一种防狼放牧养殖护栏 3一种水产品养殖网箱 4一种花生自动种植装置 5一种用于绿化苗木的整形架 6一种农林农药喷洒装置 7一种便于调节的棉花用修剪装置 8一种畜牧业养殖用养殖场地面清洗装置 9一种橄榄种植使用的具有调节土壤PH值功能的松土装置 10一体式鱼竿支架