[0021] 下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。
[0022] 在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。
[0023] 本发明的各实施例，以中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)提供的寄生曲霉菌(Aspergillus parasiticus)CGMCC NO.：3.0124，进行阐述。
[0024] 实施例1-4增菌培养基的配制
[0025] 一种用于寄生曲霉菌菌种的增菌培养基，将表1所示的各组份混合后，用盐酸和氢氧化钠溶液调节增菌培养基pH值为5.5-7.0。
[0026] 表1
[0027]
[0028]
[0029] 实施例5-8复合矿物盐的准备
[0030] 根据表2中的配比取硝酸钠、硫酸镁、氯化钾、磷酸氢二钾、硫酸锌、硫酸锰和五水硫酸亚铁，将上述矿物盐混合均匀，粉碎过80目分样筛后，再次混合后备用，得到增菌培养基和固体发酵培养基中所述的复合矿物盐。
[0031] 表2
[0032]
[0033] 现以实施例6的复合矿物盐配方和实施例2的增菌培养基配方为例，配制100g复合矿物盐和1L增菌培养基。
[0034] 复合矿物盐(100g):分别用分析天平称取45.0g硝酸钠、11.5g硫酸镁、13.0g氯化钾、20.0g磷酸氢二钾，6.0g硫酸锌，4.0g硫酸锰，0.5g五水硫酸亚铁于烧杯混合均匀，然后将全部混合矿物盐放入高速离心机，粉碎10min,全部样本通过80目分样筛后，再次混匀，放置在棕色瓶广口瓶中保留备用。
[0035] 增菌培养基(1L)：马铃薯洗净去皮，称取200g马铃薯切成小块，加800mL水煮沸20-30分钟，直至可被玻璃棒戳破，用4层纱布过滤至烧杯中，滤渣弃去，往烧杯中补水至
1000mL，再往烧杯中加入60g葡萄糖，15g酵母浸膏，5g复合矿物盐，加热，再加入15g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，使用5mol/L浓度的盐酸调节pH值于5.5-7.0范围内。pH调节完毕，装入容量为2L的锥形瓶中，盖上棉塞，在121-123℃的温度下，0.12MPa，灭菌20min。
[0036] 在生物安全柜中，往灭菌的40℃增菌培养基中加入0.5g/L氯霉素后，再倒置在已灭菌处理的直径10cm培养皿中，冷却后培养基即可凝固。然后，将增菌培养基放在37℃温箱培养24h，无菌生长者方可使用，增菌培养基制备完毕。
[0037] 用于寄生曲霉菌种保藏的斜面培养基的配制
[0038] 按照寄生曲霉增菌培养基配方表，配制所需菌种保藏培养基。将配制好的增菌培养基，在培养基60℃未凝固状态下加入0.5g/L氯霉素，倒置在灭菌的试管中，体积约为试管容量的1/3，倾斜试管，自然冷却，即菌种保藏的斜面培养基制备完毕。
[0039] 实施例9-12寄生曲霉固体发酵培养基的配制
[0040] 按照表3的配方，配制所需固体发酵培养基。
[0041] 表3
[0042]
[0043] 原料准备：将玉米糁和花生粕经粉碎，要求能过20目标准分样筛，但不可过40目标准分样筛，即粒度介于20-40目。
[0044] 现以实施例6的复合矿物盐配方和实施例10的组份为例，配制100g复合矿物盐和1L增菌培养基。
[0045] 复合矿物盐(100g):分别用分析天平称取45.0g硝酸钠、11.5g硫酸镁、13.0g氯化钾、20.0g磷酸氢二钾，6.0g硫酸锌，4.0g硫酸锰，0.5g五水硫酸亚铁于烧杯混合均匀，然后将全部混合矿物盐放入高速离心机，粉碎10min,全部样本通过80目分样筛后，再次混匀，放置在棕色瓶广口瓶中保留备用。
[0046] 固体发酵培养基(1kg)。称取500g玉米糁，389g花生粕，80g蔗糖，6g复合矿物盐，25g酵母浸膏，另量取100ml蒸馏水，将上述原料混合均匀，置于3000ml锥形瓶中，盖上棉塞，在121-123℃，0.12MPa，灭菌30min。在生物安全柜中，将已灭菌的固体培养基倒置在已灭菌的三角烧瓶中，平铺厚度为1cm，或装载量为60g/500ml三角瓶，盖上已灭菌的瓶塞。至此，寄生曲霉发酵固体培养基配制完毕。
[0047] 实施例13寄生曲霉的AFG1产毒发酵培养
[0048] 1、寄生曲霉菌种的增殖培养方法
[0049] 菌种复活：将安瓿瓶中保存的寄生曲霉冻干粉用0.5mL生理盐水溶解，然后用一次性无菌注射器吸取4mL溶解液，均匀点样于实施例2配制好的增菌培养基上，再用无菌玻璃棒将菌液涂抹分布均匀。将已接寄生曲霉的增菌培养基置于35℃恒温培养箱中培养46h，即可生长出大量的菌丝，达到试验要求，菌种复活完毕。
[0050] 采用实施例6复合矿物盐配方分别替代实施例1、3、4增菌培养基中复合矿物盐配方制得的增菌培养基，寄生曲霉复活所需时间分别为43h、54h和58h。
[0051] 同样条件下，使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例1增菌培养基中复合矿物盐配方，寄生曲霉复活所需时间分别为42h、47h和51h。
[0052] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例2增菌培养基中复合矿物盐配方，寄生曲霉复活所需时间分别为45h、44h和55h。
[0053] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例3增菌培养基中复合矿物盐配方，寄生曲霉复活所需时间分别为41h、46h和52h。
[0054] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例4增菌培养基种复合矿物盐配方，寄生曲霉复活所需时间分别为40h、43h和48h。
[0055] 2、寄生曲霉菌种保存：在生物安全柜中，使用无菌接种针，灭菌冷却后，挑取上述溶解的菌液，在寄生曲霉菌种保藏的斜面培养基上呈Z字型划线，盖上已灭菌的透气棉塞，然后置于35℃恒温培养箱中培养40h。待生长出较多的菌丝后，放置在4℃保鲜柜中保存，每两个月，按照本方法传代一次。
[0056] 3、寄生曲霉菌在发酵培养基上发酵
[0057] 寄生曲霉菌增殖培养：在生物安全柜中使用无菌接种环，用少许生理盐水冲洗上述已复活的寄生曲霉菌，并收集菌丝和孢子液，然后在多个增菌培养基上密集划线，置于35℃恒温培养箱中培养46h。长满菌丝的增菌培养基平板，可提供发酵所需的孢子和菌丝体。
[0058] 寄生曲霉菌菌丝和孢子的收集：在生物安全柜中，用5mL无菌生理盐水冲洗增菌培养基平板，然后用无菌玻璃棒小心刮取菌丝，收集菌丝和孢子于250ml锥形瓶中，用无菌生6
理盐水稀释寄生曲霉菌液，直至孢子密度为1.2×10cfu/mL。
[0059] 用一次性注射器吸取2mL寄生曲霉菌丝和孢子液，将菌液缓慢喷洒于实施例6配制好的固体培养基中，同时使用无菌玻璃棒混合均匀，盖上灭菌的透气棉塞，置于相对湿度85-90％，温度35℃的恒温培养箱中培养。
[0060] 每天观察记录锥形瓶中寄生曲霉菌的发酵状态，以及培养箱运行情况。
[0061] 每间隔3天，在生物安全柜中使用无菌玻璃棒将发酵培养基上下翻转，铺平发酵培养基,使培养基充分接触空气，同时喷洒5mL生理盐水，以补充发酵过程中水分的损失。盖上无菌棉塞，置于35℃恒温培养箱中继续培养。
[0062] 经过10-12天的发酵培养，锥形瓶中培养基彻底发酵，培养基结块，菌丝颜色呈淡黄色，发酵培养结束。将培养物于121-123℃，0.12MPa，灭菌20min，使用冷冻干燥机低压蒸发干燥、烘干粉碎，含有AFG1的培养物制备完毕。
[0063] 用高效液相色谱法(GB/T 5009.23-2006)检测发酵培养基中AFG1的含量。采用实施例6复合矿物盐和实施例10的固体发酵培养基，发酵培养12天，风干样中AFG1的浓度可达到28956ppb。
[0064] 采用实施例9、11、12的固体发酵培养基，在上述相同条件下进行发酵处理，风干培养基中AFG1浓度分别为25781ppb、23541ppb和21234ppb。
[0065] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例9的固体发酵培养基中复合矿物盐配方，在相同条件下发酵处理，风干样中AFG1的浓度分别为23671ppb、25553ppb和22738ppb。
[0066] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例10的固体发酵培养基中复合矿物盐配方，在相同条件下发酵处理，风干样中AFG1的浓度分别为25381ppb、21089ppb和25337ppb。
[0067] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例11的固体发酵培养基中复合矿物盐配方，在相同条件下发酵处理，风干样中AFG1的浓度分别为21609ppb、25855ppb和21708ppb。
[0068] 使用实施例5、7、8的复合矿物盐配方，分别替代实施例12的固体发酵培养基中复合矿物盐配方，在相同条件下发酵处理，风干样中AFG1的浓度分别为19691ppb、25358ppb和28031ppb。
[0069] 结论：现有技术的产毒浓度是344±11.5ppb本发明AFG1在产毒培养基的固体风干物中浓度可达28956ppb，相比现有技术的344±11.5ppb AFG1的产毒浓度发酵效价具有显著的进步。该方法发酵效率高，生产费用低，填补了我国AFG1的生产领域的空白，并可极大降低AFG1的毒理研究领域的研究成本。
[0070] 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
