一种金乌贼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途   0    0

本发明公开了一种金乌贼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途，该抗氧化肽的氨基酸序列为Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met（APPENGMAQM），分子量为1045.21Da。本发明制备工艺科学合理，酶解过程易监控，制得的抗氧化肽具有抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品和食品添加剂等应用。

1.一种金乌贼蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met ，分子量为1045.21 Da。

2.一种权利要求1所述的金乌贼蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）将洗净、去内壳的金乌贼肉用高速组织捣碎机匀浆，然后按照料液比1g:3~5mL加入异丙醇，于35~40℃中脱脂18~24 h，然后于4000~5000 rpm离心10~15min除去异丙醇，收集脱脂金乌贼肉固形物；
2）按固液比1g:1~3mL向步骤1）所述脱脂金乌贼肉固形物中加入0.2 mol/L磷酸盐缓冲液，调节pH为6.5~7.5，得到混合液；
3）将步骤2）所述混合液温度升至50~60℃搅拌预热10~15 min，以步骤1）所述脱脂金乌贼肉固形物的质量为基准加入0.8~1.2%的木瓜蛋白酶，在50~60℃酶解4~6h，得到酶解产物；
4）将步骤3）所得的酶解产物升温至90~95℃并恒温保持10~15min后，冷却至室温，然后于4000~5000 rpm离心10~15min，得到酶解液，冻干得酶解物干粉；再将酶解物干粉依次经超滤和层析纯化，得到抗氧化肽；
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所述步骤3）中的木瓜蛋白酶的酶活力≥1.5×10 U/g；
所述步骤4）的超滤和层析的具体过程为：
超滤：将酶解物干粉溶于pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成10~15 mg/mL的溶液，于0.1 ~ 0.15 MPa的工作压力和20 ~ 25 ℃的温度下采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，冻干得超滤酶解物干粉；
层析：将上述超滤酶解物干粉用pH 6.5~7.5的磷酸盐缓冲液配成8~12 mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离，用pH 6.5~7.5磷酸盐缓冲液进行洗脱，根据220 nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶层析酶解物，冻干得凝胶层析酶解物干粉；将上述凝胶层析酶解物干粉用pH 6.5~7.5磷酸盐缓冲液配成45~55 μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行纯化，根据抗氧化活性得1个高活性抗氧化肽Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于所述反相高效液相色谱条件为：进样量15~25 μg；色谱柱为Zorbax C18；流动相：30%乙腈；洗脱速度1.0 mL/min；紫外检测波长220 nm。

4.一种权利要求1所述的金乌贼蛋白抗氧化肽作为食品添加剂的应用。

5.一种权利要求1所述的金乌贼蛋白抗氧化肽用于制备药物或保健食品的应用，其特征在于所述的金乌贼蛋白抗氧化肽具有清除DPPH 自由基、羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基的作用或具有脂质过氧化抑制的作用。