[0024] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
[0025] 实施例1
[0026] 一种壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜的制备方法，包括如下步骤：
[0027] 1、将0.7g大豆卵磷脂、0.2g胆固醇与0.4ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以5ml/min的速度将其注入到6倍体积的含3g/L吐温80的水中，再以11000r/min速度均质后，用15g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/6体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0028] 2、将1g相对分子量为30kDa，脱乙酰度为90％的壳聚糖粉末、1.5g苯磺酰氯、1.5g氢氧化钠、0.2g 15‑冠醚‑5和0.15g DMAP加入60ml二氯甲烷在50℃反应8h，再用浓度为8g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0029] 3、取1g步骤2得到的沉淀、0.15g相对分子质量为106的聚氧化乙烯和0.4ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压15kV，流速0.6ml/h，接收距离15cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜A，该壳聚糖改性纳米纤维膜即为壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜。采用扫描电镜观察该纳米纤维膜，结果如图1所示。
[0030] 实施例2
[0031] 一种壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜的制备方法，包括如下步骤：
[0032] 1、将0.5g大豆卵磷脂、0.1g胆固醇与0.2ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以3ml/min的速度将其注入到5倍体积的含2g/L吐温20的水中，再以10000r/min速度均质后，用10g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/5体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0033] 2、将1g相对分子量为20kDa，脱乙酰度为80％的壳聚糖粉末、1g苯磺酰氯、1g氢氧化钠、0.1g 15‑冠醚‑5和0.1g DMAP加入50ml二氯甲烷在40℃反应6h，再用浓度为5g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0034] 3、取1g步骤2得到的沉淀、0.1g相对分子质量为105的聚氧化乙烯和0.2ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压12kV，流速0.5ml/h，接收距离
12cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜B，该壳聚糖改性纳米纤维膜即为壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜。
[0035] 实施例3
[0036] 一种壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜的制备方法，包括如下步骤：
[0037] 1、将0.8g大豆卵磷脂、0.3g胆固醇与0.5ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以7ml/min的速度将其注入到8倍体积的含5g/L司盘80的水中，再以12000r/min速度均质后，用20g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/8体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0038] 2、将1g相对分子量为50kDa，脱乙酰度为100％的壳聚糖粉末、2g苯磺酰氯、1.8g氢氧化钠、0.3g 18‑冠醚‑6和0.2g DMAP加入75ml二氯甲烷在60℃反应10h，再用浓度为10g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0039] 3、取1g步骤2得到的沉淀、0.2g相对分子质量为107的聚氧化乙烯和0.5ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压18kV，流速1ml/h，接收距离18cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜C，该壳聚糖改性纳米纤维膜即为壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜。
[0040] 对比例1(苯磺酰氯改成氯乙酸)
[0041] 一种壳聚糖改性纳米纤维膜的制备方法，包括如下步骤：
[0042] 1、将0.7g大豆卵磷脂、0.2g胆固醇与0.4ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以5ml/min的速度将其注入到6倍体积的含3g/L吐温80的水中，再以11000r/min速度均质后，用15g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/6体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0043] 2、将1g相对分子量为30kDa，脱乙酰度为90％的壳聚糖粉末、1.5g氯乙酸、1.5g氢氧化钠、0.2g 15‑冠醚‑5和0.15g DMAP加入60ml二氯甲烷在50℃反应8h，再用浓度为8g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0044] 3、取1g步骤2得到的沉淀、0.15g相对分子质量为106的聚氧化乙烯和0.4ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压15kV，流速0.6ml/h，接收距离15cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜D。
[0045] 对比例2(冠醚改成12‑冠醚‑4)
[0046] 一种壳聚糖改性纳米纤维膜的制备方法，包括如下步骤：
[0047] 1、将0.7g大豆卵磷脂、0.2g胆固醇与0.4ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以5ml/min的速度将其注入到6倍体积的含3g/L吐温80的水中，再以11000r/min速度均质后，用15g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/6体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0048] 2、将1g相对分子量为30kDa，脱乙酰度为90％的壳聚糖粉末、1.5g苯磺酰氯、1.5g氢氧化钠、0.2g 12‑冠醚‑4和0.15g DMAP加入60ml二氯甲烷在50℃反应8h，再用浓度为8g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0049] 3、取1g步骤2得到的沉淀、0.15g相对分子质量为106的聚氧化乙烯和0.4ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压15kV，流速0.6ml/h，接收距离15cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜E。
[0050] 对比例3(去聚氧化乙烯)
[0051] 一种壳聚糖改性纳米纤维膜的制备方法，包括如下步骤：
[0052] 1、将0.7g大豆卵磷脂、0.2g胆固醇与0.4ml松油烯‑4‑醇加入到20ml氯仿中，充分搅拌使其完全溶解，室温下旋蒸除去氯仿，然后用注射器以5ml/min的速度将其注入到6倍体积的含3g/L吐温80的水中，再以11000r/min速度均质后，用15g/L聚乙烯醇6000溶液透析浓缩至1/6体积，制得松油烯‑4‑醇脂质体；
[0053] 2、将1g相对分子量为30kDa，脱乙酰度为90％的壳聚糖粉末、1.5g苯磺酰氯、1.5g氢氧化钠、0.2g 15‑冠醚‑5和0.15g DMAP加入60ml二氯甲烷在50℃反应8h，再用浓度为8g/L的氢氧化钠溶液洗涤反应物后离心收集沉淀；
[0054] 3、取1g步骤2得到的沉淀和0.4ml松油烯‑4‑醇脂质体溶于50ml 90％v/v乙酸溶液，充分搅拌，在电压15kV，流速0.6ml/h，接收距离15cm的条件下静电纺丝成壳聚糖改性纳米纤维膜F。
[0055] 测试例：抗菌测试
[0056] 取1g上述实施例1‑3和对比例1‑3制备的纳米纤维膜放入透析袋中置于200ml PBS缓冲液，磁力搅拌进行释放。经过一段时间释放后取出材料，利用AATCC100‑2004标准检验材料对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌效果，测试结果如图2所示，图2中左图为对金黄色葡萄球菌的抑菌时间曲线对比图，图2中右图为对大肠杆菌的抑菌时间曲线对比图。图2的左图和右图中，A为实施例1的抑菌时间曲线，B为实施例2的抑菌时间曲线，C为实施例3的抑菌时间曲线，D为对比例1的抑菌时间曲线，E为对比例2的抑菌时间曲线，F为对比例3的抑菌时间曲线。
[0057] 根据图2可以发现实施例1‑3制备的纳米纤维膜在释放至21d后仍能保持对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌较佳的抑菌效果，而对比例1‑3制备的纳米纤维膜释放3d后对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌率均降至60％以下，释放至9d后对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌可检测的抑菌效果消失。结果说明本发明制备的纳米纤维膜具有更加优良的缓释抗菌性能。
[0058] 本发明提供了一种壳聚糖改性纳米纤维缓释抗菌膜及其制备方法的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。
