[0041] 为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施的限制。
[0042] 实施例1
[0043] 本实施例提出一种特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料的制备方法，包括以下步骤：
[0044] T1、量取250mL氯仿(一种惰性致孔剂)，加入4.56g(20mmol)的4′-氯代白藜芦醇(一种替代模板分子)和6.40g(80mmol)的甲基丙烯酸(一种功能单体)，完全溶解，反应10min。
[0045] 在其他实施例中，惰性致孔剂也可以是乙腈、甲苯、氯仿和甲醇中的一种或多种；功能单体也可以是甲基丙烯酸、丙烯酸、亚甲基丁二酸、对乙烯基苯甲酸、甲基丙烯酰胺和N-异丙基丙烯酰胺中的一种或多种。
[0046] T2、加入10.40g(80mmol)的亲水性甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)、0.70g(4mmol)的N，N，N′，N″，N″-五甲基二亚乙基三胺(PMDETA)和0.90g(4mmol)的CuBr2，再加入79.28g(400mmol)的乙二醇二甲基丙烯酸酯(一种交联剂，英文缩写为EGDMA)和0.66g(4mmol)的偶氮二异丁腈(一种引发剂)，于0-4℃下通氮气反应30分钟后，密封，50℃下水浴反应48小时，反应得到的聚合物沉淀。
[0047] 在其他实施例中，交联剂也可以是三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯(TRIM)、N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBAA)、二乙烯基苯(DVB)、乙二醇二甲基丙烯酸酯中的一种或多种；引发剂还可以是偶氮二异丁腈、偶氮二异庚腈、异丙苯过氧化氢、叔丁基过氧化氢中的一种或多种。
[0048] T3、用500mL的冰醋酸-乙醇溶液(体积含量5％)进行索氏提取，重复提取4次，每次8小时。收集的沉淀物粉碎，过100目筛，用200mL的去离子水超声洗涤3～6次，每次10分钟，直至溶液为中性；再用200mL的乙醇超声洗涤2次，每次10分钟，最后30℃恒温真空干燥，即得亲水性吸附材料颗粒。
[0049] 本实施例制备的亲水性材料的红外光谱图，如图1所示，在2989cm-1处存在-C-H的伸缩振动峰；在1732cm-1处存在羰基(-C＝O-)的伸缩振动峰；在1259cm-1处存在-C-O-的伸缩振动峰；在1540cm-1和1409cm-1处存在-CH2-振动峰。
[0050] 本实施例制备的亲水性材料的热重分析结果，如图3所示，开始的12min以内温度在200℃以下，由于样品中的残留水分或溶剂挥发，造成的质量损失极少，为1.39％。随后的12～41min时间段质量损失较大，为88.07％，可能由于该亲水性材料受热分解所致。
[0051] 本实施例制备的亲水性材料的XRD图，如图5所示，在20～90°的2θ角范围内，在2θ＝30.19°、35.58°、43.35°、53.37°、56.95°和62.7°的衍射蜂处分别对应JCPDSno.19-629中的(220)、(311)、(400)、(422)、(511)和(440)晶面的衍射峰，属于立方尖晶石结构。
[0052] 本实施例还包括采用上述方法制备的亲水性材料。
[0053] 实施例2
[0054] 本实施例提出一种特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料的制备方法，包括以下步骤：
[0055] T1、量取250mL乙腈，加入4.56g(20mmol)的偶氮-白藜芦醇和11.77g(80mmol)的对乙烯基苯甲酸，完全溶解，反应10分钟。
[0056] T2、加入10.40g(80mmol)的亲水性甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)、0.70g(4mmol)的N，N，N′，N″，N″-五甲基二亚乙基三胺(PMDETA)和0.90g(4mmol)的CuBr2，再加入52.08g(400mmol)的DVB和0.36g(4mmol)的叔丁基过氧化氢，于0-4℃下通氮气反应30分钟后，密封，50℃下水浴反应48小时，反应得到的聚合物沉淀。
[0057] T3、用250mL的冰醋酸-乙醇溶液(冰醋酸体积含量10％)进行索氏提取，重复提取6次，每次6小时。收集的沉淀物粉碎，过100目筛，用200mL的去离子水超声洗涤3～6次，每次10分钟，直至溶液为中性；再用200mL的乙醇超声洗涤2次，每次10分钟，最后30℃恒温真空干燥，即得亲水性吸附材料颗粒。
[0058] 本实施例制备的亲水性材料的红外光谱图，如图2所示，在2989em-1处存在-C-H的伸缩振动峰；在1732em-1处存在羰基(-C＝O-)的伸缩振动峰；在1259em-1处存在-C-O-的伸缩振动峰；在1540cm-1和1409cm-1处存在-CH2-振动峰。本实施例制备的亲水性材料的热重分析结果，如图4所示，开始的12min以内温度在200℃以下，由于样品中的残留水分或溶剂挥发，造成的质量损失极少，为1.25％。随后的12～41min时间段质量损失较大，为91.17％，可能是由于该亲水性材料受热分解所致。
[0059] 本实施例制备的亲水性材料的XRD图，如图6所示，在20～90°的2θ角范围内，在2θ＝30.19°、35.58°、43.35°、53.37°、56.95°和62.7°的衍射蜂处分别对应JCPDSno.19-629中的(220)、(311)、(400)、(422)、(511)和(440)晶面的衍射峰，属于立方尖晶石结构。
[0060] 本实施例还包括采用上述方法制备的特异性识别白藜芦醇的亲水性材料。
[0061] 本发明还包括上述制备的特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料在提取白藜芦醇中的应用，具体如下：
[0062] 实施例3
[0063] 从刺葡萄籽中提取反式白藜芦醇结晶单体：
[0064] 本实施例提出采用实施例1制备的特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料提取白藜芦醇结晶单体的方法，包括以下步骤：
[0065] S1、准确称取粉碎过筛后的葡萄籽50g，具体为刺葡萄籽，于250mL具塞锥形瓶中，加入50mL温度在90～100℃的去离子水和10g亲水性吸附材料，搅拌均匀，再加入100mg/L的抗坏血酸溶液10mL，超声10分钟，将混合物彻底转移至内径2cm的玻璃柱(带活塞、筛板和磨口塞)。刺葡萄籽直接粉碎，通过温度较高的去离子水浸出白藜芦醇，亲水性吸附材料在混合溶液中，即可吸附白藜芦醇分子，将其保留在亲水性吸附材料的空穴中。辅以研磨、搅拌、超声提取或者微波萃取，白藜芦醇分子将更好的进入亲水性吸附材料的空穴。
[0066] S2、打开活塞将溶液放至混合物上界面的高度，加入200mL温度为80～100℃去离子水洗涤，待去离子水流出约100mL后，关闭活塞静置30分钟，打开活塞，废弃流出液至液面在混合物的上界面。
[0067] S3、再以200mL含1％的三氟乙酸的乙腈溶液洗脱，收集全部流出液，30℃下真空旋转蒸发浓缩至膏状，用少量乙腈溶解为刚好过饱和溶液。
[0068] S4、加入1mg纯度为98％的白藜芦醇纯品作为晶种，在-20℃条件下避光静置24小时结晶，过滤，收集结晶体以50mL去离子水洗涤2次，10mL乙醇喷洒冲洗表面，真空冷冻干燥，即得白藜芦醇结晶单体12.24mg，经高效液相色谱测定，色谱图如图7所示，其纯度为98.38％，通过与对照品的保留时间比对，对照品为检测用的反式白藜芦醇纯品，确定其结构为反式白藜芦醇。在其他实施例中，固体原料也可以是花生、虎杖、葡萄皮和葡萄籽中的一种或多种。
[0069] 实施例4
[0070] 本实施例提出采用实施例2制备的特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料提取白藜芦醇结晶单体的方法，包括以下步骤：
[0071] S1、称准确称取粉碎过筛后的葡萄籽100g，具体为刺葡萄籽，于500mL具塞锥形瓶中，加入100mL温度在90～100℃的去离子水和20g上述自制亲水性吸附材料，搅拌均匀，再加入100mg/L的抗坏血酸溶液20mL，超声20分钟，将混合物彻底转移至内径2cm的玻璃柱(带活塞、筛板和磨口塞).
[0072] S2、打开活塞将溶液放至混合物上界面的高度，加入200mL温度为80～100℃的去离子水洗涤，待液体流出约100mL后，关闭活塞静置30分钟，打开活塞，废弃流出液至液面在混合物的上界面。
[0073] S3、再以200mL含5％冰醋酸的乙腈溶液洗脱，收集全部流出液，30℃下真空旋转蒸发浓缩至膏状，用少量乙腈溶解为刚好过饱和溶液。
[0074] S4、加入2mg纯度为98％的白藜芦醇纯品作为晶种，在-20℃条件下静置30小时结晶，过滤，收集结晶体以50mL去离子水洗涤2次，10mL乙醇喷洒冲洗表面，真空冷冻干燥，即得白藜芦醇结晶单体20.09mg，经高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC法)测定，色谱图如图8所示，其纯度为90.18％，通过与对照品的保留时间比对，对照品为检测用的反式白藜芦醇纯品，确定其结构为反式白藜芦醇。
[0075] 实施例5
[0076] 从红葡萄酒中提取反式白藜芦醇结晶单体：
[0077] 本实施例提出采用实施例1制备的特异性识别白藜芦醇的亲水性吸附材料提取白藜芦醇结晶单体的方法，包括以下步骤：
[0078] S1、称取10.0g亲水性吸附材料与刺葡萄红酒500mL(经高效液相色谱检测该刺葡萄酒中白藜芦醇含量为6.89mg/L)混合均匀，超声辅助提取10分钟，湿法装填入内径2cm的玻璃柱(带活塞、筛板和磨口塞)。
[0079] S2、打开活塞弃去流出液，加入200mL去离子水洗涤，待流出约100mL液体后，关闭活塞，静置30分钟。
[0080] S3、再以200mL含5％冰醋酸的乙腈溶液洗脱，收集全部流出液，30℃下真空旋转蒸发浓缩至膏状，用少量乙腈溶解为刚好过饱和溶液。
[0081] S4、加入0.5mg纯度为98％的白藜芦醇纯品作为晶种，在-20℃条件下静置48小时结晶，过滤，收集结晶体以50mL去离子水洗涤2次，10mL乙醇喷洒冲洗表面，真空冷冻干燥，即得白藜芦醇结晶单体3.02mg，经高效液相色谱测定，色谱图如图9所示，其纯度为86.33％，提取率为87.66％。通过与对照品的保留时间比对，对照品为检测用的反式白藜芦醇纯品，确定其结构为反式白藜芦醇。
[0082] 需要说明的是，上述提取方法中，用到的吸附柱为玻璃柱，该玻璃柱中间粗两头细，装填和洗脱都简单，不必加压，操作简便且成本低，用温度为80～100℃的去离子水洗涤除去其他的水溶性物质，再用酸性乙腈洗脱下吸附材料空穴中滞留的反式白藜芦醇分子。
[0083] 本发明在提取白藜芦醇的过程中，将固态原料(如葡萄籽、虎杖等)直接粉碎，通过高温水浸出白藜芦醇，亲水性吸附材料在混合溶液中，即可吸附反式白藜芦醇分子，将其保留在亲水性吸附材料的空穴中。辅以研磨、搅拌、超声提取或者微波萃取，反式白藜芦醇分子将更好的进入亲水性吸附材料的空穴；需要说明的是，在替代模板分子存在的情况下，功能单体和交联剂在合适的溶剂中发生聚合反应，形成一种高度交联的三维网状聚合物，接着将模板分子脱去，就形成了与模板大小、形状及化学功能相匹配的孔穴。
[0084] 通过科学可行的方法，从葡萄籽、葡萄皮、红葡萄酒中经提取、分离、纯化、结晶等简单步骤，制备高纯度的天然反式白藜芦醇结晶单体，方法稳定性好、提取率及产品纯度高；简化了现有的制备工艺，制备周期短，制备量大，成本低；自制的高选择性材料对反式白藜芦醇分子具有特异的选择性识别能力，且可循环使用；大大减少了有毒有害有机溶剂的用量，符合环保、安全的生产要求，具有较好的经济效益和社会价值。此外，该方法获得的反式白藜芦醇单体为纯天然植物体来源，避免了生物合成或化学合成方法提取白藜芦醇的各类弊端。
[0085] 本发明以水作为溶剂提取白藜芦醇，而不是采用有机溶剂，在确保提取纯度的同时，绿色环保，不会在后续食品的加工应用中带来溶剂残留的问题。在本发明中，反式白藜芦醇不稳定，在自然光照环境下会转换为顺式白藜芦醇，活性大大降低，加入的抗坏血酸溶液能够起到稳定剂的作用，防止白藜芦醇被氧化或转化。
[0086] 本发明提供的提取白藜芦醇的方法不需要较为昂贵的专用设备，成本低廉；不需要大量的有机溶剂，对环境友好；且易于实现工业化大量生产。
[0087] 除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
[0088] 综上所述，本发明提取白藜芦醇的方法采用新型的自制亲水性吸附材料，从天然植物中特异性识别白藜芦醇分子，通过分离条件的优化制备高纯度的白藜芦醇结晶单体，主要有一下几个方面的应用：1.为植物提取物、医药品研发等生产企业与研究机构，提供白藜芦醇单体作为标准品/对照品进行产品的分析检测；2.为功能性食品、保健品、药品的剂量和效果研究，提供高纯度白藜芦醇产品；3.为葡萄、花生、虎杖等植物的高附加值深加工产品开发提供支撑。
[0089] 以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
