[0017] 下面结合实施例对本发明作详细的说明。
[0018] 实验材料：
[0019] 1.1
[0020] 铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)和斜生栅藻(Scenedesmus obliquus)由中国科学院水生生物研究所藻种库提供；采用BG-11培养基培养。
[0021] 新鲜大葱，购于芜湖市菜市场。
[0022] 无水甲醇、无水丙酮、无水石油醚和无水乙醇、烯丙硫醇、环戊硫醇均为分析纯。
[0023] BG-11培养基主要成分
[0024] NaNO3，1.5 g/L；K2HPO4∙ 3H2O，0.04 g/L；MgSO4 ∙7H2O，0.075 g/L；CaCl2 ∙ 2H2O，0.036 g/L；柠檬酸，0.006 g/L；柠檬酸铁铵，0.006 g/L；EDTA，0.001 g/L；Na2CO3，0.02 g/L；A5 solution，0.1 mL；
[0025] A5 solution配方：H3BO3，2.86 g/L；MnCl2∙4H2O，1.86 g/L；ZnSO4∙7H2O，0.22 g/L；Na2MoO4∙2H2O，0.39 g/L；CuSO4.∙5H2O，0.08 g/L；Co(NO3)2∙6H2O，0.05 g/L。
[0026] 1.2
[0027] 实验前用对铜绿微囊藻进行扩大培养。培养条件为：光照强度4000 lx，光暗比为12h:12h，温度(25±1)℃。每天摇动3~5次，使铜绿微囊藻细胞进入对数生长期。
[0028] 1.3 测定方法
[0029] 铜绿微囊藻密度用荧光分光光度计计数；大葱葱白成分分析使用岛津GC-MS QP2010plus气质联用仪。
[0030] 1.4 数据处理
[0031] 化感物质对藻类的抑制率(inhibition rate)公式为：
[0032] IR = (1-N/N0)×100%
[0033] 式中，IR—抑制率；N—加入浸提液组的荧光值；N0—对照组的荧光值。将大葱浸提液最终浓度与生长抑制率作一元线性回归，求出半效应浓度EC50(mL/L)。
[0034] 数据采用Excel 2010软件处理，各组间差异采用单因素方差分析(one-way ANOVA)，P<0.05表示有显著性差异，P<0.01表示有极显著差异。
[0035] 实施例1：
[0036] 取新鲜大葱葱白去皮、磨碎、按葱白与有机溶剂(无水甲醇、无水丙酮、无水石油醚、75%乙醇)的比例均为100g：400mL。浸提两天后过滤，收集滤液，经减压浓缩挥干有机溶剂，将粗提物置已恒重的烧杯中，挥干至恒重，得到葱白的无水甲醇粗提取物、葱白的无水丙酮粗提物、葱白的无水石油醚粗提物、葱白的乙醇粗提取物。
[0037] 实施例2：
[0038] 将葱白的无水丙酮粗提取物，用无水丙酮稀释至10%，装入滴液漏斗中，由滴液漏斗向层析柱（大孔树脂XAD1180）滴流，上样完全后，用蒸馏水洗柱，直至层析柱中流出的蒸馏水与95%乙醇（ml/ml）混合不产生混浊为止，再用2BV的丙酮进行洗脱，层析柱中洗脱液的洗脱速率恒定为 0.5BV/h，再经减压浓缩挥干无水丙酮，即可，得到葱白的无水丙酮纯提物。
[0039] 实施例3：
[0040] 将实施例1所制的四种葱白粗提物(葱白的无水甲醇粗提取物、葱白的无水丙酮粗提物、葱白的无水石油醚粗提物、葱白的乙醇粗提取物)分别溶解于二甲亚砜中(DMSO)，控制DMSO终浓度
[0041] 取对数生长期的铜绿微囊藻分别放入已灭菌的100mL锥形瓶中，藻细胞最终浓度5
为5.5×10 cells/mL，分别加入四种样品溶液溶液，使最终体积为50mL，最终浓度为0.1g/L。同时设不加粗提物的空白对照组(CK），每种处理组设3个平行，培养条件同1.2。每隔
24h进行荧光值的测定，连续测5天。
[0042] 其结果如表1、表2所示：
[0043] 表1 四种葱白的粗提物对铜绿微囊藻的抑制率(%)
[0044]
[0045] 表2 四种葱白的粗提物对铜绿微囊藻抑制的EC50
[0046]
[0047] 表1 显示的是在铜绿微囊藻起始密度相同条件下，葱白的无水丙酮粗提物在第四天抑制率达到了90.32%，第五天铜绿微囊藻几乎完全被杀死；浓度相同的葱白的无水甲醇粗提物、葱白的无水石油醚粗提物、葱白的75%乙醇粗提物在第五天的抑制率分别为81.66%、82.35%和87.28%。这说明，葱白的无水甲醇粗提物、葱白的无水石油醚粗提物、葱白的75%乙醇粗提物对铜绿微囊藻的抑制效果要差些。表2 显示的是四种葱白粗提物对铜绿微囊藻抑制的EC50值。结果表明，葱白的无水丙酮粗提物的EC50最小，为2.49g/L。葱白的无水甲醇粗提物、葱白的无水石油醚粗提物、葱白的75%乙醇粗提物的EC50相差不大，且均大于葱白的无水丙酮粗提物。再次证明葱白的无水丙酮粗提物抑藻活性最佳。
[0048] 实施例4：
[0049] 称实施例2所制的纯提物溶解于DMSO中，再加入BG-11培养基配成溶液，在无菌条件下通过0.22μm的微孔滤膜过滤以消除微生物，得到葱白的无水丙酮纯提物溶液。
[0050] 取对数生长期的铜绿微囊藻分别放入已灭菌的100mL锥形瓶中，藻细胞最终浓度5
为5.5×10 cells/mL，加入葱白的无水丙酮纯提物溶液，并使最终体积为50mL。锥形瓶中葱白的无水丙酮提物溶液最终浓度分别为 0.5g/L、1.0g/L、2.0g/L，同时设置不加提取液的空白对照组(CK)，每组设3个平行，培养条件同1.2。每隔24h进行荧光值的测定，连续测五天。
[0051] 其结果如表3、表4所示：
[0052] 表3 葱白的无水丙酮纯提物对铜绿微囊藻的抑制率(%)
[0053]
[0054] 表4 葱白的无水丙酮纯提物对对铜绿微囊藻抑制的EC50
[0055]
[0056] 表3 显示，随着时间的增加抑制率呈增大趋势，且具有浓度效应。在第四天，高剂量组的抑制率就达到了97.78%，在第五天铜绿微囊藻几乎完全被抑制；其他处理组在第五天的抑制率分别为：58.93%和80.57%。表4显示，随着浓度的增大，EC50值逐渐减小。表明纯化后的葱白的无水丙酮纯提物抑藻效果非常显著。
[0057] 实施例5
[0058] 对葱白的无水丙酮纯提物进行气质联用(GC-MS)分析。气相色谱条件为，进样口温度：260℃气化，流速：1.50mL/min，分流比：100:1，柱类型：RTX-5，30×0.25×0.25，升温程序：初始温度40℃，保持2min后，在10℃/min速度下加热至250℃，保持5min；质谱条件为，离子源温度：200℃，接口温度：250℃，检测器电压：0.81 kV，扫描间隔时间：0.5Sec，扫描荷质比：400-700aum，进样体积：1μL。应用NIST质谱数据库，分析质谱图，分析各组分物质。通过GC-MS分析鉴定出6种含量较高的化合物，主要为含硫化合物，分别为：烯丙硫醇、环戊硫醇 、苯并噻吩-2-羧酸 、3，4-二甲基噻吩 此外还有醚和酯。
[0059] 实施例6：
[0060] 将对数生长期的铜绿微囊藻藻液加入已灭菌的100 mL锥形瓶中，藻细胞的最终密5
度为3.0×10 cells/mL，并使体积最终保持为50mL。锥形瓶中烯丙硫醇、环戊硫醇单独以及两种醇混合(1:1)的最终浓度分别为0、0.01、0.03、0.09 、0.27和0.81g/L。其中，两种醇混合时每种醇的浓度均为单独时的一半，同时设只加藻液的空白对照组(CK)，每组设3个平行，各组置于1.2相同条件下培养，每隔24h进行荧光值的测定。
[0061] 其结果如表5、6、7、8、9、10所示：
[0062] 表5 烯丙硫醇对铜绿微囊藻的抑制率(%)
[0063]
[0064] 表6 环戊硫醇对铜绿微囊藻的抑制率(%)
[0065]
[0066] 表7 烯丙硫醇和环戊硫醇时对铜绿微囊藻的抑制率(%)
[0067]
[0068] 表8 烯丙硫醇对铜绿微囊藻抑制的EC50
[0069]
[0070] 表9 环戊硫醇对铜绿微囊藻抑制的EC50
[0071]
[0072] 表10 烯丙硫醇和换环戊硫醇联合时对铜绿微囊藻抑制的EC50
[0073]
[0074] 表5、6和7显示，单独和联合时对铜绿微囊藻的抑制率随着时间的延长，浓度的增大，均呈增大趋势。单独抑藻时，烯丙硫醇在第三天的抑制率最大达到90.51%，环戊硫醇在第四天的抑制率最大达到90.11%；联合抑藻在第三天的抑制率最大达到97.90%；单独和联
