[0036] 下面详细描述本发明的实施例,所述实施例的示例旨在用于解释本发明,而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。
[0037] 实施例1
[0038] 按照如图1所示的工艺流程制备含岩藻黄醇的视力保护功能食品,具体包括以下步骤:
[0039] (1)岩藻黄醇制备:将岩藻黄素溶于pH为7.0的含2wt%大豆磷脂的磷酸缓冲液中,加入胆固醇酯酶(胆固醇酯酶与岩藻黄素的质量比为1:1000),混匀,充入氮气,在避光37℃环境下反应12h,经减压浓缩、真空干燥后得到富含岩藻黄醇的干粉。
[0040] (2)岩藻黄醇‑蛋白纳米颗粒制备:配制浓度为0.5wt%的牛血清白蛋白水溶液,并用氢氧化钠调节pH值至11,然后加入油酸(油酸与牛血清白蛋白的质量比为1:18)搅拌均匀并超声30分钟,得到载体蛋白溶液;将富含岩藻黄醇的干粉(岩藻黄醇与牛血清白蛋白的质量比为1:8)用少量碱性乙醇助溶后,加入到载体蛋白溶液中,搅拌条件下反应30分钟,用醋酸将混合溶液的pH值调回至7.0(自组装),喷雾干燥,得到岩藻黄醇‑牛血清白蛋白纳米颗粒。经马尔文纳米粒度仪分析,该纳米颗粒的平均粒径为50nm。
[0041] (3)以岩藻黄醇‑牛血清白蛋白纳米颗粒5重量份、牡蛎肽(分子量为≤5000Da)10重量份、降解海带硫酸多糖(分子量为≤4000Da,硫酸基团含量为28wt%)0.1重量份的比例称取上述各组分,组方中加入适量硬脂酸镁和淀粉,混匀,过筛后用全自动胶囊填充机填充入硬胶囊,每粒装量0.5g,灭菌、包装,即得胶囊类功能食品。
[0042] 实施例2
[0043] 按照如图1所示的工艺流程制备含岩藻黄醇的视力保护功能食品,具体包括以下步骤:
[0044] (1)岩藻黄醇制备:将岩藻黄素溶于pH为6.0的0.5wt%胆汁酸盐的磷酸缓冲液中,加入胆固醇酯酶(胆固醇酯酶与岩藻黄素的质量比为1:1000),混匀,充入氮气,在避光37℃环境下反应12h,经减压浓缩、真空干燥后得到富含岩藻黄醇的干粉。
[0045] (2)岩藻黄醇‑蛋白纳米颗粒制备:配制浓度为0.5wt%的乳清蛋白水溶液,并用氢氧化钠调节pH值至11,然后加入亚油酸(亚油酸与乳清蛋白的质量比为1:22)搅拌均匀,并超声30分钟,得到载体蛋白溶液;将富含岩藻黄醇的干粉(岩藻黄醇与乳清蛋白的质量比为1:10)用少量碱性乙醇助溶后,加入到载体蛋白溶液中,搅拌条件下反应30分钟,用柠檬酸将混合溶液的pH值调回至7.0(自组装),喷雾干燥,得到岩藻黄醇‑乳清蛋白纳米颗粒。经马尔文纳米粒度仪分析,该纳米颗粒的平均粒径为245nm。
[0046] (3)以岩藻黄醇‑乳清蛋白纳米颗粒12.5重量份、牡蛎肽(分子量为≤5000Da)20重量份、降解麒麟菜硫酸多糖(分子量为≤4000Da,硫酸基团含量为32wt%)0.55重量份的比例称取上述各组分,然后加入适量的糊精、淀粉、微晶纤维素和乳糖中的一种或几种作为辅料,混合均匀,用适量70%(v/v)乙醇润湿,制软材,过30目筛制粒,于70‑80℃干燥,用60目筛整粒,压片,得片剂,每片0.2g,灭菌、包装,即得片剂类功能食品。
[0047] 实施例3
[0048] 按照如图1所示的工艺流程制备含岩藻黄醇的视力保护功能食品,具体包括以下步骤:
[0049] (1)岩藻黄醇制备:将岩藻黄素溶于pH为8.0的0.1wt%吐温的磷酸缓冲液中,加入胆固醇酯酶(胆固醇酯酶与岩藻黄素的质量比为1:1000),混匀,充入氮气,在避光37℃环境下反应12h后,经减压浓缩、真空干燥后得到富含岩藻黄醇的干粉。
[0050] (2)岩藻黄醇‑蛋白纳米颗粒制备:配制浓度为0.5wt%的玉米醇溶蛋白水溶液,并用氢氧化钠调节pH值至11,然后加入棕榈酸(棕榈酸与玉米醇溶蛋白的质量比为1:20)搅拌均匀,并超声30分钟,得到载体蛋白溶液;将富含岩藻黄醇的干粉(岩藻黄醇与玉米醇溶蛋白的质量比为1:10)用少量碱性乙醇助溶后,加入到载体蛋白溶液中,搅拌条件下反应30分钟,用葡萄糖酸内酯将混合溶液的pH值调回至7.0(自组装),喷雾干燥,得到岩藻黄醇‑玉米醇溶蛋白纳米颗粒。经马尔文纳米粒度仪分析,该纳米颗粒的平均粒径为500nm。
[0051] (3)以岩藻黄醇‑玉米醇溶蛋白纳米颗粒20重量份、牡蛎肽(分子量为≤5000Da)30重量份、降解海参硫酸多糖(分子量为≤4000Da,硫酸基团含量为20wt%)1重量份的比例称取上述各组分,然后加入适量可溶性淀粉、糊精、蔗糖、乳糖和甘露醇其中一种或几种,用适量70%(v/v)乙醇润湿,制软材,过20目筛制粒,70‑80℃干燥,60目整粒,灭菌、包装,即得冲剂类功能食品。
[0052] 实施例4
[0053] 按照如图1所示的工艺流程制备含岩藻黄醇的视力保护功能食品,具体包括以下步骤:
[0054] (1)岩藻黄醇制备:将岩藻黄素溶于pH为7.0的1wt%蔗糖脂肪酸酯的磷酸缓冲液中,加入胆固醇酯酶(胆固醇酯酶与岩藻黄素的质量比为1:1000),混匀,充入氮气,在避光37℃环境下反应12h,经减压浓缩、真空干燥后得到富含岩藻黄醇的干粉。
[0055] (2)岩藻黄醇‑蛋白纳米颗粒制备:配制浓度为0.5wt%的大豆蛋白水溶液,并用氢氧化钠调节pH值至11,然后加入二十二碳六烯酸(二十二碳六烯酸与大豆蛋白的质量比为1:20)搅拌均匀并超声30分钟,得到载体蛋白溶液;将富含岩藻黄醇的干粉(岩藻黄醇与大豆蛋白的质量比为1:12)用少量碱性乙醇助溶后,加入到载体蛋白溶液中,搅拌条件下反应
30分钟,用苹果酸将混合溶液的pH值调回至7.0(自组装),喷雾干燥,得到岩藻黄醇‑大豆蛋白纳米颗粒。经马尔文纳米粒度仪分析,该纳米颗粒的平均粒径为378nm。
[0056] (3)以岩藻黄醇‑大豆蛋白纳米颗粒5重量份、牡蛎肽(分子量为≤5000Da)15重量份、降解鱼骨硫酸多糖(分子量为≤4000Da,硫酸基团含量为23wt%)0.75重量份的比例称取上述各组分,然后溶于水中,加入适量的甜味剂和稳定剂,混匀,均质,过滤,杀菌,包装,即得饮料类功能食品。
[0057] 对比例1
[0058] 按照实施例1的方法制备胶囊类功能食品,不同的是,不包括步骤(1)并将步骤(2)的富含岩藻黄醇的干粉采用相同重量份的岩藻黄素替代,得到参比胶囊类功能食品。
[0059] 对比例2
[0060] 按照实施例1的方法制备胶囊类功能食品,不同的是,步骤(3)中,将牡蛎肽采用相同重量份的降解海带硫酸多糖替代,得到参比胶囊类功能食品。
[0061] 功能评价试验:
[0062] (1)岩藻黄醇在视器官中的靶向运输评价
[0063] 受试样品:本发明实施例1中得到的岩藻黄醇‑牛血清白蛋白纳米颗粒。
[0064] 样品处理:取实施例1所得岩藻黄醇‑牛血清白蛋白纳米颗粒按质量体积比1:10溶解于去离子水中,即为供试液。
[0065] 实验动物:SPF级雌性ICR小鼠,15‑20g,购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。小鼠基础饲料成分:碳水化合物64%,蛋白质21%,脂肪4%,纤维5%,水分6%。上述饲料均购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。饲养室温度:23±2℃,相对湿度55±5%。
[0066] 动物分组及处理方法:小鼠适应性喂养1周后,按照体重随机分为2组,每组10只,分别为空白组(灌胃去离子水)、处理组(灌胃供试液)。每只小鼠每次灌胃200μL供试液或去离子水,每天1次,连续灌胃2周后,摘取小鼠眼球,经液氮冷冻后研磨,并用体积比为1:1的乙酸乙酯‑石油醚混合溶液提取3次,合并提取液,离心后取上清液,用氮吹法浓缩至50μL,用高效液相色谱(HPLC)分析浓缩液岩藻黄醇的含量变化。
[0067] 实验结果:
[0068] HPLC分析空白组和处理组小鼠眼球中的岩藻黄醇的色谱图分别见图2和图3。从图2和图3可以看出,根据岩藻黄醇浓度及其HPLC峰面积,得到岩藻黄醇的定量分析回归方程,结合处理组的峰面积,计算得到浓缩液中的岩藻黄醇浓度达到了379.6pmol/mL。说明以岩藻黄醇‑蛋白纳米颗粒为视力保护功能食品的核心功能成分能有效实现岩藻黄醇在视器官的靶向递送,从而达到保护视力的效果。
[0069] (2)视器官总抗氧化能力评价
[0070] 受试样品:实施例1‑实施例4以及对比例1‑对比例2中得到的配方产品。
[0071] 样品处理:将配方产品按质量体积比1:10直接溶解于去离子水中,即为供试液。
[0072] 实验动物:SPF级雌性ICR小鼠,15‑20g,购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。小鼠基础饲料成分:碳水化合物64%,蛋白质21%,脂肪4%,纤维5%,水分6%。上述饲料均购于上海斯莱克实验动物有限责任公司。饲养室温度:23±2℃,相对湿度55±5%。
[0073] 动物分组及处理方法:小鼠适应性喂养1周后,按照体重随机分为7组,每组10只,分别为空白组(灌胃去离子水)和处理组(灌胃供试液)。每只小鼠每次灌胃200μL供试液或去离子水,每天1次,连续灌胃2周后,摘取小鼠眼球,用抗氧化试剂盒分析视器官总抗氧化能力的变化。
[0074] 实验结果:
[0075] 结果表明,经过连续2周灌胃,实施例1‑实施例4以及对比例1‑对比例2所得产物的总抗氧化能力分别提高了59.6%±2.1%、62.3%±1.9%、61.8%±3.7%、64.8%±2.7%、38.3%±1.1%、41.1%±1.9%。其中,空白组和实施例1所得产品中小鼠眼球总抗氧化能力结果见图4。从图4可以看出,经过连续2周灌胃,空白组中小鼠眼睛的总抗氧化能力为9.42U/mL,实施例1所得产品组中小鼠眼睛的总抗氧化能力为15.03U/mL,比空白组提高了59.6%±2.1%。由此可以说明,本发明所提供的视力保护功能食品配方能有效提高视器官的抗氧化应激能力,减少近视发生及降低视网膜疾病的发生风险。
[0076] 以上详细描述了本发明的优选实施方式,但是,本发明并不限于上述实施方式中的具体细节,在本发明的技术构思范围内,可以对本发明的技术方案进行多种简单变型,这些简单变型均属于本发明的保护范围。
[0077] 另外需要说明的是,在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征,在不矛盾的情况下,可以通过任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复,本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
[0078] 此外,本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合,只要其不违背本发明的思想,其同样应当视为本发明所公开的内容。